多异体脐血输注诱导产生免疫低反应性的实验与临床研究

目的 探讨多异体脐血输注诱导肾移植受者产生同种免疫低反应的可行性及对移植肾早期排斥反应的影响。方法 对 2 0例肾移植受者术前行多异体脐血输注 ,分别于输血前及输血后 1月、2月、3月 ,检测受者和供者特异性单向混合淋巴细胞反应 ( ML R)等指标的变化 ;并比较肾移植术后早期脐血组与对照组排斥反应的发生情况。结果 脐血输注后受者对供脐血的特异的 ML R显著降低 ( P<0 .0 1) ,对无关成人的 ML R亦有明显下降( P<0 .0 5 )。移植后三月脐血组无一例排斥反应发生。结论 多异体脐血输注能诱导肾移植受者产生同种免疫低反应性。这种低反应性可能对移植肾早期排斥反应的发生有抑制作用。

MHC不相合的双份鼠胎血移植后受体鼠混合嵌合体形成(英文)

本室已经建立了MHC不相合单份鼠胎血同种移植的小鼠模型。基于脐血造血干细胞的免疫学特性及临床实践 ,我们认为脐血移植成功的关键除了选择尽可能相合的供者外 ,保证移植细胞的数量更为重要。因此 ,为了提高移植干细胞的数量 ,本研究在前期工作的基础上 ,探讨MHC不相合的双份鼠胎血混合移植的可能性。研究结果表明 ,混合移植组 4 0只受鼠中有 2 6只在 6 0天的观察期内存活下来 ;应用PCR及流式细胞术均检测到受鼠体内有混合嵌合体的形成 ;此外 ,皮肤移植试验也发现受鼠已被诱导形成对供鼠的特异性免疫耐受 ;小肠组织的病理切片显示受鼠仅表现出轻度GVHD。结论 :MHC不相合的双份鼠胎血能够同时植入 ,重建受鼠的免疫与造血系统 ,这为拓宽脐血的临床应用 ,使更多患者能够有机会接受脐血移植做了有益的尝试。

混合脐血移植重建小鼠免疫造血功能的研究

目的：探索多份脐血混合移植重建免疫造血系统的可能性，扩大脐血移植的应用范围。方法：将1×10^6个C57BL／6和1×10^6个615小鼠脐血单个核细胞(MNC)同时输注给经致死量照射的BALB／c小鼠，10--15天后检查受鼠的脾结节(CFU—S)，作受鼠的骨髓粒—巨噬细胞集落形成单位(CFU—GM)培养，以检测造血重建；1个月后用流式细胞仪(FCM)检测受鼠体内供者细胞的嵌合状态；用单向混合淋巴细胞反应(MLR)检测免疫重建和免疫耐受；用受鼠小肠和皮肤病理切片检测移植物抗宿主病(GVHD)。结果：混合脐血移植小鼠的生存率为65％，未移植小鼠全部死亡；移植后10一15天在小鼠的脾脏可以检测到CFU—S，小鼠骨髓培养有CFU—GM生长；移植后30天发现在同一个小鼠的体内有2个供者的不全嵌合体同时存在；受鼠对两个供鼠的淋巴细胞均产生了免疫耐受；受鼠小肠和皮肤病理切片检查表明有轻—中度GVHD。结论：混合脐血移植可以重建同种异基因小鼠的免疫和造血功能而不引起重度GVHD。本研究为扩大脐血移植的应用范围打下了一定的理论和实践基础。

