宫颈癌组织中KGFR、TFPI-2的表达及临床意义

目的探讨宫颈癌组织中角质细胞生长因子受体(KGFR)、组织因子途径抑制物-2(TFPI-2)的表达以及临床意义。方法选取2016年1月至2018年1月我院保存的宫颈癌组织标本56例(宫颈癌组),同时选取正常宫颈组织35例作为对照组,采用免疫组化染色法检测KGFR和TFPI-2表达。结果宫颈癌组KGFR阳性表达率为73.21%,明显高于对照组(P<0.05),而TFPI-2阳性表达率为28.57%,明显低于对照组(P<0.05);宫颈癌TNM分期Ⅲ期患者KGFR阳性表达率为100.00%,明显高于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05),而TFPI-2阳性表达率为0.00%,明显低于Ⅰ～Ⅱ期患者(P<0.05);宫颈癌中低分化患者KGFR阳性表达率为85.37%,明显高于高分化患者(P<0.05);宫颈癌有淋巴结转移患者TFPI-2阳性表达率为5.88%,明显低于无淋巴结转移患者(P<0.05);KGFR与TFPI-2表达呈负相关(rs=-0.599,P<0.05)。结论宫颈癌组织中KGFR表达上调,而TFPI-2表达下调,两者水平与患者临床病理特征有一定关系,且两者间有一定相关性。

小鼠角质化生长因子受体（KGFR）重组腺病毒载体的构建

目的 构建表达小鼠KGFR基因的重组腺病毒.方法 提取小鼠肺组织RNA,RT-PCR获得cDNA后,PCR扩增目的 基因片段.将获得的KGFR基因插入载体质粒pShuttle-CMV,构建穿梭质粒pShuttle-CMV-KGFR（pKGFR）.线性化pKGFR后,转化入含Adeasy-1病毒骨架的BJ5183细菌中.筛选正确的同源重组质粒pAdeasy-1-pShuttle-CMV-KGFR（pAd-KGFR）,转染HEK293细胞,产生病毒颗粒Adeasy-1-pShuttle-CMV-KGFR（Ad-KGFR）.进一步,大量扩增病毒,氯化铯梯度离心纯化,测量病毒滴度.结果 ①经限制性内切酶酶切和基因测序鉴定,证实pKGFR构建成功;②限制性内切酶酶切,确定穿梭质粒重组于病毒骨架;显微镜下观察HEK293细胞形态,证实病毒包装复制成功;③病毒滴度2.25×10^10PFU/ml,达到进一步体内、体外实验要求.结论 成功构建的重组腺病毒Ad-KGFR,为了解KGFR在肺部疾病中的作用,及进一步的基因治疗肺纤维化奠定基础.

STING、KGFR及VEGF在宫颈癌组织中的表达及临床意义研究

目的 探讨干扰素基因刺激因子(STING)、角质细胞生长因子受体(KGFR)及血管内皮生长因子(VEGF)在宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义。方法 选择2015年10月至2018年6月期间中国人民解放军海军第九七一医院保存的100例宫颈癌组织标本为研究组,另外选择50例子宫良性肿瘤切除的正常宫颈组织作为对照组。STING应用组织研磨法检测,KGFR及VEGF应用免疫组化链酶卵白素-生物素复合体法(SABC法)。比较2组STING、KGFR及VEGF阳性表达水平;分析宫颈癌组织中STING、KGFR及VEGF表达与患者临床病理特征之间的关系;宫颈癌组织中STING、KGFR及VEGF表达水平的相关性分析;STING、KGFR及VEGF阳性表达水平与宫颈癌患者预后之间的关系。结果(1)研究组STING、KGFR及VEGF阳性表达水平均显著高于对照组(P均<0.01);(2)TNM分期越高、组织分化程度越低,宫颈癌组织中STING、KGFR及VEGF表达水平越高(P均<0.05),但是与其他病理学特征(年龄、组织类型、肌层浸润程度以及淋巴结转移)无显著相关关系(P均>0.05);(3)经Spearman相关性分析,宫颈癌组织中STING、KGFR及VEGF表达,两两之间均存在显著的相关性(P均<0.05);(4)宫颈癌组织STING、KGFR及VEGF阴性表达患者中位生存时间均分别显著高于阳性表达者(P均<0.05)。结论 STING、KGFR及VEGF在宫颈癌组织中表达水平较高,与患者临床分期、组织分化程度呈显著相关性,对患者预后状况可能具有一定的预判功能,在宫颈癌早期诊断中具有一定的参考价值。

