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山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化
被引量:
1
1
作者
辛桂瑜
王丽霞
+7 位作者
叶新慧
申魁魁
符欣蕙
李恭贺
张明
卢晟盛
卢克焕
郑喜邦
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期80-85,共6页
旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的c...
旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体,构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测确认,镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合蛋白。结果表明:(1)从山羊生殖脊中克隆了Klf4基因,其开放阅读框由1 434个核苷酸组成,编码478个氨基酸,而且该序列与绵羊的同源性最高,达到98.5%;(2)经过SignalP 4.0在线分析,Klf4的编码蛋白不存在信号肽;(3)经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组质粒pET30a-Klf4在大肠杆菌中得以表达;在变性条件下纯化,获得了His-Klf4融合蛋白。
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关键词
klf4
分子克隆
原核表达
蛋白纯化
山羊
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题名
山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化
被引量:
1
1
作者
辛桂瑜
王丽霞
叶新慧
申魁魁
符欣蕙
李恭贺
张明
卢晟盛
卢克焕
郑喜邦
机构
广西大学动物科技学院
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第2期80-85,共6页
基金
广西自然科学基金项目(2011GXNSFD018018)
亚热带农业生物资源保护与利用国家重点实验室开放课题(SB0907)
文摘
旨在克隆山羊Klf4基因,构建重组质粒pET30a-Klf4,通过原核表达技术获得纯化的His-Klf4融合蛋白。从山羊的生殖脊中提取总RNA,用RT-PCR的方法扩增Klf4基因编码区序列,通过TA克隆构建pMD18-T-Klf4重组质粒。酶切鉴定与测序分析后将Klf4的cDNA亚克隆至pET-30a载体,构建重组质粒pET30a-Klf4。酶切鉴定后将其导入大肠杆菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blotting检测确认,镍离子金属螯合亲和层析法纯化His-Klf4融合蛋白。结果表明:(1)从山羊生殖脊中克隆了Klf4基因,其开放阅读框由1 434个核苷酸组成,编码478个氨基酸,而且该序列与绵羊的同源性最高,达到98.5%;(2)经过SignalP 4.0在线分析,Klf4的编码蛋白不存在信号肽;(3)经SDS-PAGE和Western blotting分析表明,重组质粒pET30a-Klf4在大肠杆菌中得以表达;在变性条件下纯化,获得了His-Klf4融合蛋白。
关键词
klf4
分子克隆
原核表达
蛋白纯化
山羊
Keywords
klf4 molecular cloning prokaryotic expression protein purification capra hircus
分类号
S827 [农业科学—畜牧学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
山羊Klf4基因克隆、原核表达和His-Klf4融合蛋白纯化
辛桂瑜
王丽霞
叶新慧
申魁魁
符欣蕙
李恭贺
张明
卢晟盛
卢克焕
郑喜邦
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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