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Primary Study of Egg Yolk Antibody for Detection of King Cobra Venom Antigens
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作者 王桂平 刘新艳 +3 位作者 朱柳 覃媛 黄劭 余清声 《Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences》 CAS 2005年第3期193-197,共5页
Aim To study whether antivenom from laying hens can be used for the detection of venom antigens, Methods Chickens (white Leghorn) were immunized with detoxicated king cobra venom by formaldehyde and egg yolk immunog... Aim To study whether antivenom from laying hens can be used for the detection of venom antigens, Methods Chickens (white Leghorn) were immunized with detoxicated king cobra venom by formaldehyde and egg yolk immunoglobulin (IgY) isolated from yolk; IgY was labelled with the horseradish peroxidase (HRP). Experimental condition and parameters were determined by chessboard test. The specificity, sensitivity, precision, and stability of this method were assayed in the experiment. Results This method could detect as low as 32 μg· L^-1 of the king cobra antigens. A good linear relation was found within 32 ~ 750 μg· L^-1 of king cobra venom concentrations ( r = 0. 963). There was no cross reactivity for the reagents with Agkistrodon acutus Guenther venom or Vipera russelli siamensis Smith venom;slight cross reactivity .with Bungarus multicinctus Blyth venom or Bungarus fasciatus Chmeider venom; and notable cross reactivity with cobra venom. The average intra-assay relative standard deviation (RSD) was 1% - 3%, and the inter-assay RSD was less than 8%. The reagents (including IgY and HRP-IgY) were stable; no differences (P 〉 0.05) were observed for the detection of venom antigens when the reagents were stored at 37 ℃ up to 6 d. Conclusion IgY is a good reagent for diagnosis of snakebite after eliminating the genus cross reactivity. 展开更多
关键词 king cobra venom yolk immunoglobulin HENS enzyme-linked immunosorbent assays
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Mortality of a Wild King Cobra, Ophiophagus hannah Cantor, 1836(Serpentes: Elapidae) from Northeast Thailand after Ingesting a Plastic Bag
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作者 Colin Thomas STRINE Inês SILVA +4 位作者 Matthew CRANE Bartosz NADOLSKI Taksin ARTCHAWAKOM Matt GOODE Pongthep SUWANWAREE 《Asian Herpetological Research》 SCIE 2014年第4期284-286,共3页
Wild King Cobras, Ophiophagus hannah, are known to prey almost exclusively on snakes. We observed opportunistic ingestion of a plastic bag by a radio-tracked adult male O. hannah, which was detrimental to the health o... Wild King Cobras, Ophiophagus hannah, are known to prey almost exclusively on snakes. We observed opportunistic ingestion of a plastic bag by a radio-tracked adult male O. hannah, which was detrimental to the health of the individual and likely lead to its death. Our observation demonstrates that improper disposal of food and plastic waste can be a threat to snakes, highlighting the need to maintain a waste-free environment, especially in areas inhabited by vulnerable species. 展开更多
关键词 GARBAGE Sakaerat SNAKE Waste king cobra Ophiophagus hannah
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Taming King Cobra
3
作者 Jessica Achberger 《ChinAfrica》 2012年第5期27-27,共1页
WHEN Zambia's Patriotic Front opposition leader Michael Sata took power with a 41.98 percent poll victory in September last year, the country signaled it was ready for change.
