Site-specific cleavage of oncogene Ki-ras mRNA by ribozyme in vitro

Objective: To confirm the cleavage activit y of ribozyme Rz199 designed to oncogene Ki--ras messengerRNA in vitro, and survey the possibility of application of Rz199 in vivo. Methods: The plasmid for transcription invitro of ribozyme Rz199 and Ki ras exon 1 were constructed by DNA recombinant technique. Ribozyme Rz199 andKi--ras exon 1 mRNA were obtained by transcription in vtiro with T7 RNA polymerase. The cleavage reaction wasdone by mixing ribozyme Rz199 and its target RNA in a reactive buffer containing Mg2+. Results: The transcriptof 254 nucleotide (nt) of Ki--ras exon 1 was cleaved into 2 fragments of 90 and 164 nt by ribozyme Rz199.Conclusion: Ribozyme Rz199 can cleave Ki--ras mRNA in a site--specific manner in vitro. though its function in vivoremained to be studied further.

苯并芘诱发人肺癌组织中p53和Ki－ras基因突变研究

为了研究ｐ５３和ｋｉ－ｒａｓ基因在苯并芘致肺癌过程中的作用，我们用免疫组织化学，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对人肺癌细胞系（ＢＴ）ｐ５３基因和ｒａｓ基因进行了研究。结果发现ＢＴ癌细胞中有ｐ５３蛋白和ｍＲＮＡ水平增高，ｃｏｄｏｎ２７３出现了Ｇ→Ｔ突变；ｐ２１癌蛋白高表达，Ｋｉ－ｒａｓ基因ｍＲＮＡ水平增高和ｃｏｄｏｎ１２出现Ｇ→Ｔ突变。结果提示二者协同参与了苯并芘致肺癌过程。从分子水平为苯并芘的致肺癌变机制研究提供了证据。

杂色曲霉素致人胚肺细胞p53及Ki-ras基因突变研究

为探讨中国恶性肿瘤高发区粮食中优势污染霉菌毒素—杂色曲霉素 (Sterigmatocystin,ST)的致癌作用 ,运用银染 PCR- SSCP方法分析了不同浓度的 ST(1μg/ ml和 3μg/ m l)对体外培养的人胚肺细胞恶性转化过程中抑癌基因 p5 3第 5、6、7、8外显子及癌基因 Ki- ras的突变情况。结果显示 ST处理后第 2 2周 ,人胚肺成纤维细胞 p5 3基因的第 8外显子和 Ki- ras癌基因均出现异常泳动带型 ,表明 ST诱发了抑癌基因 p5 3及癌基因 Ki- ras突变 ,进一步证实了 ST对人肺组织的致癌作用。

突变Ki-ras基因修饰的肺癌DC疫苗的体外抗癌活性

目的 探讨以Ki ras基因 12位密码子点突变为靶点 ,构建DC Ad Ki ras(V12 )肺癌疫苗及其抗肺癌免疫治疗的可能性。方法 应用重组腺病毒的方法将人Ki ras基因 12位密码子点突变 (由甘氨酸转变为缬氨酸 )的cDNA导入DC ,构建DC Ad Ki ras(V 12 )肺癌疫苗 ,以流式细胞术、PCR、MLR和CTL等方法检测其免疫活性。结果 ( 1)DC Ad Ki ras(V12 )肺癌疫苗不仅能表达人Ki ras(V12 )基因 ,且能明显刺激T细胞增殖及提高CTL的杀伤作用。 ( 2 )突变Ki ras基因修饰的DC免疫小鼠后 ,可产生针对表达Ki ras(V 12 )基因的Lewis肺癌的特异性杀伤作用 ,但对B16黑色素瘤细胞则无明显杀伤作用。结论 以人突变Ki ras基因修饰的肺癌DC疫苗可在体外特异性诱导抗可表达Ki ras(V 12 )基因的Lewis肺癌的活性。

