产ESBLs肺炎克雷伯菌中整合子和耐消毒剂基因的研究

目的:研究产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌整合子携带耐药基因状况及其对常用消毒剂的耐药性。方法:采用PCR方法检测77株产ESBLs和71株非产ESBLs肺炎克雷伯菌Ⅰ整合酶基因,分析Ⅰ类整合子与耐药性关系,并用耐消毒剂试验对耐消毒剂基因予以证实。结果:产ESBLs和非产ESBLs菌株中Ⅰ类整合酶扩增阳性率分别为66.2%(51/77株)和10.0%(2/20株),两者差异有统计学意义(P<0.05)。整合子阳性株对磺胺类、氨基糖苷类和环丙沙星的耐药率较高,与整合子阴性相比差异具有统计学意义(均P<0.01);耐消毒剂基因阳性株对常用消毒剂耐药能力高于阴性株。结论:Ⅰ类整合子在产ESBLs肺炎克雷伯菌中的分布明显高于非产酶株,并参与产ESBLs株多重耐药性的形成,携带耐消毒剂基因的菌株具有抗常用消毒剂的能力。

1株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因存在状况和遗传学背景。方法聚合酶链反应(RCR)法对多重耐药的肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、质粒AmpC酶基因、qacEΔ1-sull耐消毒剂和磺胺基因、整合子遗传标记(整合酶基因)、Tn21/Tn501转座子遗传标记(汞离子还原酶基因)检测。结果TEM、SHV型β-内酰胺酶基因, DHA型质粒AmpC酶基因,aac(6′)-1型氮基糖苷类修饰酶基因,qacEΔ1-sul1耐消毒剂和磺胺基因,整合子遗传标记(intI1整合酶基因),Tn21/Tn501转座子遗传标记(merA汞离子还原酶基因)检测阳性。结论多重耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因和Ⅰ类整合子、Tn21/Tn501转座子。

株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因和整合子、转座子遗传标记研究

目的了解多重耐药肺炎克雷伯菌的耐药基因存在状况和遗传学背景。方法聚合酶链反应法对多重耐药的肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、质粒AmpC酶基因、qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因、整合子遗传标记（整合酶基因）、Tn21／Tn501转座子遗传标记（汞离子还原酶基因）检测。结果TEM、SHV型β-内酰胺酶基因，DHA型质粒AmpC酶基因，aac（6’）-I型氨基糖苷类修饰酶基因，qacE△1-sull耐消毒剂和磺胺基因，整合子遗传标记（intIl整合酶基因），Tn21／Tn501转座子遗传标记（merA汞离子还原酶基因）检测阳性。结论多重耐药肺炎克雷伯菌存在多种耐药基因和I类整合子、Tn21／Tn501转座子。

多重耐药肺炎克雷伯菌的整合子-基因盒分布研究

目的研究芜湖地区肺炎克雷伯菌携带的整合子-基因盒分布情况,分析耐药基因盒与耐药表型两者的相关关系。方法收集2018年6月至2019年8月皖南医学院弋矶山医院105株肺炎克雷伯菌的分离株。通过PCR扩增技术,对整合酶基因进行扩增,对含有整合子的肺炎克雷伯菌的可变区进行PCR扩增,检测碱基序列,并对序列进行耐药基因盒比对及分析。结果对105株肺炎克雷伯菌整合子进行检测,发现含Ⅰ类整合子的菌株有61株(58.1%),未发现含有Ⅱ、Ⅲ类整合子菌株。对含有Ⅰ类整合子菌株的可变区进行PCR扩增,扩增产物进行凝胶成像系统检测,有39株可见亮条带,其中非多重耐药肺炎克雷伯菌有3株,仅产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌有18株,既产超广谱β-内酰胺酶又产碳青霉烯酶的肺炎克雷伯菌有18株。将显示出亮条带的39株肺炎克雷伯菌菌株的5′-3′可变区的PCR产物进行测序,其中27株可比对出耐药基因,总共有5种耐药基因,分别为磺胺类dfrA1、dfrA12和氨基糖苷类aacA4、aadAl、aadA2,且这27株的药敏试验显示均对磺胺类、氨基糖苷类的抗菌药物耐药。结论研究发现芜湖地区肺炎克雷伯菌以Ⅰ类整合子为主,尚未发现Ⅱ、Ⅲ类整合子。多重耐药菌较非多重耐药菌整合子的检出率高,芜湖地区肺炎克雷伯菌菌株对氨基糖苷类及磺胺类药物的耐药率较高,应尽量避免使用。

耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的整合子分布及MLST分析

目的 收集该院临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP),通过研究CRKPⅠ、Ⅱ、Ⅲ类整合子分布情况,碳青霉烯类耐药基因携带情况,以及多位点序列分型(MLST),了解CRKP的耐药情况与流行病学特征。方法 收集、保存临床送检标本中分离的CRKP 45株,采用BD phoenix M50全自动细菌鉴定仪进行药敏试验,并用质谱仪再次进行细菌鉴定。整合子及可变区测定采用PCR扩增,并对阳性菌株可变区进行测序分析及比对;采用改良碳青霉烯灭活试验(mCIM试验)进行表型确认,采用PCR扩增碳青霉烯类耐药基因,以及MLST方法分析其同源性。结果 45株CRKP中检测出Ⅰ类整合子阳性菌株共44株,未检出Ⅱ类及Ⅲ类整合子。有36株菌株成功扩增出可变区。检出3种耐药基因盒,分别为aadA2(34/36)、dfrA1(1/36)、aac(6′)-Ib-cr(1/36)。45株CRKP扩增耐药基因测序结果显示,44株检测到bla基因,未检出bla、bla、bla、bla、bla基因。45株CRKP的优势序列分型(ST)主要为ST11型(43株),其余为ST15型(2株)。结论 该院CRKP以Ⅰ类整合子为主,尚未发现Ⅱ类及Ⅲ类整合子,CRKP对碳青霉烯类药物耐药的主要机制是携带bla基因,应及时采取防控措施,防止CRKP在院内的克隆传播。

肺炎克雷伯菌连续分离株耐药性及Ⅰ类整合子遗传标记研究

目的了解肺炎克雷伯菌(KPN)连续分离株整合酶基因存在情况和耐药性。方法应用双基因聚合酶链反应法对44株KPN连续分离株进行检测。结果44株KPN菌连续分离株中qacE△1-sul1基因阳性12株(27.3%)。结论在肠杆菌科细菌耐药机制中,Ⅰ类整合子起着非常重要的作用,它的3'-保守端有季胺类化合物(消毒剂)的耐药基因(qacE△1)和磺胺耐药基因(sul1)重叠基因,为Ⅰ类整合子遗传标记,整合子使细菌能够很快获得新的耐药基因以适应环境要求。

肺炎克雷伯菌抗药基因检测与消毒剂抗性相关性分析

目的研究医院临床分离及环境检出的肺炎克雷伯菌对消毒剂抗性水平和抗药基因携带的关系。方法采用最低抑菌浓度(MIC)、最小杀菌浓度(MBC)、聚合酶链反应(PCR)等试验方法,分析临床分离及环境中检出的肺炎克雷伯菌qacE△1-sulⅠ基因携带和对消毒剂的抗性。结果 10株肺炎克雷伯菌中有2株临床分离的多药耐药菌qacE△1-sulⅠ基因为阳性,8株环境检出菌株均为阴性;三氯异氰尿酸对10株肺炎克雷伯菌的MIC、MBC值均为500～1000mg/L,标准菌株为500mg/L;聚乙烯吡咯烷酮碘对10株肺炎克雷伯菌的MIC值为200～800mg/L,标准菌株为400mg/L;戊二醛对10株肺炎克雷伯菌的MIC值为1250～2500mg/L,标准菌株为1250mg/L。结论临床分离的肺炎克雷伯菌qacE△-sulⅠ基因携带率高于环境检出菌株,部分抗药基因阳性菌株对消毒剂产生抗性。

广东地区医院分离肺炎克雷伯菌整合子及其携带耐药基因的研究

目的研究广东地区医院分离肺炎克雷伯菌整合子和耐药基因携带现状及其与耐药性关系。方法采用基因扩增法和药敏试验方法,对广东省5所医院临床分离的肺炎克雷伯菌三类整合子及耐药基因进行了检测,同时对其耐药性进行了分析。结果共对30株临床分离肺炎克雷伯菌携带耐药基因进行了检测,检出11株携带I类整合子、17株携带II类整合子,未检出携带III类整合子。随机选取携带I类和II类整合子该菌各1株进行测序及分析,确认为cmlA和aadA4耐药基因盒的组合形式。肺炎克雷伯菌对对氨苄西林等8种常用抗菌药物的耐药率超过50%。结论广东地区医院分离肺炎克雷伯菌II类整合子的检出率最高,此类菌株普遍耐药。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌脓毒症患者分离株CRKPⅠ类整合子和插入序列共同区分布