关键词 Taming king cobra
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广西境内两种常见神经毒类毒蛇咬伤中毒的临床特点与院前急救策略分析 被引量:13
4
作者 王威 陈泉芳 +5 位作者 巫艳彬 李其斌 苌海华 廖园莉 白玉龙 黄锟 《中国全科医学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第14期1671-1673,共3页
目的分析广西境内两种常见神经毒类毒蛇咬伤中毒的临床特点,总结其院前急救策略,为临床提供参考。方法选择2007—2012年在我科急诊抢救与住院的102例眼镜王蛇与银环蛇咬伤中毒患者,根据咬伤蛇类将患者分为眼镜王蛇组35例和银环蛇组67例... 目的分析广西境内两种常见神经毒类毒蛇咬伤中毒的临床特点,总结其院前急救策略,为临床提供参考。方法选择2007—2012年在我科急诊抢救与住院的102例眼镜王蛇与银环蛇咬伤中毒患者,根据咬伤蛇类将患者分为眼镜王蛇组35例和银环蛇组67例,对比两组患者的院前急救措施、就诊时间、出现呼吸肌麻痹时间、伤情分级、临床表现、呼吸机治疗情况、预后情况及院外与院内死亡率等。结果两组患者的性别、年龄、院前急救措施及就诊时间比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。眼镜王蛇组危重型患者所占比例高于银环蛇组(80.00%和58.21%,P=0.028)。两组患者均出现了全身症状,眼镜王蛇组局部肿痛发生率(8.57%和0,P=0.015)、多器官功能障碍综合征(MODS)发生率(20.00%和5.97%,P=0.030)高于银环蛇组,出现呼吸肌麻痹时间短于银环蛇组〔(3.8±2.2)h和(7.1±8.4)h,P=0.042〕。眼镜王蛇组治愈率低于银环蛇组(77.14%和95.52%),死亡率高于银环蛇组(22.86%和4.48%),且眼镜王蛇组院外死亡率高于银环蛇组(11.43%和1.49%,P=0.027)。结论相对于银环蛇,被眼镜王蛇咬伤患者病情更为凶险,出现呼吸肌麻痹的时间更短,MODS发生率及院外死亡率更高,医务工作者应充分认识呼吸机辅助呼吸治疗的关键性,加强神经毒类毒蛇咬伤院前急救策略的宣教。 展开更多
关键词 蛇咬伤 眼镜蛇科 眼镜蛇神经毒素蛋白质类 眼镜王蛇 银环蛇 疾病特征 入院前急救
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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的制备 被引量:7
5
作者 王桂平 余清声 +1 位作者 覃媛 黄劭 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期1426-1429,共4页
目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法 以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼... 目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法 以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫抗散法测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用福林酚法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定分子量及鉴定抗体纯度 ;抗体的特异性及交叉反应采用酶联免疫吸附法进行进行验证。结果 母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0天后抗体效价超过 10 5;卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97 5mg ;所获取的抗体具有高度特异性 ,与蝰蛇科属的其它蛇毒无交叉反应 ,与眼镜蛇科蛇毒存在不同程度交叉反应 (蛇毒浓度大于5 0 0 μg·L-1时明显 )。结论 本研究首次研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,开拓了我国蛇伤治疗的新领域 ,并分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 ,同时也促进其它抗蛇毒鸡卵黄抗体的研究开发及蛇毒单克隆抗体的研制。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体(IgY)
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抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其对眼镜王蛇毒的中和作用 被引量:3
6
作者 王桂平 刘新艳 +1 位作者 朱柳 余清声 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2007年第11期1250-1254,共5页