子宫内膜息肉与子宫内膜癌中Ki-ras基因表达及临床意义

目的 探讨 Ki- ras基因激活与子宫内膜癌中的发生发展关系及子宫内膜息肉与子宫内膜癌的关系。方法 对子宫内膜癌及癌前病变组织进行 Ki- ras蛋白免疫组化测定 ,并利用 PCR技术检测 Ki- ras基因第一外显子 1 2密码子突变。结果 Ki- ras蛋白广泛存在于子宫内膜癌和癌前病变组织中 ,癌前病变 Ki- ras表达为 1 1 .9% ,癌组为 62 .96% ,P<0 .0 5。Ki- ras表达与细胞恶性程度呈正相关。 PCR- RFLP检测与免疫组化结果类似。结论 1 .Ki- ras基因激活可导致细胞周期增殖失控 ,是内膜癌发生发展的一个重要环节 ;2 .动态观测子宫内膜息肉中的 p2 1 ras表达阳性者 ,对子宫内膜癌的早期发现可能有积极意义。

肺鳞癌、肺腺癌Ki-ras和p53基因序列分析

目的 :研究肺鳞癌、腺癌与Ki-ras基因外显子 1,2及p5 3基因外显子 7,8突变谱并观察肺鳞癌、腺癌预后同Ki-ras和 p5 3基因突变的关系。方法 :用PCR和测序方法分析 33例肺鳞癌和 2 7例肺腺癌Ki-ras基因外显子 1,2和 p5 3基因外显子 7,8错义突变。并追踪观察突变者和非突变者的二年存活率。结果 :肺鳞癌中发现 5例 (15 .16 % )Ki-ras基因突变和 12例 (36 .37% )p5 3基因突变 ;肺腺癌中发现 2例 (7.4 1% )Ki-ras基因突变和 7例 (2 5 .93% ) p5 3基因突变 ,两型肺癌间Ki-ras和p5 3基因突变阳性率差异均无统计学意义 (P>0 .0 5 ) ;肺鳞癌、腺癌中 p5 3基因突变总阳性率为 31.6 7% ,Ki-ras基因突变总阳性率仅 11.6 7% ,p5 3基因突变率高于Ki-ras基因突变率 (P <0 .0 5 )。p5 3基因突变谱与一般报道相似。Ki-ras基因突变情况与一般报道有所不同 ,未发现一般文献报道较多的第 12位等密码子突变 ,发现有第 6位密码子纯合性突变和第 31位和第 79位密码子杂合性突变。预后追踪显示 :无突变的病例 2年生存率为 4 0 % ,存在突变的病例 2年生存率仅 12 %。结论 :肺鳞癌、腺癌的Ki-ras和 p5 3基因突变谱较广 ,肺鳞癌和腺癌的预后均与这两个基因突变有关。

中国人与西方人胰腺癌组织中Ki-ras基因第12密码子突变表型的比较

目的探讨中国胰腺癌患者Ki-ras基因第12密码子突变表型的特点及与西方国家胰腺癌的区别。方法采用PCR扩增靶基因片段,Dotblot杂交的方法检测59例中国胰腺癌患者标本中Ki-ras基因第12密码子突变表型。利用Medline检索相关西方国家文献报道的胰腺癌患者Ki-ras基因第12密码子突变表型,并与本组资料进行对比。结果本组患者Ki-ras基因第12密码子突变频繁(76.3%)。与西方国家文献报道的资料比较显示,各国胰腺癌患者中Ki-ras基因第12密码子突变频率差异无统计学意义(P>0.05),但突变的表型及第二碱基突变的转换和颠换比的差异存在统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论Ki-ras基因第12密码子突变在中国胰腺癌患者较频繁,其突变表型在各国胰腺癌患者中可能存在差异。

