miR-223通过调控Keap1/Nrf2/ARE信号通路对前列腺癌细胞损伤的影响

目的探究微小RNA-223(miR-223)通过调控Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路对前列腺癌细胞损伤的影响。方法培养前列腺癌细胞株PC3,且随机将其分为对照组、下调miR-223组、上调miR-223组。探究miR-223表达、细胞增殖率、细胞迁移数、细胞侵袭数、凋亡率、Keap1/Nrf2/ARE信号通路表达量的变化。结果与对照组比较,下调miR-223组的细胞侵袭数、细胞迁移数、24、48、72 h细胞增殖率、Nrf2、ARE表达上升,miR-223、Keap1、凋亡率表达降低(P<0.05);与下调miR-223组比较,上调miR-223组的24、48、72 h细胞增殖率、细胞侵袭数、细胞迁移数、ARE、Nrf2表达下降,miR-223、凋亡率、Keap1表达升高(P<0.05)。结论调节miR-223可有效改善前列腺细胞损伤,其机制可能与Keap1/Nrf2/ARE信号通路有关。

Keap1-Nrf2-ARE通路对老年COPD合并重症呼吸衰竭患者病死风险的预测价值

目的探讨Keap1-Nrf2-ARE通路对老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)合并重症呼吸衰竭患者死亡风险的预测价值。方法选取河南科技大学附属许昌市中心医院2020年1月至2022年6月收治的124例老年COPD合并重症呼吸衰竭患者为研究组,选取同期124例老年COPD未合并重症呼吸衰竭患者为对照组,根据治疗28 d的预后情况将研究组分为病死(42例)和生存(82例)2个亚组。比较两组入院时、不同预后患者入院时、治疗7 d、14 d后外周血Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2(Nrf2)、抗氧化反应原件(ARE)表达水平及急性生理学与慢性健康状况Ⅱ(APACHEⅡ)评分,分析入院时外周血Keap1、Nrf2、ARE表达水平与APACHEⅡ评分及合并重症呼吸衰竭的相关性,偏回归分析老年COPD合并重症呼吸衰竭患者病死的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析外周血Keap1、Nrf2、ARE表达水平对老年COPD合并重症呼吸衰竭患者病死的预测价值。结果研究组入院时外周血Keap1、Nrf2、ARE表达水平低于对照组,APACHEⅡ评分高于对照组(P<0.05);入院时外周血Keap1、Nrf2、ARE表达水平与APACHEⅡ评分及合并重症呼吸衰竭均呈负相关(P<0.05)。治疗7、14 d后病死患者外周血Keap1、Nrf2、ARE表达水平低于生存患者(P<0.05)。logistic回归分析结果显示,治疗7、14 d后外周血Keap1、Nrf2、ARE表达水平为老年COPD合并重症呼吸衰竭患者病死的保护因素(P<0.05)。ROC分析结果显示,治疗7、14 d后外周血Keap1、Nrf2、ARE表达水平联合预测老年COPD合并重症呼吸衰竭患者病死的曲线下面积(AUC)分别为0.740、0.818,均高于单一指标预测(P<0.05)。结论Keap1、Nrf2、ARE参与老年COPD合并重症呼吸衰竭发生发展,且在辅助临床预测病死风险方面具有较高效能。