目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗... 目的:探讨抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的免疫活性及其在体内外对眼镜王蛇毒的中和作用。方法:采用嗜硫色谱法一步分离纯化抗眼镜王蛇毒卵黄抗体,通过间接ELISA法对制备的抗眼镜王蛇毒卵黄抗体进行免疫活性检测,采用小鼠体内外保护实验评估抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒的中和作用。结果:嗜硫色谱法制备的卵黄抗体具有良好的免疫活性,并且对眼镜王蛇毒素显示较好的中和效应,在体外6mg/kg抗眼镜王蛇毒卵黄抗体可有效地中和约4LD50(约1.6mg/kg)的眼镜王蛇毒素,而在体内可有效地中和约3LD50(约1.2mg/kg)的眼镜王蛇毒素。结论:抗眼镜王蛇毒卵黄抗体对眼镜王蛇毒具有良好的中和作用,本项目为抗眼镜王蛇毒卵黄抗体的进一步研究开发提供实验依据。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 卵黄抗体 免疫活性 中和作用
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眼镜王蛇线粒体基因组全序列分析 被引量:4
7
作者 陈念 赖小平 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期719-725,共7页
参照近缘物种线粒体基因序列共设计和合成了8对引物,结合Ex Taq-PCR、TA克隆和步移测序技术,文章首次获得眼镜王蛇线粒体基因组全序列(GenBank登录号:EU_921899)。该基因组全长17 267 bp,共编码13个蛋白、2个rRNA、23个tRNA——其中tRNA... 参照近缘物种线粒体基因序列共设计和合成了8对引物,结合Ex Taq-PCR、TA克隆和步移测序技术,文章首次获得眼镜王蛇线粒体基因组全序列(GenBank登录号:EU_921899)。该基因组全长17 267 bp,共编码13个蛋白、2个rRNA、23个tRNA——其中tRNA-Ile基因发生了复制,属于一种新的蛇类物种线粒体基因排列模式,另外还含有2个非编码的富含AT的控制区。除了8个tRNA基因和1个蛋白基因由L链编码外,其余均由H链编码,其中H链编码基因的A和T含量接近,而L链上A的含量则明显高于T。基于21种蛇合并的"12S+16S"rRNA基因序列的系统发育分析表明,眼镜王蛇属与眼镜蛇属亲缘关系较近,两者与环蛇属共同构成一个单系群。作为国内外眼镜王蛇线粒体基因组全序列的首次报道,上述结果对于蛇类物种分子系统发育和进化研究具有重要意义。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 线粒体基因组 系统发育
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广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化及性质研究 被引量:1
8
作者 林文珍 庄茂辛 +2 位作者 舒雨雁 林政炯 周元聪 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2007年第2期189-192,共4页
目的:广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化和性质研究。方法:分离纯化采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析,Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose CL-6B离子交换柱层析;通过电泳,磷脂酶A2(PLA2)酶活力测定,氨基酸组成分析,N端序... 目的:广西眼镜王蛇毒一种碱性蛋白的分离纯化和性质研究。方法:分离纯化采用DEAE-Sepharose CL-6B离子交换柱层析,Sephadex G-75凝胶过滤和CM-Sepharose CL-6B离子交换柱层析;通过电泳,磷脂酶A2(PLA2)酶活力测定,氨基酸组成分析,N端序列测定及药理实验进行性质研究。结果:从广西眼镜王蛇毒中分离到一种电泳纯的碱性蛋白(命名为CM-IV),相对分子质量约为14000,等电点约为8.65;PLA2的比活力为23μmol·mg-1/min。氨基酸组成分析表明,其分子中Cys的含量占6.85%;利用蛋白质直接测序N端序列为TKCYVTPDVK。药理实验表明它对实验用小白鼠有致死性(LD50约为0.2mg/kg),并具有心脏毒性,但无血小板抑制活性。根据Genebank Blast分析软件,它的N端序列与神经毒素具有高度的同源性。结论:这种碱性蛋白可能为神经毒素,但却拥有PLA2的活力。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 纯化 性质 碱性蛋白
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眼镜王蛇毒中毒发病机理的研究报告 被引量:4
9
作者 李其斌 黄嫣娇 +1 位作者 林可干 方饶墀 《蛇志》 1990年第4期7-10,共4页
采用CM-Sepharose CL-6B柱层■可从广西产眼镜王蛇毒中得到28个蛋白峰,研究表明眼镜王蛇毒是一种含有多种毒性组份的毒性蛋白,可引起动物的局部损伤及心、肝、肺、肾、脑、肋肌和神经、血液等多个器官系统的病理学改变。眼镜王蛇毒中毒... 采用CM-Sepharose CL-6B柱层■可从广西产眼镜王蛇毒中得到28个蛋白峰,研究表明眼镜王蛇毒是一种含有多种毒性组份的毒性蛋白,可引起动物的局部损伤及心、肝、肺、肾、脑、肋肌和神经、血液等多个器官系统的病理学改变。眼镜王蛇毒中毒死亡的主要原因为神经毒素致呼吸麻痹引起全身重要生命器官缺氧加上急性微循环衰竭的综合作用所致,并提出有关抢救新方法。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 蛇毒 中毒 发病机理
