靶向ASGPR1的外源性microRNA对HBV表达和复制的抑制作用

目的:设计并构建ASGPR1靶向的microRNA表达载体,观察其对ASGPR1基因的抑制作用及其在HBV感染基因治疗中的应用价值.方法:以ASGPR1为靶基因,设计并构建3个针对ASGPR1不同位点的microRNA表达载体,通过脂质体方法转染HepG2.2.15细胞,RT-PCR和Western blot检测其对ASGPR1mRNA和蛋白的抑制作用,乙肝五项定量和HBVDNA检测其对HBV的抑制作用.结果:ASGPR1mRNA和蛋白的平均水平分别下降了57.3%和49.8%(P<0.01);在病毒水平3种amiRNA均能明显抑制相应细胞株中HBsAg和HBeAg的分泌,其中以a miRNA-ASGPR1-610抑制作用最强,对培养72h的细胞上清中的HBsAg和HBeAg抑制率分别为31.3%和33.6%(P<0.01),HBV DNA的抑制率为29.7%(P<0.01).结论:靶向ASGPR1的外源性microRNA能显著抑制靶基因的表达,进而抑制HBV的复制和表达.ASGPR1可以作为慢性HBV感染基因治疗的候选靶点.

浆细胞样树突状细胞(pDCs)在慢性乙肝中的研究进展

乙型肝炎病毒在体内持续存在的机制复杂,其中机体细胞免疫功能低下是病毒不能有效清除的重要原因。树突状细胞在清除病毒及肿瘤免疫中发挥激活特异性免疫的效应。浆细胞样树突状细胞(pDCs)是树突状细胞的一个亚型,它是体内产生IFN-α的最主要细胞,并放大对病原体的免疫杀伤效应,从而在抗病毒过程中起重要作用。在慢性乙肝患者外周血中pDCs的功能和数量都有所降低,可能与慢性乙型肝炎病毒不能有效清除有关。本文简述了pDCs基本功能及可能参与慢性乙型肝炎的有关机制。

DNA体外扩增诊断乙肝病毒X基因的研究

应用本室建立的聚合酶链反应（ＰＣＲ）系统，利用２０ｂｐ与２１ｂｐ的一对特异寡核苷酸引物介导，扩增ＨＢＶ－Ｘ基因区４００ｂｐ片断。经凝胶电泳，紫外分析以及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交表明，扩增产物正确，效果满意。

HBV新亚型中C基因片段的B/C型结构分析

乙型肝炎是严重威胁人类健康的疾病之一。分析乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus,HBV)的进化过程,可以获得HBV序列间的亲疏进化关系,进而为乙型肝炎的预测、治疗等方面研究提供依据。为了研究乙肝病毒样本的基因亚型,本文使用序列分析方法对采集到的临床HBV序列和公共核酸数据库的HBV数据集进行系统进化树构建和序列结构分析。结果显示,样本中有一条克隆序列的C基因区域是一种新的HBV B/C混合亚型。并且,实验结果还验证了云南省西双版纳州HBV新亚型HBV/B6的存在。本文的实验结论对云南省少数民族聚居地区乙型肝炎病毒的系统进化研究具有一定的价值。