急性脑梗死患者外周血Keap1⁃Nrf2/ARE信号通路变化与预后的相关性分析

目的分析急性脑梗死(ACI)患者外周血Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白⁃1(Keap1)⁃核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路变化与预后的相关性。方法选取2020年6月—2022年3月安徽医科大学附属巢湖医院神经内科诊治ACI患者110例作为研究对象,根据溶栓后3个月的改良Rankin量表(mRs)评分分为近期预后良好组与近期预后不良组,随访1年ACI是否复发分为远期预后良好组与远期预后不良组,比较不同近远期预后组溶栓前、溶栓后7 d、溶栓后3个月外周血Keap1、醌氧化还原酶1(NQO1)、Nrf2、ARE蛋白相对表达量、神经功能缺损(NIHSS)评分,分析各蛋白与NIHSS评分的相关性,受试者工作特征曲线(ROC)评价各蛋白对预后的预测价值。结果110例ACI患者,近期预后良好患者78例,近期预后不良患者32例;随访1年,失访6例,远期预后良好患者83例,远期预后不良患者21例。近远期预后不良组溶栓后7 d、3个月Keap1蛋白相对表达量、NIHSS评分高于近远期预后良好组,NQO1、Nrf2、ARE蛋白相对表达量低于近远期预后良好组(P均<0.001);溶栓后7 d、3个月Keap1蛋白相对表达量与NIHSS评分呈正相关(r=0.684、0.702,P均<0.001),NQO1、Nrf2、ARE蛋白相对表达量与NIHSS评分呈负相关(7 d:r=-0.615、-0.628、-0.609,3个月:r=-0.631、-0.657、-0.629,P均<0.001);溶栓后7 d的Keap1、NQO1、Nrf2、ARE蛋白相对表达量及四者联合预测近期预后的AUC为0.803、0.717、0.800、0.765、0.907,四者联合优于各蛋白单独预测(Z/P=2.105/0.026、2.413/0.004、2.113/0.021、2.205/0.016);溶栓后3个月的Keap1、NQO1、Nrf2、ARE蛋白相对表达量及四者联合预测远期预后不良的AUC为0.766、0.765、0.812、0.767、0.927,四者联合优于各蛋白单独预测(Z/P=2.238/0.010、2.241/0.008、2.115/0.019、2.231/0.012);溶栓后3个月的外周血Keap1⁃Nrf2/ARE蛋白预测远期预后的AUC与溶栓后7 d的外周血Keap1⁃Nrf2/ARE蛋白预测近期预后的AUC比较,差异无统计学意义(Z/P=0.102/0.563)。结论ACI患者外周血Keap1⁃Nrf2/ARE信号通路变化与神经功能缺损程度、近远期预后显著相关,可从相关蛋白含量变化的角度有效预测近远期预后情况。

胃癌组织Keap-1、Nrf2蛋白表达及与患者远期生存的关系

目的探讨胃癌组织Kelch样环氧氟丙烷相关蛋白-1(Keap-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白表达及其与患者远期生存的关系。方法回顾性分析2015年1月至2017年2月行根治性手术治疗的147例胃癌患者的临床资料,均于术中留取胃癌组织与癌旁正常组织(距癌≥5 cm),通过免疫组化法检测胃癌组织和相应癌旁正常组织中Keap-1、Nrf2蛋白表达情况并进行比较;术后随访5年,统计患者生存情况,采用Kaplan-Meier法绘制患者生存曲线,比较胃癌组织Keap-1、Nrf2蛋白表达阳性者与表达阴性者的中位生存时间;另依据术后5年随访期间患者生存情况,将其分为生存组和死亡组,比较2组胃癌组织中Keap-1、Nrf2蛋白表达,采用Cox比例风险回归模型分析影响胃癌患者远期生存的因素。结果胃癌组织中Keap-1、Nrf2蛋白阳性表达率均高于癌旁正常组织(P<0.05);147例胃癌患者在5年随访中,共死亡109例,生存38例,生存率25.85%;经Kaplan-Meier生存曲线分析显示,Keap-1蛋白阳性表达患者中位生存期低于Keap-1蛋白阴性表达患者(P<0.01),Nrf2蛋白阳性表达患者中位生存期低于Nrf2蛋白阴性表达患者(P<0.01)。死亡组患者胃癌组织中的Keap-1、Nrf2蛋白阳性表达率均高于生存组(P<0.05);经Cox比例风险回归模型分析,肿瘤≥4.5 cm、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、低分化程度、淋巴结转移、术后未辅助化疗、Keap-1、Nrf2蛋白阳性表达均是影响胃癌患者远期生存的危险因素(P<0.05)。结论胃癌组织中Keap-1、Nrf2蛋白异常表达均与患者远期生存关系密切,为临床研究提供新方向;此外,肿瘤≥4.5 cm、低分化、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、淋巴结转移、术后未辅助化疗也是影响胃癌患者远期生存情况的危险因素。临床工作中可针对上述危险因素提前预防,加强治疗,以改善患者远期生存情况。

紫草素通过Keap1/Nrf2通路对膀胱癌细胞恶性增殖及凋亡的影响及作用机制

目的探讨紫草素对膀胱癌(BC)细胞T24恶性增殖、凋亡的影响及可能作用机制。方法含不同浓度紫草素培养液(0、10、20、40、80μmoL·L^(-1))培养对数生长期T24细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率;平板克隆实验检测细胞集落形成能力;流式细胞术检测细胞凋亡水平;荧光探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)检测细胞内活性氧(ROS)生成水平;比色法检测细胞丙二醛(MDA)及还原型谷胱甘肽(GSH)含量;RT-qPCR技术检测细胞中Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA相对表达;Western blot法检测细胞中Keap1、Nrf2、血红素加氧酶1(HO-1)及醌氧化还原酶1(NQO1)蛋白相对表达量。结果T24细胞存活率、集落形成数、GSH含量、Nrf2 mRNA和蛋白、HO-1及NQO1蛋白相对表达量均随紫草素作用浓度增加而降低(P<0.05);紫草素作用效果呈浓度依赖性(P<0.05)。结论紫草素可抑制BC细胞恶性增殖并促进其凋亡,其作用机制可能与抑制Keap1/Nrf2通路激活,提高细胞内ROS水平进而促进BC细胞内氧化还原稳态失衡有关。

