Dkk-1及Bcl-2蛋白在人鼻腔鼻窦鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨Dickkopf-1(DKK-1)及B细胞淋巴瘤/白血病-2(B cell lymphoma/lewkmia-2,Bcl-2)蛋白在人鼻腔、鼻窦鳞状细胞癌(SNSCC)中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化SP法及Western blot技术分别检测30例SNSCC(SNSCC组),38例鼻腔、鼻窦内翻性乳头状瘤(SNIP组)以及20例中鼻甲黏膜组织(对照组)中DKK-1和Bcl-2蛋白的表达情况。结果与SNIP组及对照组比较,DKK-1蛋白在SNSCC组中的表达明显下调,Bcl-2蛋白在SNSCC组中的表达明显上调;在SNSCC组中,DKK-1及Bcl-2蛋白在高、中分化与低分化组中的阳性表达率分别为100.00%、68.75%、33.33%及50.00%、62.50%、100.00%,均差异有统计学意义(P<0.05)。结论 DKK-1蛋白可能在SNSCC的发生和发展过程中起着重要的促进作用,且与Bcl-2蛋白呈负相关,DKK-1蛋白可能成为SNSCC基因治疗的新靶点。

SRSF2基因突变与髓系肿瘤

近年随着新一代基因组测序技术的开展,发现剪接体相关基因突变在髓系肿瘤中检出率较高,并且可能与疾病的发生发展密切相关。研究这些基因突变前后功能的改变不仅有助于明确疾病的发病机制,而且对于疾病的诊断、治疗及预后判断也具有重要意义。富含丝氨酸/精氨酸剪接因子2（serine/arginine-rich splicing factor 2,SRSF2）基因是常见剪接体基因突变之一,

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经TSA,ATRA作用一段时间后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长和增殖状态,流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b,CD64,CD14等的表达,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.TSA(30μg/L)联合ATRA(1μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,生长增殖受抑,S期细胞减少,CD11b表达增高,PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主,细胞功能上的分化可能尚不成熟.结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使U937/PLZF细胞发生部分分化.

冻融抗原负载树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞特异性杀伤急性白血病细胞的实验研究

我们应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 ) ,基因重组人粒 /单细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)联合培养体系自健康志愿者骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载急性髓系白血病 (AML)细胞冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,观察负载AML细胞冻融抗原后DC的状态对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对AML细胞特异性杀伤活性。我们发现负载AML冻融抗原后DC的CD1a、CD83、CD86、CD11C、HLA DR表达率为较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,且负载AML冻融抗原的DC诱导的CTL中CD3+ CD8+ T细胞比例 ,较诱导前明显增高 (P <0 .0 1) ,而负载AML细胞冻融抗原的DC诱导CTL对AML细胞有较强的杀伤作用 ,明显强于加或不加IL 2培养的T细胞对照组 (P <0 .0 1) ,而对K5 6 2细胞无明显的杀伤活性。通过以上实验我们认为经rhGM CSF ,rhIL 4培养产生的DC为CD14CD1a+ DC ,能诱导CTL对AML细胞产生明显的特异性杀伤作用 ,另外 ,负载AML细胞冻融抗原DC诱导的CTL中CD3+ CD8+ T细胞比例明显增高 ,提示CD8+ T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。

VEGF与COX-2在血液肿瘤中的协同表达及临床意义探讨

目的观察血管内皮生长因子(VEGF)与环氧化酶-2(COX-2)在恶性血液病中的表达,了解两者对血液肿瘤血管新生的作用及其可能存在的相互关系以及在急性白血病(AL)的不同病期表达的差异,探讨两者与疾病转归的相关性。方法应用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测155例恶性血液病患者、40例非恶性血液病患者及20例健康体检者(共设为对照组)的血清中VEGF与COX-2的含量,分别对90例不同病期AL患者进行血清VEGF与COX-2含量测定,并对疾病转归进行随访。结果非恶性血液病患者VEGF(91.45±40.16)及COX-2(37.15±31.14),正常健康者(84.15±15.45)(29.35±26.63),两者差异无统计学意义(P>0.05)。恶性血液病患者VEGF(226.17±126.81)和COX-2(57.89±41.11)的表达水平显著高于对照组,差异有非常显著性(P<0.001),两种因子之间在表达上存在相关性,相关系数为0.575。在AL的不同病期存在VEGF和COX-2表达不同,VEGF表达在AL初治组(208.45±101.16)高于复发难治组(197.68±89.56)及AL-CR组(143.29±154.37);COX-2的表达在AL复发难治组(87.86±44.73)高于初治组(55.10±47.32)和AL-CR组43.04±36.36),AL-CR组与对照组之间存在差异性(0.05>P>0.01)。AL患者VEGF与COX-2表达与外周血白细胞计数及骨髓中原始细胞比例有正相关性,相关系数分别为r≈0.511和r≈0.562(P<0.05)。结论血液肿瘤患者存在VEGF与COX-2的高表达,两者在表达上可能存在相关性。AL不同病期VEGF与COX-2表达有差异,血液肿瘤患者进行VEGF与COX-2的检测,可能为AL病期判断、预测复发、评估预后的研究提供又一依据。

