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简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
1
作者
王健琪
翟朝阳
孙剑
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期435-440,共6页
从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表...
从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中成功地表达出了GST/predhPK-5融合蛋白,并通过免疫学测定,相对分子质量约为3.6×104,与理论值3.58×104相符.目的蛋白表达量占菌体总蛋白的23.6%.
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关键词
简化的hPK-5
kimgle环
基因重组
融和表达
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职称材料
题名
简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
1
作者
王健琪
翟朝阳
孙剑
机构
四川大学华西基础医学与法医学院生物化学与分子生物学实验室
出处
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第2期435-440,共6页
文摘
从正常人肝脏组织中提取总RNA,合理设计引物,利用RT-PCR直接得到简化的hPK-5基因.将该基因克隆至原核表达质粒pGEX-1λT,将此重组载体转化大肠杆菌JM109,经PCR、酶切及测序鉴定阳性克隆.用IPTG诱导阳性克隆表达融和蛋白,SDS-PAGE观察表达产物.再通过Western-Blotting鉴定.简化的hPK-5基因的RT-PCR产物为264bp.通过酶切、测序等方法鉴定简化的hPK-5基因正确克隆至原核表达质粒pGEX-1λT中.重组质粒pGEX-1λT/predhPK-5在大肠杆菌中成功地表达出了GST/predhPK-5融合蛋白,并通过免疫学测定,相对分子质量约为3.6×104,与理论值3.58×104相符.目的蛋白表达量占菌体总蛋白的23.6%.
关键词
简化的hPK-5
kimgle环
基因重组
融和表达
Keywords
:predigested hPK-5
Kringle 5
recombinant gene
fusion expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
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1
简化的人纤溶酶原饼环区5基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达
王健琪
翟朝阳
孙剑
《四川大学学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
北大核心
2006
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