阿奇霉素联合左氧氟沙星对不同ST型肺炎克雷伯菌生物膜的抑制和清除作用的研究

目的:研究不同ST型肺炎克雷伯菌生物膜的形成能力及阿奇霉素联合左氧氟沙星对不同ST型菌株生物被膜的抑制和清除作用,旨为预防治疗产生物被膜肺炎克雷伯菌感染提供新思路。方法:随机收集皖南医学院第一附属医院2019年8月至2021年11月从住院患者标本分离的全敏感组肺炎克雷伯菌9株、产超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum β-Lactamases,ESBLs)肺炎克雷伯菌19株、耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)37株,细菌均采用VITEK MS IVD KB V3.2质谱仪鉴定并使用VITEK 2-compact 60全自动微生物鉴定及药敏系统对细菌进行药敏试验。对各菌株进行多位点序列分型(multilocus sequence typing,MLST)分析其同源性;结晶紫染色法进行生物被膜半定量检测,比较不同ST型肺炎克雷伯菌之间生物膜形成能力的差异;选取不同ST型菌株,采用微量肉汤稀释法计算部分抑菌浓度指数(FICI)判断联合效果并选择最佳联合浓度;结晶紫染色法探究阿奇霉素联合左氧氟沙星对不同ST型肺炎克雷伯菌生物膜的抑制及清除效果;激光扫描共聚焦荧光显微镜观察抗菌药物作用前后肺炎克雷伯菌生物膜的结构变化。结果:MLST分型结果显示敏感组肺炎克雷伯菌株有ST86、ST727等8个序列,ESBLs组菌株属于ST15、ST37、ST11等14个序列型,其中ST15占26.32%(5/19);CRKP组菌株属于ST11、ST15、ST656等9个序列型,其中ST11占48.65%(18/37),ST15占27.03%(10/37);ST15(ESBLs)型、ST11(CRKP)型、ST15(CRKP)型肺炎克雷伯菌生物膜均在第5天达到成熟,ST15(ESBLs)组较ST15(CRKP)组产生物被膜能力强,ST11(CRKP)组较ST15(CRKP)组形成生物膜能力强(P<0.01)。阿奇霉素联合左氧氟沙星药敏结果显示对不同ST型肺炎克雷伯菌均具有相加作用;在生物膜形成的抑制及清除试验中,2×MIC阿奇霉素组及联合浓度组均对不同ST型肺炎克雷伯菌生物膜形成具有较强的抑制作用,且联合组的抑制能力优于单药组,抑制率最高可达到89.93%;清除效果均为联合药物组>阿奇霉素>左氧氟沙星,清除率最高为44.79%。结论:不同ST型肺炎克雷伯菌之间生物膜形成能力存在差异,阿奇霉素联合左氧氟沙星对不同ST型肺炎克雷伯菌生物膜具有较好的抑制作用,可在早期联合用药进行抗生物膜菌感染的治疗。

某院肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌在ICU及非ICU中的耐药性研究

目的 分析肺炎克雷伯菌及铜绿假单胞菌在ICU及非ICU中的耐药性的差异性,旨在为不同场景下合理选择抗菌药物提供参考。方法 2020年1月~2022年6月在临床送检的25 196件感染性标本中,培养出3 963株肺炎克雷伯菌及4 084株铜绿假单胞菌,均采用Microflex MALDI TOF质谱仪对病原菌进行鉴定,采用BD Phoenix 100 NMIC/ID4药敏板条对病原菌进行药敏鉴定,同时采用K-B纸片扩散法对病原菌进行抗生素敏感性补充测定。结果 肺炎克雷伯菌与铜绿假单胞菌在ICU及非ICU内的耐药率均各不相同,ICU内分离出的肺炎克雷伯菌对氨苄青霉素的耐药率均为100%,对头孢唑林、头孢呋肟、头孢噻肟、环丙沙星的耐药率50%左右,与在非ICU内对上述抗菌药物的耐药率一致;亚胺培南、美洛培南、庆大霉素、氯霉素、丁胺卡那霉素在ICU的耐药率还低于非ICU内的耐药率。ICU内分离出的铜绿假胞单菌对氨苄青霉素、氨苄青霉素/舒巴坦、复方新诺明、氯霉素、头孢唑啉、头孢噻肟、四环素的耐药率均为100%,与在非ICU内对上述抗菌药物的耐药率一致;亚胺培南、左旋氧氟沙星、美洛培南、环丙沙星、头孢他啶、头孢吡肟、头孢哌酮/舒巴坦的耐药率均超过50%,高于其在非ICU内对上述抗菌药物的耐药率,差异具有统计学意义(P <0.05)。结论 在临床工作中通过将病原菌积极送检,结合药敏结果选择合适的抗菌药物,同时需要加强对临床感染菌的药敏变化监测,并结合其发展趋势有针对性的选择具有较高敏感性的药物,以此控制以及减缓细菌耐药性的生长,帮助获得更好的治疗效果。