目的分析碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)脓毒症患者分离株Ⅰ类整合子、插入序列共同区(ISCR)分布情况。方法选择2020年1月-2021年1月河南省中医院重症监护病房(ICU)收治的脓毒症患者60例,分离非重复CRKP菌株51株,采用全自动微生物鉴定仪行菌株鉴定和药敏试验,聚合酶链式反应(PCR)检测耐药基因及CRKPⅠ类整合子、ISCR分布情况。结果51株CRKP菌株对碳青霉烯类完全耐药,对β-内酰胺类耐药率>85%,对替加环素和多黏菌素B具有较高敏感性,耐药率分别为9.80%和7.84%;KPC-2基因阳性菌株51株,阳性率为100.00%,SHV基因阳性菌株49株(96.08%),CTX-M9基因阳性菌株36株(70.59%),NDM-1基因阳性菌株6株(11.76%),CTX-M1基因阳性菌株2株(3.92%),未检出VIM、IMP、OXA48及GES阳性菌株;检出Ⅰ类整合子阳性42株(82.35%),其中可变区阳性38株(74.51%),携带耐药基因aadA2和aadA5,检出ISCR阳性5株(9.80%),其中可变区1株,携带耐药基因sul1,检出同时携带Ⅰ类整合子和ISCR菌株3株。结论脓毒症患者分离的51株CRKP菌株均携带KPC-2基因,同时携带其他耐药基因,CRKP菌株中Ⅰ类整合子分布广泛,ISCR分布较少,二者以串联形式存在并可能造成耐药基因在不同CRKP克隆株之间水平传播,从而导致CRKP菌株耐药的复杂性以及多样性。

老年病区肺炎克雷伯菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因携带情况的研究

目的了解老年病区肺炎克雷伯菌分离株消毒剂-磺胺耐药基因存在情况和耐药性。方法应用聚合酶链反应法和纸片法对肺炎克雷伯菌消毒剂-磺胺耐药基因和药敏进行了检测。结果该医院老年病区病人标本中分离的80株肺炎克雷伯菌检测出携带消毒剂-磺胺耐药基因63株,检出率为78.8%。分离的80株肺炎克雷伯菌对头孢类、替卡西林和环丙沙星类抗生素耐药率为100%;只对亚胺培南和美罗培南敏感率100%。结论该医院老年病区分离的肺炎克雷伯菌临床株消毒剂-磺胺耐药基因检出率较高,多数对临床常用抗生素耐药,提示临床耐药菌株可能同时对消毒剂存在抗性。

ICU多耐药肺炎克雷伯菌整合子及耐药基因研究

目的研究ICU多耐药肺炎克雷伯菌的整合子及其耐药基因情况。方法收集宁波市医疗中心李惠利医院2019年ICU来源多耐药肺炎克雷伯菌30株,统计分析药敏结果;多重PCR检测Ⅰ类、Ⅱ类、Ⅲ类整合酶基因及整合子可变区,进一步对整合子阳性菌株的可变区进行测序分析。结果30株多耐药肺炎克雷伯菌对多种抗菌药物(头孢类头孢唑林、头孢曲松,氨基糖苷类阿米卡星、庆大霉素,磺胺类甲氧苄氨嘧啶)的耐药率均超过70%;均检出Ⅰ类整合酶基因,未检出Ⅱ类、Ⅲ类整合酶基因;23株菌基因盒PCR扩增阳性,扩增片段大小为1904 bp~1929 bp,均为dfrA12-orf-aadA2基因盒。结论本地区ICU多耐药肺炎克雷伯菌很可能普遍含有Ⅰ类整合子及基因盒dfrA12-orf-aadA2,需加强耐药监测合理使用抗菌药物。

老年病房肺炎克雷伯菌消毒剂-磺胺耐药基因的检测

目的:了解肺炎克雷伯菌老年人分离株对消毒剂-磺胺耐药基因存在情况及耐药性。方法:应用聚合酶链反应(PCR)法对肺炎克雷伯菌耐药株进行消毒剂和磺胺耐药基因检测与分析。结果:40株肺炎克雷伯菌检测到消毒剂-磺胺耐药基因31株,检出率为77.5%。结论:肺炎克雷伯菌老年人分离株消毒剂-磺胺耐药基因检出率高,提示临床抗药菌株可能同时对消毒剂存在抗菌性。

