基于液相芯片技术建立快速检测6种临床常见血流感染厌氧菌的方法及评价

目的基于液相芯片技术建立一种可同时快速检测6种临床常见血流感染厌氧菌的方法。方法通过GenBank寻找脆弱拟杆菌、厌氧消化链球菌、具核梭杆菌、中间普雷沃菌、产气荚膜梭菌和痤疮丙酸杆菌的16S rDNA基因序列,经序列比对分析,选择菌内保守菌间特异的区域作靶序列,使用Primer 5.0软件设计特异性引物及探针,建立不对称多重PCR扩增体系,将PCR产物与偶联核酸探针的荧光微球混合物进行杂交,建立一种多重检测方法,并对该方法的特异度、灵敏度和重复性进行评价。收集2020年6月~2022年5月东莞市厚街医院阳性血厌氧培养瓶84例及阴性培养瓶16例,应用建立的方法进行检测,结果与传统培养法进行比较。结果6种厌氧菌靶基因序列经PCR扩增后,电泳成像清晰可见6条目标条带;经反应体系优化,生物素标记与非标记引物浓度比为4∶1时,选择退火温度56℃进行多重扩增,加入5μl PCR产物,52℃温育20 min检测效果最佳;各目标序列荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)>1000,无非特异性信号;最低检测限可达103cfu/ml~10^(4)cfu/ml;当菌液浓度为105cfu/ml时,批内及批间的变异系数分别在7.38%和11.10%以下;100例临床样本中6种厌氧菌的检测结果与培养法一致。结论成功建立一种快速、简便、高效的液相芯片方法,可同时检测6种常见血流感染厌氧菌。

食源性沙门氏菌携带质粒介导的喹诺酮类耐药基因的液相芯片检测技术研究

目的:建立应用新型液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的质粒介导喹诺酮类耐药(PMQR)基因中4种基因:qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法。方法:针对食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因,设计对应引物和微球,采用液相芯片技术对7株标准菌株进行特异性实验;对4株各含1种PMQR基因的食源性沙门氏菌进行重复性和灵敏度实验;然后检测来自食源性风险监测的71株耐喹诺酮类沙门氏菌,和普通PCR进行对比实验。结果:成功建立了液相芯片技术检测食源性沙门氏菌携带的qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB四种PMQR基因的方法,携带qnrS基因的耐药株检出限为5 CFU/mL、携带aac(6')-Ib-cr基因的耐药株检出限为25 CFU/mL、携带oqxA和oqxB基因的耐药株检出限为10 CFU/mL。所有阳性判定结果荧光中位值(MFI)均≥5倍阴性对照组。重复性实验变异系数(CV)均小于5%,特异性实验结果特异性100%,阴性菌株无阳性信号反应。qnrS检出率29.6%(21/71)、aac(6')-Ib-cr 35.2%(25/71)、oqxA 28.2%(20/71)、oqxB 23.9%(17/71),方法比对的结果符合率为100%。结论:实验建立的液相芯片技术检测食源性沙门氏菌质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrS、aac(6')-Ib-cr、oqxA、oqxB的方法具有灵敏度高、特异性好、稳定性强、结果准确的特点,可以为食源性沙门氏菌PMQR基因的检测以及耐药性的监控提供技术支撑。

