Kirsten大鼠肉瘤病毒基因同源物突变非小细胞肺癌内科治疗现状与展望

近年来,靶向药物治疗和免疫检查点抑制剂的临床应用极大地改变了晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的治疗格局。表皮生长因子受体和间变性淋巴瘤受体酪氨酸激酶等驱动基因改变NSCLC的TKI靶向治疗均已取得了良好临床疗效,而Kirsten大鼠肉瘤病毒基因同源物(KRAS)作为较早发现和突变频率较高的癌基因之一,其靶向药物治疗研究进展缓慢,法尼基转移酶抑制剂、KRAS信号通路下游蛋白抑制剂等靶向治疗研究均未取得预期结果,使得KRAS长期以来被定义为"不可成药的靶点"。KRAS蛋白作为分子开关,通过与三磷酸鸟苷结合而被激活,引发系列级联反应,在细胞增殖和有丝分裂中发挥作用。KRAS突变的NSCLC患者对内科系统性治疗反应性差,预后不佳。随着对KRAS晶体结构认识的不断深入,研究者发现了KRAS潜在的治疗位点,进而开发出了多个直接针对KRAS的靶向药物,尤其是KRAS G12C抑制剂,如AMG510(sotorasib)和MRTX849(adagrasib),其临床试验获得了令人鼓舞的结果。文章在系统介绍KRAS突变NSCLC患者临床特征及内科治疗方法的基础上,重点就KRAS靶向治疗的研究进展进行了总结和展望。

非小细胞肺癌MET、KRAS、PIK3CA和BRAF基因突变状态与临床特征的关系分析

目的分析非小细胞肺癌原癌基因(MET)、Kirsten鼠类肉瘤病毒癌基因(KRAS)、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)、鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B1(BRAF)基因突变状态与临床特征的关系。方法选择719例非小细胞肺癌患者,通过二代测序(NGS)检测患者的MET、KRAS、PIK3CA、BRAF,分析基因突变状态与临床特征的关系。结果MET基因突变的临床特征:男性患者13例,女性患者12例;<60岁患者8例,≥60岁患者17例;腺癌11例,非腺癌14例。KRAS基因突变的临床特征:男性患者15例,女性患者11例;<60岁患者8例,≥60岁患者18例;腺癌14例,非腺癌12例。PIK3CA基因突变的临床特征:男性患者12例,女性患者10例;<60岁患者9例,≥60岁患者13例;腺癌15例,非腺癌7例。BRAF基因突变的临床特征:男性患者11例,女性患者12例;<60岁患者13例,≥60岁患者10例;腺癌12例,非腺癌11例。结论非小细胞肺癌MET、KRAS、PIK3CA、BRAF基因突变状态与临床特征存在一定关系。

rigosertib联合化疗对Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物突变型结直肠癌小鼠的疗效和不良反应