肺炎克雷伯菌整合子携带情况及与毒力基因和耐药性的关系

目的分析安徽医科大学第一附属医院临床分离肺炎克雷伯菌的耐药性,毒力基因、整合子携带情况,并重点比较分析整合子阳性和阴性菌株之间耐药性和毒力基因的差异性,探讨整合子在菌株耐药性以及整合毒力基因中的作用。方法收集临床分离保存的肺炎克雷伯菌72株,运用纸片扩散法和Vitek-2 compact仪器进行药物敏感性试验,聚合酶链式反应(PCR)技术扩增整合子基因(IntI1、IntI2、IntI3)、毒力基因(rmpA、aerobactin、alls、kfu、wcaG、magA、fimH、mrkD)。同时分析整合子阳性肺炎克雷伯菌和整合子阴性肺炎克雷伯菌之间毒力基因和耐药性的差异性。结果药敏试验结果表明72株肺炎克雷伯菌除对米诺还素、多黏菌素B、替加环素具有较高的敏感性外,对头孢菌素类、碳青霉烯类、喹诺酮类、氨基糖苷类抗菌药物耐药率均>30%,PCR技术检出整合子IntI1型共40株,未检出IntI2、IntI3型。毒力基因aerobactin、rmpA、wcaG、alls、kfu、fimH、mrkD、magA检出率分别为25.00%、44.44%、23.61%、19.44%、40.28%、98.61%、98.61%、12.50%。整合子阳性菌株和阴性菌株相比,对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物具有较高的耐药性,且差异有统计学意义(P<0.05)。但是整合子阳性菌株和整合子阴性菌株毒力基因携带情况相比,除aerobactin及kfu基因具有统计学差异外,其他六种毒力基因在两者之间无统计学意义。结论医院肺炎克雷伯菌以携带整合子IntI1型为主,整合子阳性菌株对头孢菌素类,氨基糖苷类、喹诺酮类抗菌药物耐药性更高,但对毒力基因的携带情况无差异。

多药耐药肺炎克雷伯菌尿液分离株检出gyrA基因新亚型

目的了解1株多药耐药肺炎克雷伯菌的遗传学背景。方法采用聚合酶链反应(PCR)的方法分析1株多药耐药肺炎克雷伯菌可能存在的65种耐药相关基因:包括β-内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类耐药相关基因及可移动的遗传元件(整合子、转座子、接合性质粒)遗传标记、抗菌制剂外排泵基因。结果该株多药耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物基因检出blaTEM,耐氨基糖苷类药物基因检出aph(3′)-Ⅰ,耐喹诺酮类药物基因检出gyrA,Ⅰ类整合子遗传标记检出intⅠ1,转座子遗传标记检出tnp513,接合性质粒遗传标记检出trbC;抗菌制剂外排泵基因检出qacE△1-sul1,gyrA基因是新亚型(GenBank登录号:JN232083),83位密码子突变方式为TCG→TTC,导致氨基酸从丝氨酸(S)→苯丙氨酸(F);87位密码子突变方式为GAC→GCC,导致氨基酸从天冬氨酸(D)→丙氨酸(A)。结论携带多药耐药基因和抗菌制剂外排泵基因是这株肺炎克雷伯菌呈多药耐药的主要原因,携带多种可移动遗传元件使细菌的耐药性在同种细菌菌株之间,甚至不同种细菌菌株之间得以快速传播。

胆汁来源ESBLs-KP分离株整合子携带与毒力基因和耐药机制关系

目的 研究医院胆汁来源产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌(ESBLs-KP)整合子携带情况与其毒力基因和耐药机制的相关性,为医院院感防控及临床治疗提供参考依据。方法 收集2019年1月-2022年6月宁波市医疗中心李惠利医院肝胆外科胆汁培养阳性肺炎克雷伯菌,筛选出ESBLs-KP;聚合酶链式反应(PCR)检测其整合子、毒力基因和耐药基因。结果 254例中ESBLs-KP 78株,占比30.71%;仅携带整合子IntI1;以K57荚膜基因为主;整合子阳性组与整合子阴性组,除脂多糖相关基因wabG和耐药基因blaCTX-M-3、blaCTX-M-9、blaCTX-M-14存在统计学差异外,其余均无差异;抗菌药物除厄他培南和阿米卡星外,前者耐药率均高于后者;且发现3株整合子阳性高毒力侵袭性ESBLs-hvKP以及20株pLVPK-like毒力质粒阳性肺炎克雷伯菌。结论 医院胆汁来源ESBLs-KP主要携带整合子IntI1;且整合子阳性抗菌药物耐药率均高于整合子阴性;医院整合子、毒力质粒、耐药基因三者的共同传播较为严重,提示医院亟需加强耐药监测及院感防控。