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抢救眼镜王蛇(Ophiophagus hannah)咬伤中毒12例临床报告 被引量:10
10
作者 李其斌 黄嫣娇 +1 位作者 方饶墀 林可干 《蛇志》 1993年第2期25-28,共4页
本文报告1986年至1992年作者主持抢救眼镜王蛇咬伤中毒12例的临床研究结果,其中男11例,女1例,年龄最大69岁,最小11岁,农民9例.临床主要局部表现为剧痛,肿胀,部分病例有轻度坏死,所有病人均有吞咽困难、眼睑下垂、呼吸困难等神经毒表现... 本文报告1986年至1992年作者主持抢救眼镜王蛇咬伤中毒12例的临床研究结果,其中男11例,女1例,年龄最大69岁,最小11岁,农民9例.临床主要局部表现为剧痛,肿胀,部分病例有轻度坏死,所有病人均有吞咽困难、眼睑下垂、呼吸困难等神经毒表现。引起自主呼吸停止8例(67%)。心跳停止1例,经抢救死亡1例,死亡率8.33%。抢救存活11例,救活率91.67%。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 蛇毒中毒 蛇伤
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鸡卵黄抗眼镜王蛇毒抗体IgY的理化特性 被引量:2
11
作者 王薇 余清声 王桂平 《蛇志》 2003年第4期5-8,共4页
目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体并研究该抗体的理化特性。 方法 拟用减毒后的眼镜王蛇毒免疫母鸡后 ,从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y。采用间接 ELISA法对此抗体的理化特性进行研究。 结果  ELISA显示免疫后 12天开始出现特... 目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体并研究该抗体的理化特性。 方法 拟用减毒后的眼镜王蛇毒免疫母鸡后 ,从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y。采用间接 ELISA法对此抗体的理化特性进行研究。 结果  ELISA显示免疫后 12天开始出现特异性抗体 ,且抗体滴度逐渐升高 ,约在免疫后 6 0天左右 ,最高可达 1:10 0 0 0 0 ,此最高滴度可维持 30天 ,以后滴度逐渐降低 ,至免疫后 10 0~ 110天 ,滴度仍可维持在最高滴度的一半 ( 1:50 0 0 0 )。此抗体在 10~ 6 5℃温度范围内活性保持稳定 ;在 p H为 4~ 12范围内 ,抗体活性稳定 ;此抗体经胰蛋白酶处理 1h内 ,活性下降不明显 ,但 1h以后活性迅速下降。 结论 从卵黄中制备抗眼镜王蛇毒抗体 Ig Y,是可行的 ,稳定的。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 鸡卵黄免疫球蛋白IgY 酶联免疫吸附测定 理化特性
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眼镜王蛇三指毒素新cDNA序列的克隆及结构分析
12
作者 李晶 梁成罡 +1 位作者 徐康森 杨化新 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期6-9,共4页
目的:获得眼镜王蛇中多种三指毒素的新的cDNA序列,分析其结构特征,为王蛇三指毒素基因组特征的研究及重组药物的开发奠定基础。方法:采用类似蛇种的毒素信号肽编码序列及简并引物获得部分cDNA序列,再通过3’RACE法获得多种编码成熟三指... 目的:获得眼镜王蛇中多种三指毒素的新的cDNA序列,分析其结构特征,为王蛇三指毒素基因组特征的研究及重组药物的开发奠定基础。方法:采用类似蛇种的毒素信号肽编码序列及简并引物获得部分cDNA序列,再通过3’RACE法获得多种编码成熟三指毒素的完整新cDNA序列。通过BLAST检索,利用功能软件构建系统发生进化树进行分析。结果:获得了眼镜王蛇6类三指毒素共19条新基因的cDNA序列,GenBank的接收号为DQ273567~DQ273585。这些cDNA长度都在480bp左右,彼此之间序列相似度均在70%以上,且每类毒素的cDNA都呈现高度的序列多态性。结论:通过合理的引物设计及3’RACE法成功获得了眼镜王蛇中多种三指毒素的新的编码序列。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 三指毒素 简并引物 3’RACE法 系统发生进化树
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眼镜王蛇神经毒素CM—11^1H谱的计算机辅助谱峰自动归属
13
作者 刘卫东 裴奉奎 +1 位作者 庞玉玺 刘爱琢 《分析测试学报》 CAS CSCD 1998年第2期13-16,共4页
2DNMR谱的自动归属是核磁共振发展的一个方向,CAPRI即是蛋白质1H谱的计算机辅助谱峰归属的一种程序。作者将其应用于眼镜王蛇神经毒素CM-111H谱的归属,讨论了CAPRI的功能和特点以及运用在CM-11后得到的... 2DNMR谱的自动归属是核磁共振发展的一个方向,CAPRI即是蛋白质1H谱的计算机辅助谱峰归属的一种程序。作者将其应用于眼镜王蛇神经毒素CM-111H谱的归属,讨论了CAPRI的功能和特点以及运用在CM-11后得到的分析结果。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 神经毒素 CM-11 核磁共振谱 CAPRI