粪便蛋白Luminex液相芯片检测系统构建及其对结直肠肿瘤早期诊断的价值

目的基于Luminex液相芯片检测系统构建粪便人源性蛋白诊断体系,并评估其对结直肠肿瘤的早期诊断价值。方法收集2021年1月~2023年1月蚌埠医学院第一附属医院收治的结直肠癌(CRC)患者70例为CRC组、结直肠腺瘤(CRA)患者42例为CRA组,以及同期健康对照(HC)受试者38例为HC组。收集各组受试者粪便,使用Tris-Hcl缓冲液提取粪便总蛋白,通过Luminex液相芯片检测技术分析3组受试者粪便中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、人源性视黄醇结合蛋白4(RBP4)、甲壳素酶-3样蛋白1(CHI3L1)和补体成分3a(C3a)的水平差异;收集受试者外周血,分离血清检测癌胚抗原(CEA)和糖类抗原19-9(CA19-9)的水平;使用受试者工作曲线(ROC)分析MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a联合以及CEA和CA19-9联合对CRC、CRA、CRC和CRA的诊断效能,并比较两种组合诊断效能的差异。结果CRC组患者粪便中MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a水平均显著高于HC组(P<0.05),CRC组粪便中MMP-9和CHI3L1水平显著高于CRA组(P<0.05),但是RBP4和C3a在CRC和CRA组间并无显著性差异(P>0.05);另外,CRC患者外周血中CEA和CA19-9水平均显著高于HC组和CRA组(P<0.05),但是CRA组和HC组之间无显著性差异(P>0.05)。ROC曲线分析显示,MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a联合诊断CRC的灵敏度为91.4%,特异度为100.0%,联合诊断CRA的灵敏度为81.0%,特异度为89.5%,联合诊断CRC和CRA的灵敏度为83.9%,特异度为97.4%。Z检验比较分析显示,粪便蛋白MMP-9、RBP4、CHI3L1和C3a联合诊断CRC,CRA以及CRA和CRC的效能显著优于外周血肿瘤标志物CEA和CA19-9(P<0.05)。结论Luminex液相芯片检测粪便人源性蛋白RBP4、MMP-9、CHI3L1、C3a对结直肠肿瘤早期诊断具有价值且优于外周血肿瘤标志物CEA和CA19-9,具有较高的临床应用推广意义。

液相芯片技术在动物遗传育种中的应用

液相芯片技术是近年来发展起来的一种先进的高通量分子检测技术,集一体化流式细胞术、荧光微球和激光技术等技术优势,具有快速、简便、敏感、准确和成本低等优点。相比其他检测技术,液相芯片可以同时检测多个生物分子指标,如蛋白质、核酸和代谢产物等。在动物遗传育种中,这些分子指标可以用于疾病基因定位、群体繁殖力评价、亲缘关系研究、遗传多样性分析等重要领域。该文介绍了液相芯片的原理、优缺点及其在动物遗传育种中的应用,以期为辅助开发动物遗传育种检测新技术提供参考。

儿童社区获得性肺炎病例病原谱分析

目的 分析珠海市金湾区2018至2019年儿童社区获得性肺炎病例的病原体谱结果,总结病原流行病学特征,为新发病例的诊治提供依据。方法 回顾性分析2018年12月至2019年11月在珠海市金湾区住院,符合儿童社区获得性肺炎诊断的805例患儿咽拭子标本,通过多重PCR和Luminex液相芯片杂交进行13种呼吸道病原体的核酸检测,对结果按照患儿年龄进行分组统计分析,各分组年龄区间为0~6月龄、6~12月龄、1~3周岁、3~7周岁、7周岁以上。结果 580例患儿咽拭子的病原体核酸检测为阳性;235例患儿检出两或以上病原体核酸阳性;检出率最高的前3种病原体分别是肺炎链球菌(SP)、呼吸道合胞病毒(RSV)和肺炎支原体(MP)。RSV在1岁以下低龄患儿中常见;ADV和MP在1岁以上患儿中检出率更高;其他病原体在各年龄组段分布比较平均。大多数季节特异的病原体如SP、HRV、MC、ADV、RSV检出高峰在春季(1~3月份)和冬季(10~12月),但也有少部分如Hi和MP有独立的流行规律,在非检出高峰时段流行。结论 在临床诊断和治疗中,应注意病原体流行的季节性变化、不同年龄组常见病原体的差异以及多种病原体的感染。

非洲猪瘟病毒P30蛋白的表达及抗体液相芯片检测方法的建立

本研究旨在为建立高效、快速、准确检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的抗体液相芯片检测方法。首先构建pET-28a-p30表达载体,利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统表达ASFV重组P30蛋白,然后将重组P30蛋白与羧基化的荧光微球偶联,建立ASFV P30抗体液相芯片检测方法。经鉴定,重组质粒成功转入大肠杆菌BL21感受态细胞,并以包涵体形式表达,Western blot结果显示重组P30蛋白可以与ASFV阳性血清产生特异性反应,证明其具有良好的反应原性。建立的ASFV抗体液相芯片检测方法检测中值荧光强度(median fluorescent intensity,MFI)阈值为1575.7,最佳结合蛋白浓度为每1.25×10^(6)个微球6μg,最佳血清稀释度为1∶600,最佳二抗浓度为1μg·mL^(-1),该方法具有良好的特异性、灵敏性和重复性。用建立的方法和商品化ELISA试剂盒同时对92份临床采集的猪血清样本进行检测,结果显示二者符合率为92.39%。本研究成功表达重组P30蛋白,并建立了ASFV P30抗体液相芯片检测方法,为ASFV感染早期的血清学检测提供了新的方法,也为多种病原体的抗体检测奠定了基础。