肺炎克雷伯菌的分布及耐药性变化分析

目的:对2019年-2021年临床科室送检样本中培养出的肺炎克雷伯菌(KP)进行统计和分析,以了解本院患者肺炎克雷伯菌引发感染的科室分布和耐药性,以求为临床用药提供一定的合理性指导。方法:收集相应年度临床送检的样本,并以对应样本中检出的肺炎克雷伯菌为资料进行统计、回顾性分析,研究其三年来在本院所引起临床感染的科室分布以及耐药性的特征。结果:临床样本中KP检出率呈逐年增高态势,以ICU、康复、骨科/脑外等科室增多为著,样本主要为痰、脓、尿等;KPCRE、KP-CRE/ESBL等耐药菌检出株数也逐年增多,临床常用药物的耐药率有逐年上升的趋势,其中亚胺培南等碳青霉烯类、头孢呋辛、头孢哌酮舒巴坦、哌拉西林舒巴坦等耐药率均显著增高;近三年,痰样本分离出肺炎克雷伯菌株数呈逐年增多趋势,存在显著性差异,P<0.01。结论:针对本院患者检出的KP及其耐药菌株在ICU等重点科室分布较多,又以呼吸道等感染性样本为主,且其耐药率呈逐年增长的趋势,故其已成为本院院内感染的主要危险菌株之一。

耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌基因检测及其同源性分析

目的探讨临床分离的肺炎克雷伯菌对碳青霉烯耐药机制,并进行同源性分析研究。方法用软件WHONET 5.6对连云港第一人民医院临床分离标本筛选出29株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药率统计分析;采用表型筛选试验对试验菌进行产A、B类碳青霉烯酶筛选;PCR法扩增确认相应的碳青霉烯酶酶型基因,目的产物经基因测序和BLAST网上比对确定其基因型;采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析29株试验菌的同源性。选取其中6株菌作多位点序列分型(MLST)。结果 29株耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌对常用抗菌药物均表现出高耐药性;碳青霉烯酶表型筛选试验全部呈阳性,28株测出相应的A、B类碳青霉烯酶型,另一株未测出酶型;28株筛选试验测出A、B类酶型的菌株中26株产A类碳青霉烯酶,经PCR确定酶基因型均为KPC-2型,2株产B类金属酶,经PCR确定一株基因型为NDM-1,一株基因型为VIM-2,未测出酶型的一株菌未扩增出A、B类相关基因;29株试验菌PFGE分型结果分为3群,26株产KPC-2型碳青霉烯酶的菌株为同一群,其中17株属于同一型。选取的6株做MLST分型的菌株,MLST分型结果均属于ST11型。结论连云港第一人民医院分离的耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌主要机制为产碳青霉烯酶,以产KPC-2型碳青霉烯酶为主,同时有VIM-2和NDM-1型碳青霉烯酶的检出。PFGE和MLST分析结果表明:该院存在着耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌的克隆传播,临床上应严格做好耐药菌的防控工作,避免耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌医院感染暴发流行。

猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定

为确定四川某猪场导致猪细菌性感染死亡的病原,本研究从送检病死猪肺脏样品中分离得到一株细菌,对该菌株进行培养特性观察、生化试验、动物致病性试验、药敏试验、16S r RNA基因的扩增及测序鉴定。结果显示其16S r RNA基因序列与肺炎克雷伯菌(Kpn)序列同源性达99%,表明该菌株为Kpn肺炎亚种;致病性试验结果显示其对小鼠具有强致病性;并且在血平板上出现α溶血现象;药敏试验结果显示分离菌株表现出多重耐药性,毒力较强,并且在培养特性上发生一定的改变。本实验为进一步研究Kpn耐药机制和致病机理奠定了基础。

2015—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药变迁及流行调查

目的了解河北医科大学第二医院2015—2017年耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)变迁及流行特征,并进行流行病学分析。方法采用Vitek 2-Compact进行细菌鉴定和药物敏感试验测定,使用Whonet 5.6软件及SPSS 5.0进行数据统计分析,PCR扩增碳青霉烯酶基因blaKPC-2和blaNDM-1;对有流行病学意义的菌株进行多位点序列分型(MLST),目的产物经基因测序和BLAST网上比对确定其基因型。结果 2015—2017年共检出肺炎克雷伯菌非重复菌株4076株。其中,CRKP 831株,占比为20.4%,CRKP主要来源为痰、尿、血,以腹腔引流液耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌检出率最高,为22.4%~55.5%;3年间其对亚胺培南耐药率分别为19.3%、24.2%和22.4%,美罗培南耐药率为18.5%、23.1%和21.2%。CRKP对所测试全部抗菌药物耐药率均显著高于碳青霉烯类敏感肺炎克雷伯菌(CSKP)。氨基糖苷类、复方磺胺甲噁唑、头孢替坦对CRKP相对敏感,其他抗菌药物耐药率均高于90%,CS-KP对所测试全部抗菌药物耐药率均低于40%;2016年神经外科耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌检出率由2015年3%上升至8%,集中在重症监护室(ICU),耐碳青霉烯酶基因型均为blaKPC-2型,选取神经外科ICU 10d内分离的5株CRKP进行MLST分型,均属于STll型。结论 3年间我院肺炎克雷伯菌耐药情况的变化及2016年在神经外科ICU病房出现的克隆传播,提示我们需采取有效的医院感染防控措施,进一步规范控制抗菌药物使用。

阿奇霉素联合亚胺培南对肺炎克雷伯菌生物膜的抑制作用

目的研究阿奇霉素(azithromycin,AZM)联合亚胺培南(imipenem,IPM)对肺炎克雷伯菌生物膜(biofi lm,BF)的抑制作用。方法采用改良平板法建立肺炎克雷伯菌BF模型,微量稀释法测定抗菌药物的最低抑菌浓度,银染法快速鉴定细菌BF,噻唑蓝(MTT)比色法测定BF中的活菌数,棋盘设计法测定阿奇霉素和亚胺培南对BF的协同抑制作用,用RT-PCR对联合用药前后luxS基因的表达进行相对定量分析,检测结果采用SPSS13.0软件进行统计处理。结果加入1/16、1/4MIC阿奇霉素可显著增加1/4、1/2及1MIC亚胺培南对肺炎克雷伯菌BF的抑菌活性;加入1/4、1/2及1MIC的亚胺培南也可显著增加1/16、1/4MIC阿奇霉素的抑菌活性;1MIC IPM与1/4、1/16MIC AZM联合应用;1/2MIC IPM与1/4MIC AZM联合应用可以下调lux S基因的表达。结论阿奇霉素与亚胺培南联合使用可下调肺炎克雷伯菌lux S基因的表达,从而增强其对BF的抑菌活性。