中耳胆脂瘤骨质破坏机制研究进展

中耳胆脂瘤是角化的鳞状上皮脱落后在中耳内形成的囊性结构,为非真性肿瘤,其临床表现与化脓性中耳炎相似,主要为耳流脓、听力下降、眩晕及耳痛等症状。严重者可以压迫周围骨质,造成破坏性骨吸收,引起一系列并发症,严重影响患者健康及预后。近些年,基质金属蛋白酶、核因子κB受体活化因子配体/骨保护素、炎症因子、巨噬细胞和角质细胞生长因子在中耳胆脂瘤骨质破坏中的作用越来越受到人们的关注。本文对中耳胆脂瘤骨质破坏机制研究进展作一综述。

表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼诱导人表皮角质细胞凋亡的研究

目的:探讨表皮因子受体抑制剂吉非替尼对分离培养的人表皮角质细胞的生长抑制及其诱导凋亡的作用机制,为探寻其对皮肤的毒副作用机制奠定基础。方法:采用分散酶分离表皮细胞,无血清培养法进行表皮细胞的培养,MTT法检测吉非替尼对角质细胞生长的影响,Annexin V-FITC/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测Bcl-2、bim的变化,采用caspase-3试剂盒检测caspase-3活性的变化。结果:以分散酶分离法成功得到8例人角质细胞,吉非替尼对人角质细胞生长有显著的抑制作用,并能显著诱导细胞发生凋亡,其作用呈明显的量效依赖性。吉非替尼能明显提高bim表达水平,促进caspase-3的活性。结论:吉非替尼通过调节Bcl-2家族蛋白及激活caspase-3诱导人角质细胞凋亡,抑制角质细胞增殖,这可能是其皮肤毒性的分子生物学基础。

角质细胞生长因子及其受体在葡萄胎恶性变中的作用

目的探讨角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在葡萄胎组织发生、发展及预后中的意义和作用。方法收集葡萄胎、侵蚀性葡萄胎、绒癌组织,采用免疫组化、原位杂交法分别从蛋白质、mRNA水平检测KGF和KGFR在良恶性葡萄胎组织中的表达,染色强度及阳性细胞数进行统计分析。结果良性葡萄胎组织滋养细胞中KGF和KGFRmRNA、蛋白均有一定程度表达,定位于细胞滋养细胞、合体滋养细胞胞质。恶性葡萄胎组织KGF表达与良性葡萄胎无差异,但KGFR在合体滋养细胞中表达明显高于良性葡萄胎,两者之间有显著性差异(χ2=12·775,P<0·01)。KGFR在侵蚀性葡萄胎及绒癌组织中的表达也明显高于良性葡萄胎(χ2=19·542,χ2=24·723,P<0·001)。结论KGF及KGFR的表达与滋养细胞肿瘤转移密切相关,在葡萄胎恶性变及浸润、转移中起重要作用。

重组人角质细胞生长因子-2基因的克隆、表达及活性

从人胚肺成纤维细胞中提取总RNA,利用RT-PCR法获得人角质细胞生长因子-2(hKGF-2)cDNA,并通过PCR方法扩增,再与原核表达载体pET3c连接后转化至BL21(DE3)宿主细胞中获得表达菌株.通过流加补料方式和发酵条件的控制,进行高密度培养,并通过IPTG诱导获得可溶性表达的目的产物.结果表明:目的蛋白占菌体总蛋白的30.0%以上;经阳离子交换层析、肝素亲和层析两步柱层析方法获得的rhKGF-2纯度高于99.0%.建立了利用转受体FGFR2-Ⅲb的BaF3细胞株进行rhKGF-2促增殖作用的活性测定方法,活性测定结果呈典型的S型曲线,并在一定范围内具有剂量依赖性.