免疫组化法检测NSCLC患者EGFR突变的相关研究

背景与目的存在表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitor,TKI)治疗有良好反应。与检测EGFR突变的分子水平手段相比,免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)价格低廉,操作简便、迅速,易开展。本研究旨在探索免疫组化法检测EGFR突变的准确性。方法选取97例NSCLC患者的手术或组织活检标本行EGFR特异性抗体的免疫组化染色,分析染色阳性标本的临床病理特征,并继续接受液相芯片检测验证是否存在突变;新收集40例被证实为EGFR突变的手术标本接受免疫组化染色,计算免疫组化法检出突变灵敏度。结果97例NSCLC标本,17例染色阳性,染色阳性标本好发于女性、腺癌、不吸烟患者中,其染色阳性标本中,76.9%实际存在突变。40例EGFR突变标本中,免疫组化法检出突变的灵敏度为40%。结论免疫组化法染色评分为强阳性的标本结果准确,但该方法灵敏度不甚理想,不同研究者所得结果差异较大,临床推广是否可行仍有待进一步探讨。

肺结核治疗过程中血清IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-17A、IL-4、IL-6和IP10水平动态观察

目的分析肺结核患者治疗过程中血清IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-17A、IL-4、IL-6和IP10水平的动态变化,以进一步阐明这些因子与结核病发生发展的关联性。方法应用液相芯片技术检测59例成功治愈的初治菌阳肺结核患者治疗前、治疗2个月末和6个月末的血清IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-17A、IL-4、IL-6和IP10水平,应用配对t检验分别比较各因子3个时点间的血清表达水平差异。结果 3个时间点血清IL-10、IL-12p40、IL-12p70、IL-17A、IL-4、IL-6和IP10水平(pg/m L):治疗前分别为1.71±0.91、5.02±11.53、2.48±11.03、1.12±0.46、0.36±1.87、8.99±7.82和882.74±1 110.73,治疗2个月末分别为2.39±1.47、8.95±13.76、1.77±1.80、0.96±0.22、0.51±1.11、4.75±4.16和408.38±492.27,治疗6个月末分别为1.84±0.93、5.14±10.16、1.59±0.78、0.79±0.22、0.44±0.48、4.05±4.51和177.57±104.83。治疗前与治疗2个月末及治疗6个月末的IL-6水平、治疗前与治疗2月末的IL-10和IL-12p40水平以及治疗前、治疗2个月末、6个月末的IL-17A和IP10水平均有显著性差异(P<0.05)。结论血清IL-17A、IP10、IL-6、IL-10和IL-12p40水平与结核病的发生发展存在密切关联。

针刺百会穴对癫痫大鼠行为学、体质量及IL-6表达的影响

目的：观察针刺百会穴对癫痫大鼠行为学、体质量的影响及海马组织中IL-6含量的表达差异,探讨百会穴抗癫痫的作用机制。方法：将200~250 g左右的雄性SD大鼠随机分为正常空白组、正常百会组、模型空白组、模型百会组。采用氯化锂-匹鲁卡品癫痫大鼠模型,于造模成功后第2天开始针刺,连续治疗10 d后取材,期间记录各组大鼠的行为学变化以及针刺第1天、第5天、第10天的体质量情况,并运用液相芯片技术检测各组大鼠海马组织中IL-6的表达情况。结果：（1）针刺前,模型组大鼠精神萎靡、双眼无神、活动性差、拒饮食水、大便稀溏、小便短少,一般情况差;针刺后,模型组大鼠的一般情况逐渐好转。（2）针刺百会穴对各组大鼠体质量的影响无统计学意义（P〉0.05）。（3）与正常空白组相比,模型空白组的IL-6含量明显升高（P〈0.05）;模型百会组较模型空白组略有下降,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：IL-6参与了癫痫疾病的发生与发展,针刺百会穴可能难以通过降低IL-6的表达量来达到治疗癫痫的目的。百会穴对大鼠的体质量无明显影响,但可以改善癫痫大鼠的一般情况,降低癫痫发作程度。