不同动物种源肺炎克雷伯氏菌分离株23S rRNA序列分析

为分析动物种源肺炎克雷伯氏菌分离株（K．p妇）的进化特点，本研究通过PCR扩增不同动物种源K．pn的23SrRNA基因片段，克隆测序，进行BLAST比对；构建K-pm菌株的系统进化树。结果显示，本实验室保存的12株K．p力核苷酸序列与GenBank收录的X87284株K-pm核苷酸序列同源性为96．8％～99．0％，而与沙门氏菌和奇异变形杆菌同源性只有90．0％～92．7％；8株毛皮动物K．加核苷酸序列同源性为98．1％～99．9％，与猪源、鸡源K．p力的核苷酸序列同源性分别为95．5％～98．1％、96．7％～97．9％；猪源与鸡源K．pn的核苷酸序列同源性为95．9％～97．4％。结果表明，不同动物种源K-pn23SrRNA基因序列同源性差异明显，具有种属的特异性，23SrRNA基因序列可以作为鉴定K-pm的一种快速、简便的方法。

肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制研究

目的探讨临床标本中分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKP)的耐药机制。方法收集2010年1月—2013年12月临床标本中分离的CRKP。采用Vitek-2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定并联合纸片扩散法(K-B法)进行药物敏感性试验,Microflex^(TM)MALDI-TOF MS进行菌种复核。改良Hodge试验筛查碳青霉烯酶表型;PCR方法检测bla_(KPC)、bla_(GES)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(NDM-1)和bla_(OXA-48)等碳青霉烯酶基因及AmpC酶基因,并对阳性扩增产物进行基因测序;SDS-PAGE检测菌株外膜蛋白Ompk35和Ompk36的表达情况;对携带碳青霉烯酶基因的菌株进行质粒转移接合试验。结果 75株CRKP中,有71株改良Hodge试验阳性,其中69株携带bla_(KPC-2)基因合并Ompk36变异(68株)或Ompk36缺失(1株);1株携带bla_(IMP-4)基因合并Ompk35和Ompk36变异,1株携带bla_(NDM-1)和bla_(CIT-1)基因合并Ompk35和Ompk36变异。4株改良Hodge试验阴性的菌株中,3株DHA4基因阳性合并Ompk36缺失(1株)或Ompk36变异(2株),另1株未检测到耐药基因但Ompk36缺失。仅4株产碳青霉烯酶菌株(4/71)转移接合试验成功。结论临床标本分离的CRKP对碳青霉烯类抗生素的主要耐药机制为产KPC-2酶合并外膜蛋白表达异常。需加强院内感染预防控制措施,防止此类菌株的播散。

肺炎克雷伯菌耐药率与抗菌药物使用强度的相关性研究

目的:分析我院2011–2014年住院患者肺炎克雷伯菌的耐药率和治疗用抗菌药物的使用情况,为临床合理用药提供参考。方法:采用回顾性调查方法,统计2011–2014年住院患者肺炎克雷伯菌的耐药率及治疗用抗菌药物的使用强度(AUD),并对数据采用Spearman相关法进行分析。结果:肺炎克雷伯菌的耐药率和产ESBLs菌株检出率不断上升,肺炎克雷伯菌对头孢美唑、哌拉西林他唑巴坦、头孢哌酮舒巴坦、美罗培南、亚胺培南的耐药率与头孢匹罗的AUD呈正相关(P<0.01);对美罗培南、亚胺培南、头孢美唑的耐药率与哌拉西林他唑巴坦的AUD呈高度负相关(P<0.05)。结论:肺炎克雷伯菌耐药率与抗菌药物用量存在一定相关性,应合理选择抗菌药物,控制和延缓耐药菌的增长。