快速、高敏感度检测Ki-ras基因突变方法的建立及其在检测大肠癌中的应用

建立一种检测Ｋｉ－ｒａｓ基因突变的快速、高敏感度的方法，并将其应用于大肠癌的检测中。应用引物诱导限制富集突变等位基因检测法（ＰＣＲ－ＰＩＲＥＭＡ，ＰｒｉｍｅｒＩｎｔｒｏｄｕｃｅｄＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｗｉｔｈＥｎ－ｒｉｃｈｍｅｎｔｏｆＭｕｔａｎｔＡｌｅｌｅＡｓｓａｙ）的敏感度达１０－５～１０－６，并在３０例大肠癌样品中检测出了８例Ｋｉ－ｒａｓ基因１２密码子突变的样本，突变率达２６．７％。证明ＲＣＲ－ＰＩＲＥＭＡ法是一种快速、敏感度高的方法，适用于在大量野生型拷贝中检测稀有的突变。

肺癌病人Ki－ras基因点突变与术后长期生存关系的研究

本研究应用ＰＣＲ及寡核苷酸探针杂交技术，研究肺癌组织Ｋｉ－ｒａｓ基因点突变与肺癌病人术后长期生存的关系。结果显示：（１）６０例肺癌中Ｋｉ－ｒａｓ点突变率为４１．６７％。（２）小细胞肺癌Ｋｉ－ｒａｓ突变率较鳞癌、腺癌高，分别为５０％、４３．４８％和４０．７４％。（３）有Ｋｉ－ｒａｓ点突变组肺癌病人，其术后１、３、５年生存率分别为６４．０％、３６．０％和２４．０％；而无点突变组肺癌病人术后１、３、５年生存率分别为７４．２９％、５１．４３％和４０．０％。本研究结果表明：研究肺癌的Ｋｉ－ｒａｓ基因点突变，对判断肺癌病人的预后，指导术后的综合治疗，具有重要的临床意义。

大肠肿瘤p53和ki-ras基因协同突变的研究

目的探讨大肠肿瘤p53和ki-ras基因协同突变的临床意义。方法采用免疫组化和PCR-SSCP方法,检测58例大肠肿瘤患者的良性病变、良性病变转为恶变、原发腺癌组织的p53基因、ki-ras基因的表达和突变情况。结果良性病变组与恶变组间的p53基因和Ki-ras基因的表达有显著差异,良性病变组与原发腺癌组的Ki-ras基因表达差异显著;良性病变组的p53基因与Ki-ras基因的表达呈负相关,而恶变组和原发腺癌组呈正相关。p53基因和ki-ras基因两种基因突变率无显著差异,而协同突变与淋巴结转移密切相关,相关系数r=0.335,P=0.017,P<0.05。结论 p53和ki-ras基因协同突变可以促进了大肠癌的发展。监测p53基因和Ki-ras基因的协同表达和突变,有助于大肠肿瘤的早期诊断和预后评价。

子宫内膜息肉与子宫内膜癌中Ki-ras基因表达及临床意义

目的:探讨Ki-ras基因激活与子宫内膜癌中的发生发展关系及子宫内膜息肉与子宫内膜癌的关系。方法:对子宫内膜癌及癌前病变组织进行Ki-ras蛋白免疫组化测定。结果:Ki-ras蛋白广泛存在于子宫内膜癌和癌前病变组织中,癌前病变Ki-ras表达为11.9％,癌组为62.96％,P<0.05;。Ki-ras表达与细胞恶性程度呈正相关。结论:①Ki-ras基因激活可导致细胞周期增殖失控,是内膜癌发生发展的一个重要环节;②动态观测子宫内膜息肉中的P21^(ras)表达阳性者,对子宫内膜癌的早期发现可能有积极意义。