角化生长因子及其受体在妇科肿瘤中的研究现状

在妇科肿瘤的诊断中,目前对这些疾病分子方面的检测尚无统一的、明确的标准,以宫颈癌为例,鳞状上皮细胞癌抗原的检测仍是目前研究该类疾病的主要内容之一,人们期望在众多所检测的因子中,能寻找到具有对疾病诊断、预后及治疗等方面更为有效的新兴检测指标。角化生长因子及其受体目前在多种肿瘤中被发现表达异常,与多种肿瘤的发生发展相关,本文就其在妇科肿瘤发生发展中的检测变化、现阶段研究进展加以着重综述,显示了其在不同肿瘤、疾病中作用的多形性,探索变化的规律性,以期对临床诊治疾病获益。

脂多糖致小鼠急性肺损伤组织病理变化与角质细胞生长因子受体表达的关系

目的 :观察急性肺损伤 (ALI)时小鼠肺组织损伤程度与角质细胞生长因子受体 (KGFR)表达水平的关系 ,为基因治疗急性肺损伤提供依据。方法 :建立脂多糖 (LPS)造成的小鼠肺损伤模型和Ⅱ型肺泡上皮细胞 (A5 49细胞 )损伤模型 ,通过病理分析、反转录聚合酶链反应 (RT PCR)和荧光定量聚合酶链反应 (FQ PCR)观察肺组织损伤程度与KGFR表达水平的关系。结果 :LPS造成轻度、中度和重度肺损伤时肺组织KGFR表达水平逐步下降 ,各种损伤程度之间KGFR表达存在显著差异 (P <0 .0 5 )。A5 49细胞的KGFR表达变化不明显 (P >0 .0 5 )。结论 :随着肺损伤程度的加重 ,肺组织KGFR表达水平逐次减低 。

人角质形成细胞Notch信号通路与转化生长因子β调控受体蛋白的作用

背景:在皮肤中受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的调控至关重要,而转化生长因子β似乎是其调控的上游因子,既然Notch信号和转化生长因子β信号通道如此相关,那么Notch是不是也参加了转化生长因子β信号对受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的调控呢?目的:探讨Notch信号通道在人角质形成细胞中对转化生长因子β调控受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa的作用的影响。方法:在分别用Jagged-1激活和用Γ-分泌酶抑制剂抑制Notch信号通道后,加入转化生长因子β,同时设立对照组,用Real-timePCR测试人角质形成细胞中受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappamRNA表达量。结果与结论:覆盖率为40%的角质形成细胞在加入了转化生长因子β后,受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappamRNA量在各时间点均高于对照组。在用Jagged-1激活Notch通道的角质形成细胞中,单独加入Jagged-1、转化生长因子β及两者都加入时均高于对照组(P<0.05,P<0.01)。在用γ-分泌酶抑制剂抑制Notch通道的角质形成细胞中,只加入转化生长因子β显著高于对照组(P<0.01),只加入γ-分泌酶抑制剂和两者均加入时与对照组比较,差异无显著性意义(P>0.05)。说明加入转化生长因子β导致角质形成细胞中受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa表达增加,而分别对Notch信号进行激活和抑制后发现,受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa信号分别显著增加和显著被抑制。所以在转化生长因子β升高受体蛋白酪氨酸磷酸酶kappa表达过程中Notch信号通道是非常重要且不可或缺的。

角质细胞生长因子及其受体在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中表达的研究

目的:探讨角质细胞生长因子(KGF)及其受体(KGFR)在口腔扁平苔藓(OLP)和口腔鳞状细胞癌(OSCC)的表达及意义。方法:运用免疫组化SP法研究KGF及KGFR在糜烂型、非糜烂型OLP,高、中、低分化OSCC中的表达。结果:KGF在糜烂型和非糜烂型OLP中的表达差异无统计学意义,在高、中、低分化OSCC中表达差异也无统计学意义,但KGFR在非糜烂型OLP、正常口腔黏膜(NOM)、糜烂型OLP表达逐渐增强,差异具有统计学意义,KGFR在高、中、低分化OSCC中表达逐渐减弱,差异有统计学意义。结论:KGF对OLP,OSCC发生可能并不起关键作用。KGFR可能是影响口腔黏膜上皮细胞增殖的重要因素,可能与OLP的发病有关,且可作为监测OLP癌变的早期指标,KGFR还可能与OSCC的分化程度有关。

6甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑通过下调角质细胞生长因子受体抑制结肠癌细胞增殖

目的研究芳香烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AhR)及其配体6甲酰基吲哚并[3,2-b]咔唑(6-formylindolo[3,2-b]carbazole,FICZ)对结直肠癌上皮细胞表面角质细胞生长因子受体(keratinocyte growth factor receptor,KGFR)的调控和对细胞增殖的影响。方法选用免疫组化和荧光定量PCR技术分别检测KGFR在结直肠正常组织和相应癌组织中的表达和定位,免疫荧光观察AhR在两种结肠癌细胞株(Lo Vo,Caco-2细胞株)中的分布,使用蛋白免疫印迹和荧光定量PCR检测AhR、细胞色素P4501A1(CYP1A1)、KGFR在FICZ处理组和对照组中的表达差异,使用细胞计数板分别检测对照组,KGF处理组,KGF+FICZ处理组和FICZ处理组各组的细胞数。结果 12个结直肠癌临床样本中有11个患者样品中KGF高表达,8个患者样品中KGFR显著增高且KGFR主要高表达于上皮细胞。体外实验发现,FICZ处理后的Lo Vo细胞中KGFR的蛋白水平和mRNA水平分别降低了50%和58.8%。在Caco2细胞中分别降低了52.6%和62.5%。这种调节过程能被AhR抑制剂CH223191阻断。同时,在两种结肠癌细胞系中,FICZ能够降低KGF对癌细胞的增殖作用(Lo Vo:34%;Caco-2:37%)。结论 AhR通过下调KGFR的表达,抑制KGF对癌细胞的增殖效应。

角质细胞生长因子研究进展

角质细胞生长因子 (KGF)属于成纤维细胞生长因子家族 ,它通过与受体 (KGFR)的结合 ,特异性地刺激上皮细胞的增殖 .KGF基因表达受到正负调控作用 ,正负调控作用的平衡对于KGF正常发挥功能具有重要意义 .KGF具有多种生物学功能 :参与组织、器官的发育 ,具有损伤防治功能 。

角质细胞生长因子-2对急性肺损伤大鼠Nod样受体蛋白3的调节作用

目的探讨角质细胞生长因子-2(KGF-2)对油酸致急性肺损伤(ALI)大鼠的保护作用及对Nod样受体蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法以雄性SD大鼠为研究对象,分为对照组、ALI组、KGF-2预处理组,KGF-2预处理组通过气道滴入KGF-2,ALI组及对照组经气道滴入等量生理盐水(NS)。ALI组及KGF-2预处理组通过尾静脉注射油酸建立大鼠ALI的模型,以正常SD大鼠作为对照,尾静脉注射等量NS。术后通过病理检测肺湿干比及肺通透性指数检测肺组织变化;免疫组化技术、Western blot方法检测肺脏中NLRP3表达的变化。结果与对照组相比,ALI模型组肺组织损伤严重,出现明显的病理学改变,肺泡隔增厚,炎性细胞浸润;肺湿干比及肺通透性指数均较对照组升高(P均<0.01);免疫组化、Western blot检测发现ALI组大鼠肺组织NLRP3表达亦较对照组升高(P均<0.01)。给予KGF-2预处理后,大鼠肺组织损伤程度较ALI模型组明显减轻,肺泡隔增厚改善,炎性细胞浸润减少;肺湿干比及肺通透性指数均较ALI模型组降低(P均<0.05)。免疫组化、Western blot检测的肺NLRP3表达均较ALI组降低(P均<0.01)。结论 KGF-2对油酸致ALI大鼠具有保护作用,其机制可能与降低肺脏中NLRP3的表达有关。