产NDM-1型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌儿童血流感染的临床特征及细菌耐药性分析

目的研究产NDM-1型碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌儿童血流感染的临床特征及细菌耐药性。方法收集首都医科大学附属北京儿童医院2011年1月-2014年8月住院患儿血培养分离的非重复耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKp);用微量肉汤稀释法测定15种抗菌药物的MIC值;采用PCR法确定产NDM-1菌株;回顾分析病历资料了解感染产NDM-1菌株患儿的临床特征,并与感染非产NDM-1菌株患儿进行比较。结果 52株CRKp中共检出28株产NDM-1菌株。产NDM-1菌株组均为多重耐药菌,对青霉素、头孢菌素和哌拉西林-他唑巴坦的耐药率达100%(28/28),对氨曲南、甲氧苄啶-磺胺甲唑及庆大霉素的耐药率均>75%,对亚胺培南和美罗培南的耐药率分别为100%(28/28)、92.9%(26/28)。产NDM-1菌株中碳青霉烯类高MIC值的菌株比例高于非产NDM-1菌株。产NDM-1菌株组的患儿中,82.1%(23/28)来自血液病房,常见基础疾病为血液系统恶性肿瘤(78.6%,22/28),20例(76.4%)患儿存在中性粒细胞缺乏伴发热;产与非产NDM-1肺炎克雷伯菌血流感染患儿相比,反复住院(P=0.202)、近期使用抗菌药物(P=0.615)、常见基础疾病(P=0.856)以及深静脉置管(P=0.099)方面差异无统计学意义。明确肺炎克雷伯菌感染后,37例患儿接受了碳青霉烯类药物联合敏感药物治疗。产NDM-1菌株组病死率与非产NDM-1菌株组相比无明显差异(2/28对3/24;P=0.625)。结论该院已出现产NDM-1肺炎克雷伯菌株,呈逐年增长趋势,此类细菌呈多重耐药,碳青霉烯类高MIC值的菌株所占比例高,临床特征上与非产NDM-1菌无明显区别。

贵阳某医院耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学分析

目的研究耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)的耐药性、耐药基因与同源性,为临床用药与院感控制提供依据。方法收集贵州省人民医院2016年5月—2017年2月临床上分离的50株CRKP,检测其对19种抗菌药的药物敏感性。PCR法扩增碳青霉烯酶基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(OXA)和bla_(NDM-1))并对扩增阳性产物进行测序,所得序列与Gen Bank数据库进行比对,确定耐药基因分型。采用ERIC-PCR法进行同源性检测。结果 50株CRKP均为多重耐药菌。19种抗菌药物中,耐药率低于50%的抗菌药物有多黏菌素0、替加环素4%、米诺环素20%、四环素38%。对复方磺胺甲噁唑的耐药率为60%,对碳青霉烯类、头孢菌素、氨曲南、含酶抑制剂、以及喹诺酮类、氨基糖苷类的耐药率为84%~100%。50株CRKP中,48株(96%)检出碳青霉烯酶基因,其中41株(82%)bla_(KPC-2)、3株(6%)bla_(IMP-8和4)株(8%)bla_(NDM-1)。41株检出KPC-2型碳青霉烯酶的CRKP分为6个基因型(A-F型),其中A型18株、B型6株、C型12株、D型3株、E型、F型各1株。结论 CRKP的耐药率高,主要耐药机制是产KPC-2型碳青霉烯酶,其次是产NDM-1、IMP-8型碳青霉烯酶。CRKP存在科室间、科室内的克隆传播,应加强对CRKP的监测和院感控制。

大气压冷等离子体诱变产1，3-丙二醇菌株Klebsiella pneumoniae

采用大气压冷等离子体介质阻挡放电法对产1,3-丙二醇的克雷伯氏菌进行诱变,采用诱变与筛选同时进行的单细胞平板诱变方法,同时获得了可耐受高浓度甘油且1,3-丙二醇产量较高的优良突变株.对诱变后菌的间歇发酵结果表明,诱变菌株比出发菌株1,3-丙二醇的质量转化率提高了23%,对数期比生长速率提高了18%.批式流加发酵过程中,1,3-PD浓度在发酵36h时达到70.5g/L,甘油的质量转化率为0.57g/g,分别比野生菌提高47%和58%.该诱变和筛选方法具有操作简单、效率高等特点,对具有工业应用价值的菌株筛选具有实用价值.