RAS基因相关性自身免疫淋巴增殖性疾病1例并文献复习

目的探讨RAS基因相关自身免疫淋巴增殖性疾病(Ras-associated autoimmune lymphoproliferative disorders,RALD)的临床特征及诊疗方法。方法分析2019年本院诊治的1例RALD患者的临床资料,以基因NRAS、KRAS或RALD为检索词,检索PubMed、中国知网、万方数据库2000年1月—2023年11月RAS基因变异相关文献并进行复习。结果患者因“发现血小板减少1.5年,反复发热1.5月”收住院。查体:轻度贫血貌,腹部膨隆,肝脏肋下5 cm,质韧,脾脏肋下3 cm。CD4-CD8-细胞的比例占淋巴细胞的2.3%。NK细胞脱颗粒功能下降。基因检测:存在NRAS基因2号外显子c.38G>A、p.G13D体细胞突变。共检索到RALD患者32例,其中NRAS基因体细胞突变致RALD有13例,KRAS基因体细胞突变致RALD有19例。32例RALD患者主要特征包括脾脏肿大,免疫性贫血,血小板减少,高丙种球蛋白血症,单核细胞增多,双阴性T细胞比例正常或轻度升高。结论RALD患者的临床特征为肝脾肿大、存在自身免疫现象等,基因分析有助于该疾病的诊断。

结直肠癌患者RAS、BRAF基因突变与MSI状态的相关性及其临床病理特征

目的:结直肠癌是人类最常见的恶行肿瘤之一,其发病率和病死率呈逐年上升趋势。本研究旨在分析结直肠癌患者大鼠肉瘤病毒癌基因(rat sarcoma viral oncogene,RAS)、鼠类肉瘤病毒癌基因同源物(V-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B,BRAF)突变与微卫星不稳定(microsatellite instability,MSI)状态相关性及其临床病理特征,为结直肠癌临床治疗及预后评估提供依据。方法:回顾性分析444例结直肠癌患者的临床病理资料,并提取肿瘤组织基因组DNA,采用荧光定量PCR法检测Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,KRAS)、Neuroblastoma大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(neuroblastoma rat sarcoma viral oncogene homolog,NRAS)第2、3、4外显子及BRAF V600E突变;运用PCR-毛细血管电泳行MSI状态分析。结果:K(N)RAS基因突变184例(41.44%,184/444),其中KRAS突变173例(94.02%,173/184),NRAS突变11例(5.98%,11/184),K(N)RAS共突变3例。BRAF V600E突变21例(4.7%,21/444)。微卫星高度不稳定(microsatellite instability high,MSIH)48例(10.81%,48/444),微卫星低度不稳定(microsatellite instability low,MSI-L)和微卫星稳定(microsatellite stable,MSS)共396例(89.19%,396/444)。K(N)RAS基因突变右半结肠癌多于左半结肠癌,且黏液腺癌突变率高于单纯腺癌(均P<0.05)。K(N)RAS基因突变与患者性别、年龄、肿瘤大小、肉眼分型、组织学分化程度、淋巴结转移、病理分期均无关(均P>0.05)。女性BRAF V600E突变高于男性,低分化高于中分化(均P<0.05),BRAF V600E突变与患者发病年龄、肿瘤位置、大小、肉眼分型、组织学类型、淋巴结转移、病理分期均无关(均P>0.05)。发生MSI-H的患者中,右半结肠癌多于左半结肠癌,肿瘤直径≥4.5 cm病例多于直径更小病例,隆起型多于其他肉眼分型,黏液腺癌多于单纯腺癌,低分化多于高分化(均P<0.05),而与患者性别和年龄均无关(均P>0.05)。K(N)RAS突变与MSI-H发生无关(P>0.05),但RAS基因Gly位点突变与MSI-H发生相关(P<0.05)。携带RAS基因Gly位点突变的MSI-H结直肠癌患者男性多于女性,发病年龄无差异,右半结肠多于左半结肠,肉眼分型多为溃疡型,单纯腺癌比例高于黏液腺癌,多为中低分化,较多处于病理分期I~II期,常不伴淋巴结转移和BRAF V600E突变,Gly突变位点多为Gly12Ser/Asp突变。BRAF V600E突变与MSI-H发生有关(P<0.05)。与K(N)RAS突变型MSI-L/MSS结直肠癌比较,K(N)RAS突变型MSI-H结直肠癌较易发生于右半结肠,肿瘤直径≥4.5 cm的病例较多,组织学类型多为黏液腺癌,较少发生淋巴结转移,多处于病理分期I~II(均P<0.05);K(N)RAS突变型MSI-H结直肠癌与性别、年龄、肿瘤肉眼分型、组织学分化均无相关(均P>0.05)。与RAS野生型-MSI-L/MSS结直肠癌比较,RAS野生型-MSI-H结直肠癌多发生于右半结肠,肿瘤直径≥4.5 cm,多为溃疡型和隆起型,较多为黏液腺癌,且多为中低分化(均P<0.05),而RAS野生型-MSI-H结直肠癌与性别、年龄、淋巴结转移、病理分期均无关(均P>0.05)。结论:结直肠癌KRAS基因Gly位点突变、BRAF V600E突变与MSI-H发生相关;MSI-H-RAS基因Gly点突变结直肠癌患者有其独特的临床病理特征;RAS-MSI基因状态与临床病理特征相关;K(N)RAS、BRAF V600E、MSI检测有利于结直肠癌患者个体化治疗及预后评估。