岩藻黄素对小鼠非酒精性脂肪性肝病的修复作用

目的:探究岩藻黄素对高脂饮食诱导的C57BL/6小鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的修复作用及其机制。方法:将52只C57BL/6小鼠随机分成4组,正常组14只,其余为实验组,实验组给予8周的高脂饮食喂养之后,再分为模型组、岩藻黄素低剂量和高剂量组,给予灌胃6周,每日1次。每周记录小鼠的体质量,第14周结束时小鼠禁食12 h后全部处死。后续分别测定各组小鼠血清中谷草转氨酶(aspartate aminotransferase,AST)、谷丙转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)活力,总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(lowdensitylipoproteincholesterol,LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(highdensitylipoproteincholesterol,HDL-C)、游离脂肪酸、脂联素和瘦素含量;检测肝脏组织匀浆液中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽(glutathione,GSH-Px)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢酶(catalase,CAT)、白细胞介素-1β、白细胞介素-6和肿瘤坏死因子α含量;透射电镜下观察肝脏的组织病理学变化并采用蛋白免疫印迹法检测肝脏中5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶(adenosine 5’-monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、核因子红系2相关因子2(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)和Toll样受体4(toll-like receptors 4,TLR4)信号通路蛋白表达情况。结果:与模型组相比,岩藻黄素组中的TC、TG、LDL-C、ALT、AST显著降低(P<0.05),HDL-C显著升高(P<0.05),且降低了瘦素水平,增加了脂联素分泌,GSH-Px、SOD、CAT升高(P<0.05),MDA降低(P<0.05),且炎症因子的水平降低。苏木精-伊红染色、油红O染色、糖原染色和透射电镜结果显示岩藻黄素组肝脏组织学结构好转,趋近于正常组。蛋白免疫印迹法结果显示岩藻黄素治疗可上调AMPK信号通路中磷酸化5’-单磷酸腺苷活化蛋白激酶和过氧化物酶体增殖物激活受体α、磷酸化乙酰辅酶A羧化酶、肉碱脂酰转移酶1,下调固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合酶表达;抑制Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/Nrf2信号通路中Keap-1的水平,提高Nrf2及其下游抗氧化蛋白血红素氧合酶1、NAD(P)H-醌氧化还原酶1和谷氨酸-半胱氨酸连接酶的表达水平;下调TLR4信号通路中TLR4蛋白的表达,抑制髓样分化因子88、磷酸化人核因子κB抑制蛋白α和磷酸化核因子κB蛋白(p65)的表达。结论:岩藻黄素可通过调节脂质代谢、减少氧化应激和调节炎症等途径修复高脂饮食诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病。

Keap1/Nrf2/HO-1/GPX4信号通路阻断癫痫大鼠海马神经元铁死亡机制及草果知母汤的干预效应

目的 探讨Kelch-样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)/谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)信号通路阻断癫痫海马神经元铁死亡机制及草果知母汤的干预效应。方法 将60只大鼠随机分成正常对照组、模型组、草果知母汤低、中、高剂量组和西药对照组,每组10只。采用腹腔注射戊四氮(PTZ)法建立癫痫大鼠模型,草果知母汤低、中、高剂量组分别给予草果知母汤1.25 g/kg、2.50 g/kg、5.00 g/kg,西药对照组腹腔注射丙戊酸钠(200 mg/kg),连续给药5周,对大鼠进行Racine评分,使用酶联免疫吸附法(ELISA)试剂盒测定海马组织谷胱甘肽(GSH)、活性氧(ROS)及铁含量,苏木精-伊红(HE)及尼氏(Nissl)染色法观察海马组织病理学变化并计算海马神经元细胞数,免疫组化检测海马组织CA1区GPX4、Nrf2蛋白表达积分光密度(IOD),实时荧光定量聚合酶链式反应(RTq-PCR)及免疫印迹法(Western Blot)检测海马组织Keap1、GPX4、Nrf2及HO-1 mRNA及蛋白表达水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠Racine评分、海马组织铁含量及ROS水平、海马组织Keap1 mRNA及蛋白水平均升高(P<0.05),海马组织GSH水平、海马神经元细胞数、海马组织GPX4、Nrf2及HO-1 mRNA及蛋白表达水平、海马CA1区GPX4、Nrf2蛋白免疫组化积分光密度降低(P<0.05)。与模型组比较,草果知母汤低、中、高各剂量及西药对照组大鼠Racine评分、海马组织铁含量及ROS水平、海马组织Keap1 mRNA及蛋白水平降低(P<0.05),海马组织GSH水平、海马神经元细胞数、海马组织GPX4、Nrf2及HO-1 mRNA水平及蛋白表达水平、海马CA1区GPX4、Nrf2蛋白表达积分光密度升高(P<0.05)。结论 草果知母汤能够修复癫痫大鼠海马组织神经元氧化损伤,其机制可能与调节Keap1/Nrf2/HO-1/GPX4通路进而阻断海马神经元铁死亡有关。