蛋白质组学技术研究进展

随着现代科学技术的飞速发展,现代生物学技术已经发展到后基因组时代,包括人类在内的几十种生物体基因组测序已经完成,生命科学研究的重点从结构基因组研究转移到后基因组时代——功能基因组的研究,蛋白质组学研究是功能基因组一个重要的组成部分。因此,与之相适应,蛋白质组学研究技术也是日新月异,层出不穷,除了最经典的二维凝胶电泳技术,多维液相色谱技术,同位素标记亲和标签技术相继发展起来,蛋白质芯片技术及噬菌体展示技术也得到了较为广泛的应用。本文针对蛋白质组学研究上述关键技术进行了综述。

液相芯片技术检测癫痫大鼠海马组织RANTES、MCP-1、IP-10的表达研究

目的：观察趋化因子RANTES、MCP-1、IP-10在癫痫大鼠海马组织中的表达情况,探讨百会穴治疗癫痫的作用机制。方法：将30只200~250 g的雄性SD大鼠随机分为正常空白组、正常百会组、模型空白组、模型百会组。建立氯化锂-匹鲁卡品癫痫大鼠模型,针刺其百会穴。运用液相芯片技术检测癫痫大鼠海马组织中RANTES、MCP-1、IP-10的蛋白表达情况。结果：四组大鼠RANTES、MCP-1、IP-10的表达情况均为：模型空白组的蛋白表达量明显高于正常空白组（P〈0.05）;模型百会组高于正常百会组（P〈0.05）;模型百会组低于模型空白组（P〉0.05）;正常空白组和正常百会组相比（P〉0.05）。结论：大鼠海马组织趋化因子RANTES、MCP-1、IP-10参与了癫痫疾病的发生和发展过程;针刺百会穴未能通过降低RANTES、MCP-1、IP-10的蛋白含量来达到治疗癫痫的目的。

以液相芯片分析消积饮联合FOLFOX化疗对晚期结直肠癌患者血清细胞因子表达谱的影响

目的:通过液相芯片技术评价消积饮联合化疗对晚期结直肠癌患者血液细胞因子表达谱的影响。方法:回顾性分析2018年1月1日至2018年12月31日来自广东省中医院大学城分院肿瘤科的14例符合纳入标准的晚期结直肠癌患者,根据治疗分为化疗组(n=7)和联合治疗组(n=7),化疗组给予5-氟尿嘧啶+亚叶酸钙+奥沙利铂(FOLFOX)治疗,联合治疗组给予消积饮+FOLFOX治疗,评价两组患者治疗6程后疗效,并在每2个疗程后采用液相芯片技术检测患者外周静脉血清中细胞因子表达谱。结果:14例患者共接受了84程治疗,生存分析显示联合治疗组和化疗组中患者的PFS、OS因样本量不足不能进行对比,但联合治疗组较化疗组的PFS及OS均有延长的趋势(PFS:10 vs 6个月,OS:17 vs 12个月);不良反应方面,两组出现白细胞减少、腹泻、恶心、末梢神经炎及脱发等不良反应发生例数相当,但联合治疗组较化疗组不良反应程度略轻。化疗组患者血清中IL-2和脑源性神经营养血液细胞因子(Brain derived neurotrophic blood cytokines,BDNF)的浓度高于联合治疗组(P<0.05)。比较治疗前后不同采血点细胞因子浓度,患者治疗2程后化疗组的IL-2浓度高于联合治疗组(P<0.05)。在不同用药周期,共有19个细胞因子出现联合治疗组高于化疗组的趋势。结论:消积饮联合FOLFOX方案可能是晚期结直肠癌的一种值得探索的治疗方案,液相芯片分析其机制可能与降低患者血清中细胞因子IL-2和BDNF水平有关。