利用氧化还原电位调控基因工程菌株Klebsiella pneumoniae F-1合成1,3-丙二醇

基因工程菌株Klebsiella pneumoniae厌氧发酵过程中,氧化还原电位(ORP)是一个监控发酵过程的重要指标.考察了K.pneumoniae F-1在不同ORP(-190,-210,-240和-290mV)下菌体生长和代谢产物合成的情况.在ORP为-240mV时,1,3-丙二醇的发酵终浓度和得率分别为81.5g/L和0.423mol/mol,分别为4种ORP条件下的最高值.这说明ORP=-240mV是菌株K.pneumoniae F-1的最适ORP.此ORP既不同于野生菌株K.pneumoniae M5aL的最适ORP(-190mV),也不同于经过诱变的菌株K.pneumoniae YMU2的最适ORP(-280mV).另外,通过研究发酵体系ORP对甘油代谢流的影响,发现还原性氛围较有利于甘油向1,3-PD、乙醇、2,3-丁二醇等还原性较高的代谢物转化.首次报道了ORP调控发酵过程在基因工程改造菌株中的应用,这对于进一步研究ORP调控厌氧发酵过程具有一定的意义.

肺炎克雷伯菌OqxAB外排泵与生物膜形成相关性研究

目的分析耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌(CRKPs)的生物膜形成能力与OqxAB外排泵的相关性。方法收集2008—2013年间温州医科大学附属第一医院临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌37株。采用微量肉汤稀释法检测其对亚胺培南、厄他培南以及美罗培南的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC),结晶紫染色法测定其生物膜形成能力,PCR方法筛查外排泵基因oqxA和oqxB的携带情况并分析亚抑菌浓度的外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)对生物膜形成的影响;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测CCCP存在与不存在条件下生物膜状态与浮游状态oqxB外排泵基因的表达量。用统计学软件SPSS 17.0分析实验数据。结果 37株肺炎克雷伯菌均对至少1种碳青霉烯类药物的敏感性降低,37株菌都具有不同程度的生物膜形成能力(A590范围为0.044~1.113);在所有菌株中,只有7株菌存在oqxA或oqxB外排泵基因的缺失,与外排泵基因完整的试验菌株相比,这7株菌形成生物膜的能力较低;外排泵抑制试验发现亚抑菌浓度的CCCP对实验菌株的生物膜形成能力都有不同程度的促进作用;qRT-PCR结果证明,生物膜状态下菌株的外排泵基因的表达量要高于浮游状态下的表达量。结论 OqxAB外排泵过表达可能会促进肺炎克雷伯菌生物膜的形成。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌多位点序列分型和不同ST分型感染患者的临床特点

目的对临床分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CR-KPN)进行多位点序列分型(MLST),同时研究不同ST分型感染患者的临床特点。方法收集2013年1月-2015年6月辽宁省为主5所医院临床分离的61株CR-KPN,采用微量肉汤稀释法测定受试菌株对14种抗菌药物的敏感性。应用PCR基因扩增技术及DNA测序方法对受试菌株进行碳青霉烯酶基因检测。通过对受试菌株进行MLST,探讨其克隆相关性和分子流行病学特征。同时分析不同ST分型下CR-KPN的耐药特点、耐药机制及菌株感染的临床特点。结果 MLST分型显示61株CR-KPN共有18种ST分型,ST11为优势型别(53.3%),研究同时发现这部分ST11型菌株更容易对碳青霉烯类抗生素耐药且MIC值较高,大部分产KPC-2型碳青霉烯酶。单因素分析提示ST11组患者在ICU接受治疗所占的比例及机械通气的使用率高于非ST11组,差异具有统计学意义。其他ST型中ST2033、ST2135、ST2193、ST2194、ST2195、ST2196为世界范围内首次注册,其中ST2193、ST2194、ST2195与ST11有密切的亲缘性。临床资料提示同一所医院同一时期以相同克隆流行为主。结论 MLST显示CR-KPN共有18种ST型别,ST11为优势型别,结合临床资料发现同一所医院同一时期以相同克隆流行为主,提示CR-KPN有局部播散的风险。鉴于临床资料分析提示接受过ICU治疗和机械通气的患者容易发生CR-KPN菌株(特别是ST11型)感染的风险,此类患者应引起临床的广泛重视。

盾叶薯蓣糖化液发酵生产2,3-丁二醇

利用克雷伯氏杆菌以盾叶薯蓣糖化液为底物发酵生产2,3-丁二醇(2,3-BD),考察了2,3-BD浓度、生产强度、有机酸生成及代谢流量分布情况.结果表明,盾叶薯蓣中的有机酸成分能促进三羧酸循环途径和乙酸途径的代谢流,减弱琥珀酸途径的代谢流,从而提高2,3-BD的浓度.以盾叶薯蓣糖化液为底物,采用批式流加方式,补加固体葡萄糖,发酵56h,发酵液中2,3-BD最终浓度达到80.20g/L,乙偶姻与2,3-BD浓度之和最终达到86.19g/L,生产强度达到1.54g/(L-h),比单独以葡萄糖为底物时分别提高了8.50%,7.38%和7.69%.