角质形成细胞在中耳胆脂瘤过度增殖中的作用

目的:研究基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)、角质形成细胞生长因子(KGF)及角质形成细胞生长因子受体(KGFR)在中耳胆脂瘤上皮中的表达,探讨它们与角质形成细胞之间的相互作用及在中耳胆脂瘤上皮过度增殖中的作用。方法:通过免疫组织化学方法检测MMP9、VEGF、KGF、KGFR、增殖细胞核抗原(Ki-67)在50例中耳胆脂瘤组织和15例正常外耳道皮肤中的表达,以Ki-67作为胆脂瘤细胞增殖活性的标记物,来评估胆脂瘤上皮中角质形成细胞的增殖状态。结果:1中耳胆脂瘤上皮中VEGF和MMP9的平均光密度值高于正常外耳道皮肤,差异有统计学意义(均P<0.01)。2KGF及KGFR在中耳胆脂瘤组织中的表达量明显高于正常外耳道皮肤,差异具有统计学意义(均P<0.01);随着胆脂瘤上皮中KGF及KGFR平均光密度值增加,Ki-67表达强度也相应地增加。3在MMP9和VEGF均阳性的胆脂瘤组织中,随着MMP9及VEGF平均光密度值增加,胆脂瘤组织中KGF表达也相应地增加。结论:MMP9、VEGF、KGF及KGFR蛋白在中耳胆脂瘤组织的高度增殖中起重要作用,并且VEGF、MMP9与KGF蛋白在胆脂瘤组织中的增殖中可能起协同作用。

血管内皮生长因子受体家族在HaCaT细胞中的表达

目的探讨血管内皮生长因子受体(VEGFR)家族在角质形成细胞系HaCaT细胞的表达。方法RT-PCR法检测HaCaT细胞中VEGFR家族中VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及neuropilin (NRP)-1、NRP-2的mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测VEGFR家族蛋白质的表达,同时免疫荧光法定位VEGFR家族在HaCaT细胞中的表达情况。结果RT-PCR发现VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3及NRP-1、NRP-2 mRNA在HaCaT细胞中均有表达;蛋白免疫印迹发现VEGFR-1、VEGFR-2、VEGFR-3蛋白质相对分子质量均为180 000,NRP-1、NRP-2为140 000。HaCaT细胞膜及细胞质内检测到较强的VEGFR家族荧光信号,以细胞膜表达为强。结论在mRNA及蛋白质水平,HaCaT细胞均表达VEGFR- 1、VEGFR-2、VEGFR-3及NRP-1、NRP-2。

肺角质细胞生长因子受体在大鼠急性脊髓损伤后肺水肿中的表达及作用

目的探讨大鼠急性脊髓损伤（acute spinal cord injury，ASCI）后不同时相点肺组织角质细胞生长因子受体（keratinocyte growth factor receptor，KGFR）的表达及其与肺水肿的关系。方法成年Wistar大鼠32只，体重240-260g，雌雄不限。按随机数字表法分为实验组和对照组，每组16只，每组分为造模后24h、3d、1周、2周共4个时相点，每个时相点4只大鼠。实验组均采用C。脊髓Allen打击法制作大鼠ASCI模型，打击剂量为10g×2．5cm，对照组仅暴露c，脊髓。检测各时相点两组大鼠肺湿干重比，使用Westernblot技术检测肺组织KGFR蛋白表达水平，RT-qPCR技术检测肺组织KGFRmRNA表达水平。结果大鼠ASCI后肺组织KGFR蛋白及mRNA表达水平均于伤后24h开始下降，分别为0．23±0．06，0．0121±0．0023，伤后3d达最低值，分别为0．17±0．04，0．0085±0．0017，伤后1周含量开始回升。伤后24h和3d实验组肺组织KGFRmRNA表达与对照组差异有统计学意义（P〈0．05），伤后各时相点KGFR蛋白表达均与对照组差异有统计学意义（P〈0．05）。KGFR表达的变化趋势与肺水肿严重程度的变化趋势同步。结论ASCI后肺组织KGFR表达显著降低，可能与ASCI后肺水肿的形成有关。