多重荧光定量PCR和液态芯片技术对下呼吸道病毒检测的应用比较

目的比较荷兰Patho Finder公司多重荧光定量PCR技术(Respi Finder 2SMART试剂盒,简称Respi Finder检测)和加拿大Luminex公司液态芯片技术(呼吸道病毒检测试剂盒,简称x TAG RVP)对下呼吸道标本病毒检测的结果。方法收集2015年1至12月于北京协和医院疑似病毒性肺炎住院患者100例下呼吸道标本,分别利用Respi Finder和x TAG RVP检测试剂进行常见呼吸道病毒核酸检测,并全部进行PCR及测序分析,比较两种方法的敏感性和特异性。结果 100份下呼吸道标本经Respi Finder和x TAG RVP方法检测,阳性率分别为60.0%和51.0%,混合感染率均为8.0%。两种方法结果一致率为80.0%。以PCR及测序结果为准,经Respi Finder和x TAG RVP方法检测的敏感性分别为97.9%和94.3%,特异性分别为74.5%和97.9%,阳性预测值分别为78.3%和98.0%,阴性预测值分别为95.0%和93.9%,两法检测特异性及阳性预测值差异有统计学意义(P<0.05)。结论与Respi Finder方法相比,x TAG RVP对常见呼吸道病毒检测的特异性较好,敏感性相当,对呼吸道病毒的检测性能优于Respi Finder检测。

慢性阻塞性肺疾病和支气管哮喘患者社区获得性肺炎时病原学检测情况及分析

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)和支气管哮喘患者患有社区获得性肺炎时,细菌和病毒感染情况。方法应用微生物培养法、液态芯片法、实时荧光定量PCR法(RT-PCR)检测我院呼吸内科COPD和或支气管哮喘患者社区获得性肺炎时的痰或肺泡灌洗液体标本中的细菌和病毒,并对结果进行统计分析。结果113例标本中,液态芯片法和微生物培养法分别检出细菌54株(47.7%)和9株(7.9%),两种方法相比检出率具有统计学差异(P<0.05)。液态芯片法和RT-PCR法分别检出病毒51株(45.1%)和53株(46.9%),以巨细胞病毒和甲型流感病毒为主,两者相比差异无统计学意义(P>0.05)。113例中同时检出细菌和病毒18例(15.9%)。COPD和支气管哮喘相比,两者在革兰阴性菌、革兰阳性菌和病毒检出率对比,差异无统计学意义(P>0.05)。时间分布上,甲型流感病毒检出病例多发生在3月和7月,巨细胞病毒全年散在分布。结论COPD和或支气管哮喘患社区获得性肺炎时,细菌和病毒均具有较高检出率,液态芯片法检测对病原学分析可提供重要临床线索。

液相基因芯片技术在崇明地区人乳头瘤病毒检测和分型中的应用

目的探究液相基因芯片技术在崇明地区人乳头瘤病毒（HPV）检测和分型中的应用。方法选取2011年5月至2013年4月该院妇科门诊就诊者宫颈脱落细胞500例,使用液相基因芯片技术对其进行HPV基因型检测。并对80例患者进行病理诊断,根据组织病理学将80例患者分为炎性反应组、细胞学正常组、宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅰ组、CINⅡ组、CINⅠ～Ⅱ组、CINⅢ组。将病理诊断结果和HPV DNA亚型分布结果结合分析,对崇明地区宫颈病变程度和HPV感染基因型的关系进行分析。结果 500例标本中共180例HPV阳性患者,HPV总感染率为36%,共检出22种基因型,按照感染率从高到低依次为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-11、HPV-6、HPV-31。其中高危型感染为85.96%,低危型感染为14.04%。500例标本中共180例HPV阳性患者,其中44例（24.44%）患者年龄为21～25岁的女性,11例（6.15%）患者年龄为51～67岁的女性,随着年龄的增大HPV阳性例数减少。随着宫颈病变级别的升高HPV感染率逐渐升高,两两比较结果显示,炎性反应组与正常组、CINⅢ组与CINⅡ组、宫颈癌组与CINⅡ组、宫颈癌组与CINⅢ组之间差异无统计学意义（P〉0.05）;其余11对两两对比差异具有统计学意义（P〈0.05）。随着宫颈病变级别的升高HPV多重感染率逐渐升高,但是仅炎性反应组与CINⅢ、CINⅡ组间差异有统计学意义（P〈0.05）。将组织病理学作为确诊标准,液相芯片HPV DNA检测CINⅢ、CINⅡ的特异度为76.63%,灵敏度为88.57%,阴性预测值为92.16%,阳性预测值为68.89%。结论崇明地区常见的HPV感染基因型为HPV-16、HPV-52、HPV-58、HPV-18、HPV-11、HPV-6、HPV-31。HPV阳性多发于年轻女性,且HPV多重感染和感染率均随着宫颈病变的程度加重而加重。因而液相芯片HPV DNA检查对大规模筛查和宫颈病变的临床诊断有十分重要的价值。