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普通离子交换剂用于HPLC柱层析法快速分离眼镜王蛇毒(英文)
14
作者 李其斌 莫武宁 +3 位作者 黄光武 金城记代彦 中村真理子 小杉忠诚 《蛇志》 2002年第3期1-8,共8页
目的 为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。 方法 用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行... 目的 为了经济快速分离眼镜王蛇(Ophiophagushannah,Oh)蛇毒中的毒素成分。 方法 用普通离子交换剂于高效液相色谱柱 (HPLC) TSKgel SP-Toyopearl 65 0 SF (4× 1 5 0 mm)层析法 ,实验取得最佳分离条件后 ,将蛇毒样品上柱后进行梯度洗脱 ,各洗脱峰收集后在 Cosmosil 5 C4-AR-3 0 0柱 (4 .6× 1 5 0 mm)上进行逆相 HPLC分析。非单峰组分再进行 HPLC凝胶过滤柱TSKgel Toyopearl HW-40 Fine(4× 2 5 0 mm)层析 ,层析峰组分再进行 HPLC逆相分析。 结果 眼镜王蛇毒经HPLC离子交换柱层析获得了 1 6个蛋白组分 ,其中有 5个组分经逆相 HPLC分析单一组分 ;另外的复合性组分再进行 HPLC凝胶过滤柱层析后又得到 5个单峰蛋白组分。 结论 HPLC离子交换柱层析对分离蛇毒蛋白很有实用价值 ,特别是蛇毒样品量少的情况下 (1 0 ug)也能较好分离。还具有分离时间短 (1 h左右 ) ,无须低温条件等优点。 展开更多
关键词 普通离子交换剂 HPLC柱层析法 分离 眼镜王蛇毒
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广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒冻干粉的鉴别及质量控制的研究 V.广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸分析
15
作者 何子安 孙方人 +1 位作者 章光远 陈玉珍 《蛇志》 1996年第1期8-10,共3页
本文采用日立835-50型氨基酸自动分析仪测定了广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的氨基酸成分,结果表明两种蛇毒的氨基酸组成基本相同,但多种氨基酸的含量存在明显差异,为蛇毒鉴别和质控提供实验依据。
关键词 蛇毒 眼镜蛇毒 眼镜王蛇 氨基酸
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蛇毒冻干粉的鉴别及质量控制的研究——Ⅰ.广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒的理化性质及其特征性吸收光谱曲线的比较
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作者 何子安 孙方人 《蛇志》 1992年第1期8-10,12,共4页
本文对广东眼镜蛇蛇毒与眼镜王蛇蛇毒冻干粉的外观色泽、理化性质、含水量、含氮量和紫外吸收光谱曲线进行了较系统的分析测试.其结果为这两种蛇毒的鉴别及其制品质量的控制提供了实验依据.
关键词 眼镜蛇 眼镜王蛇 蛇毒冻干粉 鉴定
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30例眼镜王蛇咬伤患者的护理 被引量:2
17
作者 容彩莲 冯湛熙 +2 位作者 杨婕 徐小丽 蒋海燕 《蛇志》 2020年第1期32-33,43,共3页
目的总结30例眼镜王蛇咬伤患者的临床护理方法及要点。方法2010年1月~2018年12月我院收治中眼镜王蛇咬伤患者30例,通过对患者实施急救护理措施,加强病情观察,做好药物护理及心理、饮食护理,严格落实院内感染控制措施及并发症的预防等护... 目的总结30例眼镜王蛇咬伤患者的临床护理方法及要点。方法2010年1月~2018年12月我院收治中眼镜王蛇咬伤患者30例,通过对患者实施急救护理措施,加强病情观察,做好药物护理及心理、饮食护理,严格落实院内感染控制措施及并发症的预防等护理措施进行救护。结果27例治愈出院,2例残疾,1例转外院治疗因合并症死亡。结论眼镜王蛇咬伤患者病情凶险,要加强病人的救治与护理,同时严格落实院内感染控制措施及预防并发症等是提高临床治愈的重要保证。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 毒蛇咬伤 护理
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眼镜王蛇神经毒素的提纯及其性质的研究 被引量:2
18
作者 刘静芳 《河北医学院学报》 1992年第1期14-18,共5页