儿童急性白血病患者外周血胸苷激酶1水平变化的临床意义

目的探讨血清胸苷激酶1(TK1)水平变化对不同类型儿童急性白血病(AL)的诊断价值及临床意义。方法选取贵州医科大学附属医院及贵阳市儿童医院2015年10月~2017年9月86例儿童AL患者为研究组,分为急性B细胞型淋巴细胞白血病(B-ALL)组38例,急性髓系白血病(AML)组26例和急性T细胞型淋巴细胞白血病(T-ALL)组22例。同时将急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿分为标危组21例、中危组19例和高危组20例,另设86例健康体检儿童为对照组。空腹抽取静脉血,检测各组的血清TK1水平。结果 B-ALL组、AML组以及TALL组血清TK1水平均高于对照组,T-ALL组血清TK1水平高于AML组,AML组血清TK1水平高于B-ALL组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高危组血清TK1水平高于中危组,中危组TK1水平高于标危组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论检测血清TK1水平对儿童AL的筛查和实验室诊断有重要临床参考价值;血清TK1的水平与ALL患儿的临床危险分级有关,可作为其危险分级的一项参考指标。

成人与儿童急性淋巴细胞白血病细胞遗传学大样本对比分析

本研究对566例成人急性淋巴细胞白血病(aALL)和586例儿童急性淋巴细胞白血病(cALL)的细胞遗传学进行对比分析。对所有患者均进行了细胞遗传学分析,部分患者进行了FISH检测。结果表明:aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。aALL中异常核型占62.0%,染色体异常较多见的为t(9;22)(q34;q11)、亚二倍体、超二倍体(47-50)、abn(6q)、abn(9p)、-7等,预后不良的占多数。cALL中异常核型占39.2%,染色体异常较多见的为高超二倍体、亚二倍体、TEL/AML1(+)、+8、超二倍体(47-50)、+21等,预后良好的占多数。其中异常核型、总亚二倍体、总超二倍体(47-50)、t(9;22)(q34;q11)、-7、abn(7q)、abn(14q32)、+Ph在aALL中的发生率明显高于cALL;cALL正常核型(N)、高超二倍体、+8、+21*2、TEL/AML1(+)的发生率明显高于aALL。Ph(+)在aALL中的检出率为20.5%,伴有附加异常的占63.8%。Ph(+)aALL附加异常中+Ph、-7、i(9q+)、9p-、+8、+21、+X、6q-、abn(14q32)、+14出现的比例较高。Ph(+)在cALL中的检出率为4.4%,明显低于aALL(p=0.000),伴有附加异常的占42.3%,附加异常中abn(9p)、abn(7p)、-7、17p-、+21出现的比例较高。结论:本组病例染色体数目异常及结构异常几乎涉及到每一条染色体,复杂核型多见。aALL与cALL的染色体异常存在明显的差异。

西妥昔单抗对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察西妥昔单抗对体外培养的人胃癌细胞株SGC-7901增殖和凋亡的影响。方法不同浓度西妥昔单抗（12．5、25．0、50．0、100．0mg／L）作用于对数期生长的胃癌细胞SGC-7901，噻唑蓝（MTF）法观察生长抑制作用；流式细胞术（FCM）检测对细胞周期和细胞凋亡的影响；逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）法检测半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA的表达水平；免疫组织化学（SP）法测定细胞内B淋巴细胞／白血病-2（bcl-2）、p-27蛋白表达变化。结果MTr法显示随西妥昔单抗浓度增加，抑制率由（9．76±1．41）％上升至（78．12±3．88）％，并呈现时间依赖性（P〈0．05），FCM结果示G。／G．期细胞比例上升，S期细胞比例下降，呈浓度依赖性（P〈0．05），凋亡率与西妥昔单抗浓度呈正相关。RT-PCR法和SP法结果显示，细胞中Caspase-3、p-27mRNA和蛋白随西妥昔单抗浓度增加而表达增加，bcl-2mRNA和蛋白则表达下降（P〈0．05）。结论西妥昔单抗可抑制体外培养的人胃癌细胞SGC-7901增殖，诱导细胞凋亡，其机制可能与上调Caspase-3、P-27基因转录和蛋白表达，下调bcl-2基因转录和蛋白表达有关。

微小RNA-449a靶向B细胞淋巴瘤／白血病-2抑制神经母细胞瘤细胞增殖

目的检测微小RNA（miRNA，miR）449a对神经母细胞瘤细胞株SK—N—SH增殖的影响并探讨其作用机制。方法人工设计合成miR449a模拟物，构建上调miR449a表达的细胞株SK-N-SH；实时定量反转录聚合酶链反应（1iT-qPCR）检测转染后miR-449a的表达水平；转染48h后采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞24、48、72h的增殖，膜联蛋白V（Annexin-V）／碘化丙锭（PI）法检测细胞凋亡；利用生物信息学方法预测miR-449a的候选靶基因。结果转染miR-449amimic的细胞中miR449a的表达水平升高3．5倍；过表达miR-49a后细胞生长速度较对照组细胞明显减慢；过表达miR449a后细胞凋亡明显增加，细胞总凋亡比例为（21．94±3．37）％，而对照组细胞的总凋亡比例为（11．01±3．51）％，两者差异有统计学意义（P〈0．05）；通过靶基因预测软件分析，抗凋亡基因B细胞淋巴瘤／自血病-2（bcl-2）是miR-449a的靶基因，过表达miR-449amimic后，内源性bcl-2蛋白的表达水平显著下降。结论miR449a可能通过调控bcl-2的转录水平抑制神经母细胞瘤细胞增殖，促进凋亡。