低剂量CT结合SHOX2、RASSF1A甲基化在肺癌早期预警中的应用

目的探讨低剂量CT结合Ras相关区域家族蛋白1A(RASSF1A)、矮小同源盒基因2(SHOX2)甲基化在肺癌早期预测中的应用价值。方法选取2021年1月~2023年1月我院90例拟行肺结节手术患者,根据手术病理学分为肺良性结节组和肺癌组。2组均于术前行低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化检测,采用Kappa指数分析上述检查结果与手术病理学一致性,分析低剂量CT、SHOX2、RASSF1A甲基化与血清肿瘤标志物[癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、鳞状细胞癌抗原(SCC-Ag)、细胞角蛋白19片段(CYFRA21)]对肺癌诊断效能,采用Spearman低剂量CT检查、SHOX2、RASSF1A甲基化与临床病理特征相关性。结果低剂量CT、SHOX2、RASSF1甲基化及三者联合分别确定40例、43例、46例、58例肺癌,三者联合与手术病理学诊断肺癌效能一致性Kappa值为0.951;三者联合诊断肺癌敏感度96.67%、准确度97.78%均高于三者单一诊断效能(P<0.05);肺癌患者血清CEA、SCC、NSE、CYFRA21水平均高于肺良性结节患者(P<0.05);低剂量CT联合SHOX2、RASSF1甲基化诊断肺癌效能的AUC为0.983,近似于四种血清肿瘤标志物诊断肺癌效能的AUC 0.933;不同肿瘤直径、临床分期、组织学分化肺癌患者低剂量CT检出率及SHOX2、RASSF1A甲基化阳性率比较差异有统计学意义(P<0.05);肺癌患者低剂量CT检出率、SHOX2及RASSF1A甲基化阳性率与肿瘤直径、临床分期呈正相关,与组织学分化呈负相关(P<0.05)。结论低剂量CT联合SHOX2及RASSF1A甲基化可用于肺癌早期预警中,临床可通过其进行早期诊断、评估病情进展程度,以针对性展开后续治疗,改善预后。