Keap1/Nrf2信号通路与神经退行性疾病的研究进展

神经退行性疾病是一类大脑及脊髓神经元坏死或功能丢失导致的神经功能障碍,目前发病机制仍不明确。核转录因子红系2相关因子2(Nrf2)包含一段具有高度保守碱性亮氨酸拉链,广泛分布于不同细胞,可通过氧化应激、自噬、神经细胞凋亡、炎症反应等参与细胞内多条重要信号转导通路。在神经退行性疾病中,Nrf2的表达及活性异常是其病理及生理机制重要的一环,具有重要的研究意义,可能是神经退行性疾病的潜在治疗靶点,进一步明确Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/Nrf2信号通路对神经退行性疾病的病理作用,对探寻神经退行性疾病的预防及治疗有重要意义。

Keap1-Nrf2信号通路在机体氧化应激损伤防护中的研究进展

Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路是细胞防御氧化应激损伤的最重要机制之一,其调控的下游Ⅱ相代谢酶和抗氧化蛋白/酶在细胞防御保护中发挥重要作用。Keap1-Nrf2信号通路在多种疾病中扮演重要角色,并且临床上已经开始开展针对性的靶点药物研发,有望基于该通路设计与生产出特效生物医药。本文从Keap1-Nrf2信号通路的基本结构与氧化应激、调控机制及与各种疾病的关系等方面展开综述。

维持性血液透析患者微炎症状态及外周血 Keap1-Nrf2-ARE表达对导管相关性血流感染的诊断价值

目的 探究维持性血液透析(MHD)患者微炎症状态及外周血Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)-核因子E2-相关因子2(Nrf2)-抗氧化反应元件(ARE)表达对导管相关性血流感染(CRBSI)的诊断价值。方法 选取武汉市第一医院2020年8月-2021年8月收治的23例MHD合并CRBSI患者为感染组,同期收治的未发生CRBSI的MHD患者67例为非感染组。采集CRBSI患者外周静脉血及导管血样本行病原菌培养,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析微炎症状态及Keap1、Nrf2、ARE表达对MHD合并CRBSI的诊断价值。结果 合并CRBSI患者共检出30株病原菌,革兰阳性菌占60.00%(18/30),革兰阴性菌占33.33%(10/30),真菌占6.67%(2/30);感染组血清C-反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平均高于非感染组(P<0.05),超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平及Keap1、Nrf2、ARE mRNA均低于非感染组(P<0.05);CRP、IL-6、TNF-α联合评估MHD合并CRBSI的曲线下面积(AUC)为0.855,敏感度为73.91%、特异度为92.54%;Keap1、Nrf2、ARE联合评估MHD合并CRBSI的AUC为0.859,敏感度为91.30%、特异度为70.15%。结论 MHD患者微炎症状态及外周血Keap1-Nrf2-ARE表达对CRBSI有较高的诊断价值,临床应密切监测MHD患者血清CRP、IL-6、TNF-α水平及Keap1、Nrf2、ARE相对表达量,及时防治CRBSI。

非小细胞肺癌驱动基因介导代谢重编程的研究进展

非小细胞肺癌依靠代谢重编程以满足自身生长和增殖所需。不同的驱动基因变异及肿瘤恶性程度均可导致非小细胞肺癌的代谢异质性,为药物研发带来挑战。因此,阐述驱动基因变异导致代谢重编程的异同,将为药物研发及联合治疗方案制定带来一定的启发,从而改善非小细胞肺癌患者的生存。