脐血间充质干细胞心肌移植对梗死区CD4^+T、CD8^+T淋巴细胞分布的影响

目的研究犬脐血间充质干细胞(cbMSC)心肌移植对梗死区CD4+T、CD8+T淋巴细胞分布的影响。方法取犬脐带血,密度梯度离心法分离出单个核细胞,贴壁培养法扩增间质干细胞;采用随机数字表法将成年雄性杂种犬36只分为实验组和对照组,采用结扎冠状动脉左前降支的方法建立急性心肌梗死动物模型;实验组取第4代细胞用5-氮杂胞苷诱导72h,LacZ报告基因标记后经冠状动脉移植入犬心脏的梗死区域,对照组注射等体积的IMDM培养液;采用免疫组织化学法检测表达β-gal的移植细胞以及梗死区域CD4+T、CD8+T的分布,应用Image-Proplus5.1软件进行图象分析。结果异体犬cbMSC移植心肌梗死区后可长期存活;图象分析显示,实验组移植后第2、4、8周时,CD4+T的累积光密度值(IOD)为44.35±7.03,19.29±4.11和20.27±3.51,CD4+T与CD8+T的IOD比值为0.63±0.12,0.51±0.15和0.66±0.08;对照组CD4+T的IOD值为65.78±10.27,28.02±2.59和29.79±6.83,CD4+T与CD8+T的IOD比值为1.28±0.20,1.34±0.09和1.50±0.16,两组比较实验组明显低于对照组。检测表明,实验组移植后第2、4、8周时CD8+T的IOD为69.88±7.84,37.80±8.83和30.81±7.42,高于对照组的51.28±10.01,20.87±4.50和19.91±2.87。结论初步的实验结果表明,犬cbMSC的同种异体移植能产生免疫耐受,其机制可能与其抑制CD4+T,减少局部浸润的CD4+T数量,降低局部CD4+T/CD8+T比值有关。

HBeAg能上调新生儿脐带血中调节性T细胞的表达

目的:观察HBsAg阳性产妇新生儿脐带血CD4+CD25+CD127low/-调节性T细胞(RegulatoryTcell,Treg)的数量,探讨HBeAg在新生儿HBV持续性感染中的作用。方法:共收集63例HBsAg阳性产妇新生儿脐带血,按照产妇产前HBeAg状态分为A组33例HBeAg阳性,B组30例HBeAg阴性,C组22例HBsAg阴性产妇做为对照组。利用三色流式分析法分析新生儿脐带血单个核细胞(Cord blood monocytes,CBMCs)中的Treg的频数。并检测产妇及其脐带血中的HBV血清标志物和HBV DNA水平。结果:A组33例其中有24例脐带血HBeAg阳性;B组和C组脐带血HBeAg均为阴性。所有HBsAg阳性产妇新生儿脐带血HBVDNA均为阴性。新生儿脐带血HBeAg水平与产妇外周血HBeAg水平无关(P>0.05)。与B组和C组相比较,A组新生儿脐带血中的Treg百分比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。而B组和C组之间差异无统计学意义(P>0.05)。A组脐带血Treg百分比与产妇HBVDNA、HBeAg及脐带血HBeAg水平无关(P>0.05)。结论:HBeAg可以通过胎盘到达胎儿体内,可能通过上调Treg的比例,使HBeAg阳性产妇新生儿在宫内对HBV产生免疫耐受。

宫内炎症暴露对早产儿固有免疫应答的影响

目的探讨宫内炎症暴露对早产儿固有免疫应答的影响。方法 2013年6月至2014年6月出生、胎龄<35周的早产儿47例纳入本研究。依据胎盘病理检查结果,将早产儿分为宫内炎症阳性组和阴性组。采用Ficoll密度梯度离心法和贴壁黏附法分别获得脐血单个核细胞以及单核细胞。用内毒素(LPS,100 ng/ml)刺激单个核细胞12 h后,流式细胞术(PCR)检测CD14+单核细胞HLA-DR的表达量以及CD3+CD4+/CD3+CD8+的比例。用LPS(100 ng/ml)刺激单核细胞6 h后,Real-Time PCR检测单核细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-αm RNA表达量的变化。ELISA检测脐血以及单核细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、IL-10和TNF-α水平。结果宫内炎症阳性组脐血血浆IL-6水平高于宫内炎症阴性组,差异有统计学意义(P=0.001)。LPS刺激后,两组单核细胞IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-αm RNA表达量及培养上清液中蛋白水平均显著升高,与刺激前比较差异均有统计学意义(P<0.05);但两组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。LPS刺激后,宫内炎症阳性组CD14+单核细胞HLA-DR表达量显著降低,而宫内炎症阴性组则显著升高,与刺激前比较差异均有统计学意义(P<0.05);且阳性组HLA-DR表达量显著低于阴性组(P=0.002)。结论宫内炎症暴露并不影响早产儿脐血单核细胞对LPS的应答反应水平,但可抑制单核细胞激活后主要抗原递呈受体的表达。