目的探讨rigosertib(RGS)与结直肠癌经典化疗药物联合对KRAS突变型结直肠癌的疗效及不良反应。方法通过裸鼠皮下接种构建KRAS突变型结直肠癌模型,采用随机数字表法及随机数余数法随机分为对照组、RGS组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、奥沙利铂(OXA)组、伊立替康(IRI)组、5-FU+RGS组、OXA+RGS组和IRI+RGS组,观察各组小鼠体重和肿瘤体积的变化,采用免疫组化染色、原位末端标记荧光染色、Western blot法检测肿瘤组织增殖抑制及凋亡情况,通过小鼠血常规、血生化及肝脏组织切片HE染色分析化疗联合RGS的不良反应情况。采用细胞计数试剂盒8检测OXA与RGS联用对KRAS突变型结直肠癌细胞DLD1和HCT116的协同作用。结果对照组、RGS组、5-FU组、OXA组、IRI组、5-FU+RGS组、OXA+RGS组和IRI+RGS组小鼠移植瘤均成瘤,肿瘤生长快慢不一,其中OXA+RGS组肿瘤增长较慢。到给药后55 d,OXA+RGS组的肿瘤体积倍数为37.019±8.634,均小于RGS组(77.571±15.387,P=0.029)和OXA组(92.500±13.279,P=0.008),具有协同效应。免疫组化染色显示,对照组、OXA组、RGS组和OXA+RGS组小鼠移植瘤组织Ki-67指数分别为(100.0±16.8)%、(35.6±11.3)%、(54.5±18.1)%和(15.4±3.9)%,OXA+RGS组低于对照组(P=0.014),但与OXA组和RGS组比较差异无统计学意义(均P>0.05)。TUNEL荧光染色结果显示,OXA+RGS组凋亡细胞荧光信号强度为3.878±0.547,高于OXA组(1.515±0.442,P=0.005)和RGS组(1.966±0.261,P=0.008)。Western blot检测结果显示,OXA+RGS组小鼠移植瘤组织中cleaved-PARP、cleaved-caspase 3和cleaved-caspase 8等凋亡相关蛋白表达量均高于对照组、OXA组和RGS组。裸鼠接受RGS、5-FU、OXA、IRI等单药和联合治疗后,未见明显肝肾功能损害,但OXA+RGS组白细胞为(0.385±0.215)×10^(9)/L,血红蛋白为(56.000±24.000)g/L,均低于对照组[分别为(5.598±0.605)×10^(9)/L和(153.333±2.231)g/L,均P<0.01]。结论RGS与5-FU、IRI联用治疗KRAS突变型结直肠癌不能增强疗效,但与OXA联用具有更强的抗肿瘤效应。RGS单药不会对小鼠造成明显的骨髓抑制和肝肾功能损伤,但与OXA联用不良反应可能会相应增加。

左、右半结肠癌PD-L1表达、MSI状态、KRAS突变及临床病理特征的差异

目的:探讨左半结肠癌、右半结肠癌程序性死亡因子配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)表达、微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)、Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,KRAS)基因突变以及临床病理特征的差异。方法:收集2021年1月至12月郑州大学附属肿瘤医院临床病理中心723例结直肠癌患者的临床病理与分子检测资料进行回顾性分析;采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)法检测MSI、KRAS基因突变,免疫组织化学法评估PD-L1蛋白表达。结果:在723例结直肠癌中,左半结肠癌521例,右半结肠癌202例。相较于左半结肠癌,右半结肠癌具有女性多发、浸润深度更深、分化更差的特点(均P<0.05);同时,右半结肠癌MSI发生率显著高于左半结肠癌(P<0.001),且PD-L1的联合阳性分数也显著高于左半结肠癌(P=0.022)。此外,左、右半结肠癌在年龄、淋巴转移、脉管癌栓、神经侵犯和KRAS基因突变等方面差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论:左半结肠癌、右半结肠癌的临床病理特征、MSI状态及PD-L1表达均存在显著差异,提示左、右半结肠癌可能是两种不同的肿瘤。

MEK抑制剂在K-RAS基因突变的结直肠癌细胞中的耐药机制

目的探讨丝裂原激活蛋白激酶的激酶(MEK)抑制剂曲美替尼(Trametinib)在v-Ki-ras2 Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(K-RAS)基因突变的结直肠癌(CRC)细胞中的耐药机制。方法用Trametinib处理K-RAS基因突变型CRC细胞株LS174T、DLD-1、HCT116,Western blot法检测STAT3上游蛋白JAK2、JAK3和Src等是否激活。用Trametinib、JAK2/STAT3抑制剂鲁索替尼(Ruxolitinib)/LY5或者两者联用处理HCT116细胞,Western blot法检测p-STAT3Y705、STAT3、p-ERK1/2表达,磺酰罗丹明B蛋白染色实验观察细胞增殖情况。用Trametinib、LY5或Trametinib+LY5处理HCT116、DLD-1细胞,细胞迁移划痕实验观察细胞迁移情况,MTT实验检测细胞生存率。结果Trametinib能明显抑制ERK1/2的磷酸化,同时也能诱导p-STAT3Y705增加,诱导STAT3上游激酶p-JAK2高表达。Trametinib+Ruxolitinib/LY5联合用药,可同时阻断K-RAS基因突变的CRC细胞p-STAT3Y705、p-ERK1/2的激活,协同抑制肿瘤细胞的生长;可明显抑制肿瘤细胞克隆形成,减弱肿瘤细胞增殖能力;可抑制肿瘤细胞迁移能力,效果明显优于单药组(均P<0.05);可抑制细胞增殖,细胞生存率明显低于单药组(均P<0.05)。结论MEK和STAT3信号通路双重抑制的联合用药方案,是CRC治疗方案的新研究方向。