红芪多糖对糖尿病周围神经病小鼠的神经组织纤维化的改善作用及其机制

目的观察红芪多糖(HPS)对糖尿病周围神经病(DPN)小鼠(即ob/ob小鼠)的神经组织Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白(Keap1)与核因子E2相关因子2(Nrf2)表达的影响。方法按照体重将DPN小鼠随机分为5组:糖尿病模型组、对照组(α-硫辛酸4 mg·kg^(-1)·d^(-1))和高、中、低3个剂量实验组(HPS:200,100,50 mg·kg^(-1)·d^(-1)),每组10只。同品系非糖尿病C57BL/6野生型小鼠10只作为正常组;模型组和正常组给予等剂量蒸馏水5 m L·kg^(-1)·d^(-1),均每日1次,连续8周。以免疫印迹法和RT-PCR法分别检测神经组织中Keap1、Nrf2的蛋白和基因表达水平。结果给药8周后,正常组、模型组、对照组和中、高2个剂量实验组的Keap1蛋白表达灰度值分别为0. 59±0. 07,1. 10±0. 08,0. 63±0. 03,0. 81±0. 13和0. 73±0. 15;这5组的Nrf2蛋白表达灰度值分别为0. 91±0. 01,0. 51±0. 07,0. 88±0. 05,0. 76±0. 17和0. 87±0. 02。模型组与正常组比较,Keap1表达明显升高而Nrf2表达明显降低,差异均有统计学意义(均P <0. 01);中、高2个剂量实验组和对照组与模型组比较,Keap1表达明显降低而Nrf2表达明显升高,差异均有统计学意义(均P <0. 01)。基因结果的趋势与蛋白一致。结论 HPS可减轻模型小鼠糖尿病周围神经病神经组织纤维化程度,其作用可能与调控Keap1/Nrf2信号通路,使机体内抗氧化酶活性增加有关,从而减缓小鼠的神经纤维化速度。

薰衣草总黄酮对小鼠皮肤光损伤的防护作用机制

目的:研究薰衣草总黄酮对中波紫外线(UVB)致小鼠皮肤光损伤的防护作用,并从核因子E_(2)相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路探讨其作用机制。方法:将84只雌性KM小鼠随机分为7组:空白组,模型组,溶媒组,维生素E组(0.013 g·kg^(-1)),薰衣草总黄酮低、中、高剂量组(0.25,1.25,2.50 g·kg^(-1))。通过UVB辐照小鼠背部裸露皮肤建立光损伤模型,照射前30 min外涂薰衣草总黄酮,连续照射1周后,对小鼠背部皮肤进行评价并测得其水分和弹性;采用苏木素-伊红(HE)染色和苦味酸-酸性品红法(VG)染色考察薰衣草总黄酮对小鼠皮肤组织病理学改变的影响;生化比色法检测皮肤匀浆后丙二醛(MDA),超氧化物歧化酶(SOD),总抗氧化能力(T-AOC),一氧化氮合酶(NOS),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平;采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测皮肤组织中炎症因子白细胞介素-1(IL-1),白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α);实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测小鼠Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),BTB-CNC异体同源蛋白1(Bach1),血红素加氧酶-1(HO-1),醌氧化还原酶1(NQO1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC)mRNA表达。结果:与空白组比较,模型组小鼠外观评分显著升高(P<0.01),皮肤水分和弹性显著降低(P<0.01);皮肤组织出现较为明显的病理学变化,表皮明显增厚且伴有结痂小脓肿,损伤程度严重;小鼠的MDA,NOS水平明显升高(P<0.05,P<0.01),SOD,T-AOC水平明显降低(P<0.05,P<0.01),炎症因子IL-1,IL-6和TNF-α的水平明显升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2,Keap1,NQO1,GCLC mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01),Bach1 mRNA的表达显著升高(P<0.01);与模型组比较,薰衣草总黄酮低、中、高剂量组的小鼠外观评分显著降低(P<0.01),皮肤水分和弹性显著升高(P<0.01),各给药组小鼠的MDA,NOS水平明显降低(P<0.05,P<0.01),SOD,T-AOC水平明显升高(P<0.05,P<0.01),炎症因子IL-1,IL-6和TNF-α的水平明显降低(P<0.05,P<0.01),Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Bach1 mRNA表达显著降低(P<0.01)。结论:薰衣草总黄酮对UVB所致的小鼠皮肤光损伤防护效果显著,其作用机制可能与激活Keap1/Nrf2/ARE信号通路,调控氧化应激反应,改善炎症反应有关。