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学及耐药机制

目的研究碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌分子流行病学及对碳青霉烯类耐药机制。方法 KB法筛选对碳青霉烯类耐药的肺炎克雷伯菌临床分离株24株,同时采用微量肉汤稀释法测定这些细菌的最低抑菌浓度,改良Hodge实验检测碳青霉烯酶;PCR检测碳青霉烯酶基因(bla_(KPC)、bla_(IMP)、bla_(NDM)、bla_(VIM)、bla_(IMI)、bla_(SPM)、bla_(NDMOXA-23)、bla_(NDMOXA-24)、bla_(NDMOXA-48)和bla_(NDMOXA-58))。结果药敏试验显示碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌具有多重耐药性。PCR扩增碳青霉烯酶基因,blaIMP阳性率为58.3%,经测序为IMP-4,其余均为阴性。结论肺炎克雷伯菌临床分离株对碳青霉烯类抗生素的耐药机制主要与产IMP-4金属酶有关。

耐铅产絮克雷伯氏菌胞外聚合物EPS-07吸附水中Pb(Ⅱ)的特性

研究抗铅产絮菌株B-07胞外聚合物EPS-07作为吸附剂处理含Pb(Ⅱ)的废水的吸附性能。结果表明:当吸附时间为80 min,pH为5.5,吸附剂用量为0.8 g/L,溶液中Pb(Ⅱ)初始浓度为50 mg/L时,EPS-07对铅离子的吸附平衡容量为61.5 mg/g。吸附等温式能较好地用Langmuir模型表达,吸附动力学很好地符合准二级动力学模型。FT-IR结果表明,EPS-07与Pb(Ⅱ)的作用过程中,主要是羟基、羧基等基团参与了吸附作用。SEM观察显示EPS-07表面结构比较松散,EPS-07与Pb(Ⅱ)作用后,其表面变得致密并有结晶沉淀物出现。EDS图出现了Pb元素峰,表明Pb(Ⅱ)被吸附到EPS-07上面。

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱快速检测ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌

目的采用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)筛选并验证ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰,建立快速检测此型别肺炎克雷伯菌的方法。方法收集前期已进行碳青霉烯酶基因检测和多位点序列分型(MLST)的118株肺炎克雷伯菌作为特异峰筛选组,其中ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌67株,非ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌51株,采用Clinpro Tools 3.0软件和Flex analysis 3.0图谱分析软件筛选出ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰;再收集前期已进行碳青霉烯酶基因检测和MLST的另外89株肺炎克雷伯菌作为特异峰验证组,严格按照试验条件获得质量图谱,对特异峰的特异性进行验证并进行重复性试验;最后随机收集95株肺炎克雷伯菌临床分离株及其临床鉴定图谱,利用特异峰直接判断菌株是否为ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌,同时对菌株进行碳青霉烯酶基因检测和MLST,以评估特异峰的临床应用价值。结果利用分析软件筛选获得ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的最佳特异峰为m/z 4 521;在试验条件下,以该峰作为检测此型别细菌的特异峰,其特异性和敏感性分别为98.1%和97.3%,且该特异峰的重复性达97.4%;采用临床鉴定图谱对特异峰的临床应用价值进行评估,其特异性和敏感性分别为95.2%和96.9%。结论 MALDITOF MS可检出ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌的特异峰m/z 4 521。可依据细菌鉴定图谱是否存在此特异峰来直接检测ST11型产KPC-2肺炎克雷伯菌,该特异峰具有较高的特异性和敏感性,可快速、准确地为临床合理、有效的治疗和医院感染的控制提供依据。