果蔬脆片浸渍工艺分析

本文着重讨论果蔬脆片加工工艺中浸渍工艺的作用,浸渍液的选取、配制及浸制工艺分析。

管外高压砾石充填防砂增液技术

从达西定律出发,分析了管外高压砾石充填防砂增液的机理。管外高压充填防砂增液技术通过高液量和大砂量在近井地带形成大半径、高渗透的挡砂屏障;其具有自身转向功能,使多层生产井提高了射孔层的动用程度;能改善甚至解除近井地带的污染堵塞,扩展出油通道,减少油流阻力。通过研究,给出了充填压力、充填流量和充填砂量等参数的设计方法以及砾石和筛管的选择原则,解决了矿场施工技术问题。该技术已施工20井次,累积增油3.2×104t,增油效果明显。

RRM1 mRNA与吉西他滨药物膀胱灌注治疗膀胱癌疗效的关系

目的:研究分析RRM1 mRNA在膀胱癌患者中的表达及其与吉西他滨药物膀胱灌注化疗效果敏感性的关系,旨在为临床膀胱癌患者术后辅助化疗提供个体化治疗方案。方法:采用液相芯片技术检测RRM1 mRNA在膀胱癌患者中的表达,并分析其临床意义。结果:RRM1 mRNA在高级别膀胱尿路上皮癌患者中呈现高表达为12例(30%),呈现低表达为6例(15%);在低级别尿路上皮癌患者中高表达为4例(10%),低表达为18例(45%);应用吉西他滨药物膀胱灌注的膀胱癌患者术后随访1年,其中RRM1 mRNA低表达的患者复发1例(2.5%),RRM1 mRNA高表达的患者复发5例(12.5%)。结论:RRM1 mRNA在膀胱癌患者中的表达与肿瘤病理分级呈正相关关系。RRM1 mRNA表达与吉西他滨膀胱灌注辅助化疗药物敏感性呈负相关关系。RRM1mRNA在膀胱癌患者中的表达对膀胱癌患者术后辅助化疗药物的选择具有重要指导意义。

基于微细加工技术的高精度荧光检测生物芯片

荧光检测生物芯片在生命科学研究及诸多相关领域已经得到了广泛应用。利用荧光修饰核酸探针可以在液相态中检测到c-fos mRNA致癌基因信息或病毒性核糖核酸(RNA)。通过微细加工技术分别制造了变深度微沟道和变宽度微沟道,目的是找到微生物荧光检测芯片中的最佳检测宽度和深度,并对检测装置中光学滤波片进行了优化。芯片采用最优尺寸和装置采用优化过的荧光滤波片,不仅大幅缩短了检测时间,节省了荧光探针试剂,而且还提高了芯片荧光检测灵敏度。实验结果表明:当荧光检测系统的微沟道深度为500μm、宽度为200μm,并使用(480±15)nm的带通滤波片时,荧光修饰核酸探针的探测灵敏度从通常的20 fmol(即2×10-14 mol)减低到50 amol(即5×10-17 mol),提高了约400倍,大大提高了系统的检测精度。

Luminex液态芯片技术在克罗恩病诊断与病情监测中的应用

目的探讨Luminex液态芯片技术检测血清中细胞因子的表达在克罗恩病患者中的临床意义。方法选取不同严重程度克罗恩病(CD)患者76例作为研究对象,选取同期健康人群50例作为对照组。按照MILLIPLEX MAP Kit试剂盒的要求,利用Luminex技术检测血清中细胞因子白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素4(IL-4)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)以及白细胞介素17A(IL-17A)的表达水平,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清中抗酿酒酵母抗体(ASCA),分析CD组与健康对照组之间的差异。结果细胞因子表达水平除IL-17A外,CD组IL-2、IFN-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平均高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);活动期CD患者血清IFN-γ、TNF-α、IL-6水平明显高于缓解期和健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);中、重度活动期CD患者血清TNF-α、IL-6水平高于轻度活动期CD患者,差异有统计学意义(P<0.05);血清ASCA水平在CD组与健康对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),ASCA阳性患者TNF-α、IL-6水平显著高于ASCA阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α、IL-6在CD患者的炎症发生和病情发展中起着重要作用,测定血清TNF-α、IL-6的水平可反映克罗恩病的病情程度。细胞因子水平动态变化与CD病情进展相关,对CD疾病检测和病情监测具有重要意义。