P53、P21^(ras)、Ki-67蛋白的表达及微血管密度与甲状腺癌转移关系的研究

目的探讨甲状腺癌中P53、P21ras、Ki-67基因的表达及微血管密度(MVD)与甲状腺癌转移的关系。方法用免疫组化SP法,检测45例甲状腺癌中P53、P21ras、Ki-67及血管标记物CD34蛋白的表达情况,并分析其与临床病理因素的关系。结果45例甲状腺癌中P53和P21ras的阳性表达率分别为22.2%和35.5%,差异无统计学意义;在发生淋巴结转移的13例甲状腺癌中P53蛋白阳性表达率为46.2%,明显高于无转移者的12.5%(χ2=5.77,P<0.05),其Ki-67分级指数有9例分布在Ⅱ~Ⅲ级;在复发病例中P53蛋白的阳性表达率为75%,明显高于未复发病例的10%(χ2=5.92,P<0.05),复发病例的Ki-67分级指数均在Ⅱ级。微血管密度计数在滤泡癌中为79.1±18.4,明显高于乳头状癌的35.4±12.1(t=2.412,P<0.05)。结论P53蛋白阳性表达的甲状腺癌患者易发生淋巴结转移及复发,P21ras及Ki-67的高表达则提示甲状腺癌可能发生淋巴结转移,甲状腺癌组织中的微血管密度与癌组织学类型有关,而与淋巴结转移无关。

原癌基因Ki-ras在寻常性银屑病患者皮损表皮中的表达

运用细胞原位杂交的方法 ,对 16例寻常性银屑病患者及 10例正常人皮肤中原癌基因 Ki-ras的表达进行了观察。结果表明 ,Ki- ras在所有被检测的表皮中均有表达 ,而在银屑病皮损表皮中的表达高于正常人对照 ( P<0 .0 1)。提示原癌基因 Ki-

应用PCR及寡核苷酸探针研究人原发性肺癌中Ki-ras点突变

应用PCR及寡核苷酸探针杂交方法研究了50例人原发性肺癌石蜡切片标本 中Ki-ras 12(Val),Ki-ras 13(Cys)点突变,发现13例为点突变阳性,突变率为26％,其中3例同时兼有二种点突变(Val/Cys);Ki-ras 12位的点突变率(20％)比Ki-ras 13位的点突变率(12％)高。同时还发现Ki-ras基因的点突变存在于腺癌、鳞癌、小细胞肺癌以及各种分化程度的肺癌中。

Studies on the relationship between the point mutation of ras oncogenes and the prognosis of patients with gastric cancer

AIM To study the relationship between the point mutation of ras oncogenes and the prognosis of patients with gastric cancer.

Ki-Ras反义寡核苷酸对人胃癌细胞及血管内皮细胞的作用

:目的 用Ki Ras的反义寡核苷酸 (ASODN)作用于人胃癌细胞和血管内皮细胞 ,为其抑制胃癌生长及其内血管生成进行前期基础研究。方法 MTT法观察Ki RasASODN对两种细胞增殖的影响 ,电镜下观察细胞的超微结构变化及有无凋亡发生。结果 Ki RasASODN可明显抑制人胃癌细胞和血管内皮细胞的增殖。在一定剂量下还可诱发细胞凋亡。结论 Ki RasP2 1在人胃癌细胞和血管内皮细胞的增殖与凋亡调控中具有重要作用。

免疫荧光双标对肝细胞癌及癌旁异型增生肝细胞Ki-67与AMACR和RAS表达的定位分析

目的对肝细胞癌(hepato celluar carcinoma,HCC)及其癌旁异型增生肝细胞Ki-67与α-甲酰基-辅酶A消旋酶(alpha-methylacyl-coenzyme A racemase,AMACR)和RAS表达进行定位分析,探讨AMACR的表达在HCC发生中的意义。方法 90例人HCC、90例癌旁肝组织制作组织芯片,以20例正常肝组织对照。用免疫荧光双标法,通过激光共聚焦显微镜,分析AMACR在肝细胞癌和癌旁异型增生肝细胞的表达与Ki-67、癌基因蛋白RAS表达的原位定位关系。结果 HCC组织中AMACR的表达显著高于癌旁肝组织,而且在HCC组织中AMACR的表达多呈弥漫性分布;HCC组织中显示Ki-67标记指数比癌旁组织高。结论 AMACR可能参与RAS信号在肝细胞异型增生和HCC早期发生的信号机制。