本文用SP-SephadexC-25柱层析法分离广西眼镜王蛇蛇毒,得到19个组分,其中7个组分有毒性。对毒性较强,含量较高的4个毒性组分(即神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ)用SephadexG-50凝胶过滤法进行纯化,并对神蛇经毒素Ⅶ和Ⅹ用CM-SephadexC-50柱层析... 本文用SP-SephadexC-25柱层析法分离广西眼镜王蛇蛇毒,得到19个组分,其中7个组分有毒性。对毒性较强,含量较高的4个毒性组分(即神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ)用SephadexG-50凝胶过滤法进行纯化,并对神蛇经毒素Ⅶ和Ⅹ用CM-SephadexC-50柱层析法做了进一步纯化。经聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)鉴定,这4个神经毒素均为单一条带。用SDS-PAGE法测得神经毒素Ⅴ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅹ的分子量分别为7800,6700,8400和8000,并用它们进行了小鸡颈二腹肌神经—肌肉接头传递的阻遏试验,结果表明这4个神经毒素均有阻遏神经—肌肉接头传递的作用,而且阻遇作用基本不可逆,属于突触后神经毒素。 展开更多
关键词 眼镜王蛇 蛇毒 神经毒素 柱层析
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抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体的研制及初步应用 被引量:12
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作者 余清声 王桂平 +2 位作者 王薇 覃媛 黄劭 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期695-698,共4页
目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法 以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼... 目的 研制抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,并研究该抗体在鸡卵黄中表达过程。方法 以甲醛减毒处理的眼镜王蛇粗毒免疫莱航母鸡 ,母鸡免疫应答后 ,在卵黄中产生抗眼镜王蛇毒抗体 ,应用嗜硫色谱柱HiTrapIgYPurificationHP从鸡卵黄中提取抗眼镜王蛇毒抗体 ;以间接ELISA法及双向免疫扩散测定抗体的效价、特异性及免疫活性 ;采用Lowry氏法测定蛋白含量 ;采用SDS PAGE法测定相对分子质量 (Mr)及鉴定抗体纯度。结果 母鸡初次免疫第 9天即有抗体产生 ,初次免疫 6 0d后抗体效价超过 1∶10 0 0 0 0 ,卵黄抗体经嗜硫色谱柱纯化后 ,经SDS PAGE检测为电泳纯 ,纯化后抗体效价较纯化前提高 4倍 ,每枚蛋中平均可获得较纯抗体 97.5mg。动物体外中和试验表明 ,特异性IgY能有效中和眼镜王蛇毒 ,阻止眼镜王蛇毒对小白鼠的攻击。结论 研制并鉴定了抗眼镜王蛇毒鸡卵黄抗体 ,分析抗体在产蛋期卵黄液中表达的进度 ,为今后该抗体的持续、高质量诱导奠定基础 。 展开更多
关键词 眼镜王蛇毒 鸡卵黄抗体 免疫 表达 特异性 体外中和试验 抗体产生 纯化 动物体 电泳
原文传递
PCR法分子克隆及序列分析广西产眼镜王蛇蛇毒α-神经毒素基因(英文) 被引量:2
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作者 李其斌 渡庆次贺博 +2 位作者 金城记代彦 中村真理子 小杉忠诚 《中华急诊医学杂志》 CAS CSCD 2004年第2期77-80,共4页
目的 为了获得眼镜王蛇 (Ophiophagushannah ,Oh)蛇毒α 神经毒素 (α Neurotoxin ,α NT)的基因序列。方法 我们通过比较了基因库中已知眼镜蛇科不同种类毒蛇来源的α NT基因 ,发现它们有较高的同源性 ,特别是 5 和 3 非翻译区及引... 目的 为了获得眼镜王蛇 (Ophiophagushannah ,Oh)蛇毒α 神经毒素 (α Neurotoxin ,α NT)的基因序列。方法 我们通过比较了基因库中已知眼镜蛇科不同种类毒蛇来源的α NT基因 ,发现它们有较高的同源性 ,特别是 5 和 3 非翻译区及引导肽部分高度保守 ,据此设计了包括翻译起始点的上游引物 ,以及为了得到 3 端较完整非编码部分而设计了基本上属于d (T)的反意链下游RACE PCR引物。为了克服引物所带来的模糊扩增 ,还在蛋白编码部分再设计一对上下游引物 ,由此组成P1、P2、P3和P4四对引物。采用NacleospinRNAKit法分别从 3条活Oh蛇毒腺中提取mRNA ,以 3 端引物合成cDNA的第一链 ,并以此作为模板 ,分别用四对引物进行PCR扩增反应 ,得到了目的基因不同长度的PCR产物 ,产物经精制后进行测序 ,对比分析其结果。结果 获得了全长 4 74bp的Oh .cDNA的基因核苷酸序列 ,包括 5 端 6 0bp ,信号肽伴启动子ATG 6 3bp ,蛋白质密码部分 2 16bp和 3 端 186bp并含有TGA终止码。经基因库信息计算机分析其信号肽与眼镜蛇树属(Pseudonnajatextilis,Pt.)海蛇 (Laticaudasemifasciata ,Ls)10 0 %同源 ,96 8%与眼镜蛇南洋亚种 (Najasputatrix ,Ns)和银环蛇 (Bungarusmulticinctus,Bm)同源 .蛋白密码部分83 3%与Ns ,79 2 展开更多
关键词 PCR法 分子克隆 序列分析 广西 眼镜王蛇 蛇毒 a-神经毒素基因 基因序列
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