乌骨藤总苷对肺腺癌NCI-H1299细胞糖酵解、凋亡和自噬作用的影响

目的探讨乌骨藤总苷通过Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)对肺腺癌细胞糖酵解、凋亡和自噬的影响。方法体外培养NCI-H1299细胞,分为对照组、乌骨藤总苷低剂量组、乌骨藤总苷高剂量组、乌骨藤总苷+Vector组和乌骨藤总苷+KRAS组。对照组用正常培养基作用于细胞,乌骨藤低剂量组用终浓度为5 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤高剂量组用终浓度为20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤总苷+Vector组先在细胞内转染入阴性对照载体,再用20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞,乌骨藤总苷+KRAS组转染入KRAS过表达载体后,用20 mg/ml的乌骨藤总苷作用于细胞。用qRT-PCR法检测各组细胞中KRAS mRNA的表达情况,用Western blot法检测各组细胞中KRAS蛋白的表达情况,用MTT法检测细胞增殖抑制率,用试剂盒检测各组细胞葡萄糖消耗量和乳酸含量,用流式细胞术检测细胞凋亡率,用Western blot法检测各组细胞中凋亡和自噬相关蛋白的表达水平。结果乌骨藤总苷低剂量组和乌骨藤总苷高剂量组KRAS表达水平、葡萄糖消耗量、乳酸含量、Bcl-2蛋白水平低于对照组,细胞增殖抑制率和凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ、beclin-1蛋白和Bax蛋白水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷+KRAS组细胞中KRAS水平、葡萄糖消耗量和乳酸含量、Bcl-2蛋白表达水平均高于乌骨藤总苷+Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷+KRAS组细胞增殖抑制、细胞凋亡率、LC3-Ⅱ/Ⅰ、Bax蛋白和beclin-1蛋白水平低于乌骨藤总苷+Vector组,差异有统计学意义(P<0.05)。乌骨藤总苷高剂量组和乌骨藤总苷+Vector的各项指标比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论乌骨藤总苷可以通过抑制KRAS的表达,抑制肺腺癌细胞的糖酵解过程,促进肺腺癌细胞凋亡和自噬,从而对肺腺癌细胞起到抑制作用。

^(18)F-氟代脱氧葡萄糖正电子发射计算机断层显像-CT代谢参数与结直肠癌患者临床特征的关系

目的探讨^(18)F-氟代脱氧葡萄糖(FDG)正电子发射计算机断层显像(PET)-CT代谢参数与结直肠癌患者临床特征的关系及对Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)基因突变的预测价值。方法收集75例结直肠癌患者的临床资料,检测KRAS基因突变情况。分析^(18)F-FDG PET-CT代谢参数与KRAS基因突变型结直肠癌患者临床特征的关系,并分析^(18)F-FDG PET-CT代谢参数对结直肠癌KRAS基因突变的预测价值。结果75例患者中,KRAS基因突变型39例,野生型36例。肿瘤直径﹥4.5 cm KRAS基因突变型结直肠癌患者最大标准摄取值(SUV_(max))、平均标准摄取值(SUV_(mean))、肿瘤代谢体积(MTV)及病灶糖酵解总量(TLG)均高于肿瘤直径≤4.5 cm患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05);T3~4期KRAS基因突变型结直肠癌患者MTV及TLG均高于T1~2期患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。SUV_(max)、SUV_(mean)、MTV及TLG均与肿瘤直径呈正相关,MTV、TLG均与T分期呈正相关(P﹤0.05)。KRAS基因突变型结直肠癌患者SUV_(max)、SUV_(mean)及TLG均明显高于KRAS野生型患者,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。SUV_(max)、SUV_(mean)、MTV及TLG预测结直肠癌KRAS基因突变的曲线下面积(AUC)分别为0.833、0.696、0.681、0.629,以SUV_(max)最高。SUV_(max)、SUV_(mean)、MTV及TLG预测结直肠癌KRAS基因突变的灵敏度分别为0.883、0.753、0.724、0.676,特异度分别为0.817、0.714、0.694、0.659。结论^(18)F-FDG PET-CT代谢参数可一定程度上反映KRAS基因突变型结直肠癌患者的临床特征,可作为预测KRAS基因突变的辅助指标。

Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物基因突变对骨关节肿瘤大鼠蛋白激酶信号通路的影响

目的探讨Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)基因突变对骨关节肿瘤大鼠蛋白激酶信号途径的影响。方法对健康雄性SD大鼠24只(对照组)与实验动物中心提供的KRAS突变雄性SD大鼠24只(突变组),采用骨肉瘤细胞大鼠骨髓腔注射的方法建立骨关节肿瘤大鼠模型;在造模后4周与8周检测蛋白激酶信号途径的重要因子—Toll样受体4(TLR4)、蛋白激酶B(Akt)的mRNA与蛋白在滑膜组织中的表达,及炎症因子(IL-6、TNF-α)的血清水平。结果突变组造模后4周与8周的血清IL-6、TNF-α水平显著高于对照组(P<0.01)。对照组大鼠膝关节内皮细胞层完整,以平滑肌细胞和弹力纤维为主,内弹力板连续规整,无增殖及脂质沉积;突变组大鼠膝关节表现为内膜增厚、部分管腔闭塞,有大量空泡细胞、脂质沉积。突变组造模后4周、8周的滑膜组织TLR4、Akt mRNA与蛋白相对表达水平显著高于对照组(P<0.05,P<0.01)。结论KRAS突变可能通过激活骨关节肿瘤大鼠蛋白激酶信号途径的重要因子TLR4与Akt在转录与翻译水平的表达,从而促进炎症因子的释放,恶化骨关节肿瘤的病情。

免疫检查点抑制剂治疗驱动基因阳性晚期非小细胞肺癌的研究进展

免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)已成为晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的重要治疗方法,但其在驱动基因阳性患者中的疗效仍存在争议。现有研究显示:ICIs的疗效可能与不同的驱动基因类型、程序性死亡蛋白-配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)表达水平、肿瘤突变负荷(tumor mutational burden,TMB)等相关,同时可能需要参考其他因素,如临床特征、免疫细胞密度等。ICIs单药或联合治疗可能会在一部分驱动基因阳性NSCLC患者中发挥作用,但仍需要进一步研究来筛选出这些患者,这或许是晚期NSCLC治疗未来发展的一个重要方向。

HMGA1及KRAS与妇科肿瘤的相关性

随着社会经济水平的提高及人们对健康需求的重视,女性的身体健康逐渐受到社会的广泛关注。然而,妇科肿瘤的发病率及致死率仍居高不下,关于妇科肿瘤的发病机制及治疗仍存在较大争议。相关研究表明,高迁移率族蛋白A1(HMGA1)及Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(KRAS)作为癌基因,能通过参与多种途径在肿瘤的发生、发展中发挥重要的作用。HMGA1及KRAS也被证实在癌症的诊断、治疗及预后中可作为潜在的分子标志物,亦可作为治疗靶点,提高药物疗效。本文首先对两种基因的研究过程进行系统回顾,然后阐述其在部分常见妇科肿瘤疾病发展过程中所发挥的作用,最后探讨其对妇科肿瘤的治疗及预后的影响,希望可以为HMGA1及KRAS的研究提供相关依据。