角质细胞生长因子受体腺病毒表达载体在脂多糖所致肺泡上皮细胞损伤修复中的应用

目的观察KGFR腺病毒表达载体在脂多糖(LPS)致A549细胞损伤模型中转基因表达KGFR的情况及其促使A549细胞对抗LPS损伤的效果,为基因治疗急性肺损伤探索有效途径。方法KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细胞,通过形态学观察转基因作用对LPS致伤前后A549细胞的影响,并运用western blot检测KGFR腺病毒表达载体在LPS致伤前后的A549细胞中转基因表达KGFR蛋白情况。结果KGFR腺病毒表达载体感染LPS致伤前后的A549细胞,转基因组对抗LPS致伤作用明显,western blot检测表明KGFR腺病毒表达载体转基因表达KGFR蛋白效果显著(P<0.05)。结论KGFR腺病毒表达载体能够转基因表达KGFR蛋白,并具备转基因治疗急性肺损伤的能力。

Toll样受体2对人角质形成细胞增殖的影响

目的探讨Toll样受体2（TLR2）对体外培养人角质形成细胞增殖的影响。方法天然配体肽聚糖（PGN）体外活化人角质形成细胞TLR2，用噻唑蓝法检测PGN对角质形成细胞体外增殖的影响，确定最适作用浓度；用实时荧光定量PCR法和Western印迹法分别检测角质形成细胞Ki67、TLR2、核因子（NF）-κBp65及转化生长因子（TGF）-α mRNA和蛋白的表达水平；采用抗体封闭实验分析封闭TLR2对PGN诱导角质形成细胞Ki67、TLR2、NF—κBp65及TGF-α表达的影响。结果不同浓度的PGN处理角质形成细胞后24h，在1．25，2．5，5μg／mL的浓度下细胞较对照组出现明显增殖（P〈0．05）。1．25、2．5和5μg／mL PGN作用于角质形成细胞后24h，其中1．25和2．5μg／mL浓度下Ki67 mRNA的表达明显增加，各组Ki67蛋白合成均有增加；各组TLR2 mRNA和蛋白的表达均增加；1．25μg／mL浓度下NF—κBp65 mRNA的表达明显增加，各组细胞核内NF—κBp65蛋白合成均增加；其中1．25和5μg／mL浓度下TGF—α mRNA和蛋白表达均明显增加（P〈0．05）。以抗人TLR2单克隆阻断性抗体封闭TLR2后，PGN诱导的角质形成细胞Ki67、TLR2、NF—κBp65及TGF—α mRNA和蛋白表达的上调均受到明显抑制（P〈0．05）。结论角质形成细胞TLR2经PGN诱导活化后，可能通过促进NF—κB活化及TGF—α表达而导致角质形成细胞的异常增殖。

角质形成细胞生长因子受体反义寡核苷酸对HaCaT细胞增殖的影响

目的研究角质形成细胞生长因子受体反义寡核苷酸(KGFR ASODN)对角质形成细胞生长因子(KGF)促HaCaT细胞增殖效应的抑制作用。方法HaCaT细胞体外培养,采用绘制生长曲线、MTT实验、集落形成实验研究KGFR ASODN对KGF促增殖效应的抑制作用。采用流式细胞仪研究KGFR ASODN对KGFR表达的影响。结果反义序列1和反义序列2均可抑制HaCaT细胞的生长速度(P＜0．05)。高于0．25μg/mL质量浓度反义序列1和反义序列2均可抑制KGF介导的HaCaT细胞增殖(P＜0．05)。高于0．25μg/mL质量浓度反义序列1和反义序列2都可抑制KGF诱导的HaCaT细胞集落形成(P＜0．05)。HaCaT细胞存在KGFR基础表达,高于0．25μg/mL质量浓度反义序列1和反义序列2均可抑制HaCaT细胞KGFR表达(P＜0．05),抑制率呈浓度依赖性,正义序列核苷酸(S-ODN)对KGFR表达无抑制作用(P＞0．05)。结论KGFR ASODN可有效抑制KGFR表达,进而抑制KGF介导的HaCaT细胞过度增殖。