髓源性抑制细胞在妊娠过程中的变化及作用

目的探索髓源性抑制细胞(MDSC)在妊娠过程中的变化以及免疫抑制作用,为母胎免疫耐受调控提供理论基础。方法选取2014年1~12月在我院行产检的正常妊娠妇女共106例作为研究对象,孕早、中、晚期孕妇分别为24、29、32例,产妇21例。对照组为于我院行孕前检查的正常妇女,无流产史及其他基础疾病,共34例。分别采集孕早期、中期、晚期外周血以及产妇生产时外周血、脐带血、胎盘以及蜕膜组织、产后24h外周血进行检测。孕早、中、晚期孕妇分别为24、29、32例,产妇为21例。对照组为于我院行孕前检查的正常妇女,无流产史及其他基础疾病,共34例。采用流式细胞仪技术检测MDSC的比例,分析MDSC的变化。采用流式分选、纯化后的MDSC,与CD3+T细胞共培养,通过分析[3 H]胸(腺嘧啶脱氧核)苷密度分析T细胞增殖能力。结果妊娠妇女外周血MDSC的比例(6.25±3.59)%显著高于未妊娠正常女性(1.70±0.77)%(P<0.01),而孕中期外周血MDSC比例(10.43±7.22)%显著高于孕早期(3.88±1.67)%、晚期(5.25±1.91)%(P<0.01);分娩后,外周血MDSC比例(1.81±1.08)%下降至妊娠前水平。脐带血、蜕膜以及胎盘组织中MDSC的比例也维持在较高水平,脐带血MDSC比例(17.15±6.00)%显著高于蜕膜(8.65±3.67)%及胎盘(7.66±3.73)%(P<0.01)。MDSC显著抑制外周血CD3+T细胞增殖能力(P<0.01)。结论 MDSC可能参与了母胎免疫耐受的调节,抑制母体免疫排斥反应,有利于妊娠继续维持。

新生儿脐带血调节性T细胞比率及T细胞上PD-1表达的初步研究

目的探讨新生儿脐带血(CB)和母亲外周血(PB)中调节性T(Treg)细胞比率及T细胞上程序性死亡受体1(PD-1)的表达差异。方法收集新生儿脐带血24例,母亲外周血20例。血常规检测白细胞计数及分类;流式细胞术检测新鲜血液中CD34+造血干细胞的含量、Treg细胞的比率及T细胞上PD-1的百分比;植物血凝素(PHA-L)体外刺激CB和PB后,检测T细胞上PD-1表达的变化。结果新鲜CB组中Treg细胞的比率高于新鲜PB组(P<0.05)。新鲜CB组中CD4+T细胞上PD-1的表达水平明显低于PB组(P<0.001)。PHA-L体外刺激CB发现,PD-1在CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞上表达均升高(P均<0.05);PHA-L体外刺激PB发现,PD-1在CD3+CD4+T细胞上表达升高(P<0.05),在CD3+CD8+T细胞上表达升高无统计学意义(P>0.05)。结论新生儿脐带血Treg细胞比率较母亲外周血高,而脐带血T细胞上PD-1表达量较低,但活化后表达升高更明显,可能是脐带血作为移植物能够降低移植物抗宿主病(GVHD)发病率和严重程度的原因。