结直肠癌分子靶向治疗的研究进展

结直肠癌是一种常见的恶性肿瘤,病死率居全球恶性肿瘤第二位。结直肠癌的治疗主要是手术切除和术后综合治疗,包括放疗、化疗、靶向治疗和免疫治疗。近年来,基于分子标志物的靶向药物明显延长了结直肠癌患者的生存期,开展常规分子检测有利于筛选出适合接受靶向治疗的患者,以提高其生存率。结直肠癌常规分子标志物包括Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因(KRAS)、鼠类肉瘤病毒癌基因同源物B(BRAF)、人表皮生长因子受体2(HER2)和神经营养性酪氨酸激酶受体(NTRK)、错配修复(MMR)、磷脂酰肌醇-4-磷酸3-激酶催化亚单位3α(PIK3C3A)、肿瘤突变负荷(TMB)等。这些分子标志物不仅是结直肠癌筛查的补充,同时对个体治疗方案制订、疗效预测及预后评估有重要作用。本文对近年来KRAS、BRAF、HER2和NTRK等在结直肠癌靶向治疗中的研究进展进行综述。

人类K-ras基因突变质控品的建立

目的:建立人类K-ras基因突变质控品,用于K-ras基因突变检测试剂盒的注册检测工作。方法:根据人类K-ras基因序列设计引物,通过定点突变技术引入突变位点,将获得的PCR产物与克隆载体连接,转化感受态细菌后筛选阳性克隆,获得了包含不同突变位点的重组质粒,建立了人类K-ras基因突变质控品。结果:对人类K-ras基因突变质控品进行序列测定,并将测序结果进行BLAST比对,结果表明成功建立了人类K-ras基因突变质控品。结论:建立的K-ras基因突变体质控品包括常见的Kras基因12密码子突变类型,可以用于指导Kras基因突变检测试剂盒的注册检验工作。

散发性脑动静脉畸形KRAS突变及其与临床特征的关系

目的探究散发性脑动静脉畸形组织中Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物(Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,KRAS)突变与临床特征之间的关系。方法回顾性收集散发性动静脉畸形(brain arteriovenous malformation,BAVM)术后病变组织的福尔马林固定石蜡包埋(formali n-fixation and paraffin-embedding,FFPE)样本和对应患者的临床信息,从FFPE样本中提取DNA,通过PCR扩增KRAS的指定区域(以chr12:25398284为靶点)并进行超深扩增子测序。根据是否存在KRAS突变分为突变组和无突变组,比较2组的临床特征差异。结果本研究共纳入145例BAVM患者的FFPE样本。其中63例(43.4%)存在KRAS体细胞突变。其中41例(28.3%)中检测到c.35G→A(G12D)突变,14例(9.7%)中检测到c.35G→T(G12V)突变。此外,还发现了几种罕见报道的KRAS突变,包括c.34G→T(G12C)突变8例(5.5%)、c.34G→A(G12S)突变7例(4.8%)、c.35G→C(G12A)突变2例(1.4%)、c.34G→C(G12R)突变1例(0.7%)。KRAS基因突变组与无突变组的临床特征差异无统计学意义。结论本研究发现43.4%的BAVM患者存在KRAS基因突变,其中G12D是最常见的KRAS突变类型。此外,还发现了一些罕见报道的突变类型,包括G12C和G12A等。未发现KRAS突变与临床特征之间的关系。

胃癌临床病理特征与KRAS基因突变的相关性研究

目的探讨胃癌临床病理特征与Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物KRAS基因突变相关性。方法选取2016年1月至2019年12月间陕西省核工业二一五医院收治的105例胃癌患者作为胃癌组,同期选取105例健康体检者作为对照组,抽取两组受试者的血液学样本,检测KRAS基因突变情况,调查患者的临床病理特征并进行相关性分析。结果胃癌组的癌胚抗原(CEA)、糖类抗原(CA199)和CA125值均高于对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。胃癌组的KRAS基因突变率为41.0%,高于对照组的1.9%,差异有统计学意义(P<0.05)。在胃癌组中,G12D突变24例,G12V突变16例,G13D突变3例;对照组突变2例为G12D突变。在胃癌组中,直线相关分析显示KRAS基因突变与组织学分化、神经脉管侵犯、临床分期、淋巴结转移、CEA、CA199和CA125都存在相关性,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌患者的KRAS基因突变比较常见,多为第12外显子上的突变,与患者的临床病理特征和常见肿瘤标志物都存在相关性。