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重组减蛋综合征病毒KnobS干酪乳杆菌的构建与表达 被引量:1
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作者 郭建军 袁林 +2 位作者 曾静 邱小忠 付锦楠 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2016年第2期81-86,共6页
以干酪乳杆菌为传递载体,以开发食品级安全的减蛋综合征病毒疫苗为目标,构建了一个温度敏感型自杀型质粒系统p ORZP-UKD。将该质粒电转化到干酪乳杆菌L.casei中,经过2次升温处理和5-氟尿嘧啶抗性筛选,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方... 以干酪乳杆菌为传递载体,以开发食品级安全的减蛋综合征病毒疫苗为目标,构建了一个温度敏感型自杀型质粒系统p ORZP-UKD。将该质粒电转化到干酪乳杆菌L.casei中,经过2次升温处理和5-氟尿嘧啶抗性筛选,挑选阳性克隆,采用PCR和SDS-PAGE方法进行鉴定。KnobS基因整合到干酪乳酸杆菌基因组内,并实现融合蛋白KnobS的分泌表达。表明得到了一株具有无任何选择性标记、携带有KnobS表达盒元件的基因组整合的重组干酪乳酸杆菌KnobSΔupp L.casei,且整合的外源基因能够随着细菌的复制而进行表达,为减蛋综合征病毒免疫保护性抗原KnobS疫苗的进一步研制提供了试验数据。 展开更多
关键词 干酪乳杆菌 减蛋综合征病毒knobs蛋白 基因组表达
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共表达KnobS蛋白与LTB蛋白的重组干酪乳杆菌构建 被引量:1
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作者 付锦楠 郭建军 +2 位作者 袁林 傅筱冲 何顺华 《江西科学》 2014年第2期143-146,171,共5页
在干酪乳杆菌中表达减蛋综合征病毒纤维蛋白KnobS,并分析其抗原性。分别将编码减蛋综合征病毒主要免疫保护性抗原纤维蛋白KnobS与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入干酪乳酸杆菌分泌表达载体pMG36e-UP/L中,成功构建重组表达载体... 在干酪乳杆菌中表达减蛋综合征病毒纤维蛋白KnobS,并分析其抗原性。分别将编码减蛋综合征病毒主要免疫保护性抗原纤维蛋白KnobS与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位(LTB)基因插入干酪乳酸杆菌分泌表达载体pMG36e-UP/L中,成功构建重组表达载体pMG36e-UP/LTB-KnobS,获得表达融合蛋白KnobS-LTB的重组乳酸菌干酪乳杆菌表达系统;经SDS-PAGE和Western-blot检测表明,有大小约41kD的蛋白表达,具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性。在干酪乳杆菌中成功地表达了含减蛋综合征病毒抗原的融合蛋白KnobS-LTB,且具有较好的抗原性,为减蛋综合征病毒重组乳酸菌活菌口服疫苗的研制奠定重要的物质基础。 展开更多
关键词 减蛋综合征病毒 干酪乳杆菌 knobs蛋白 LTB 共表达
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Flash MX模拟横波——兼谈knobs & faders的用法
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作者 王阳生 《计算机教与学》 2003年第11期55-57,共3页
我们知道,Flash MX提供了一个公用库,其中包括knobs&faders类按钮,可以通过调节相关部件的位置来控制变量的数值,方便而直观。更重要的是,只要搞懂了原理,制作的过程非常简捷。近日在用Flash MX模拟横波时再次用到它。
关键词 Flash-MX 用法 knobs faders 构思 素材 课件制作
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The NDT detection of knobs' shape by video treatment technique 被引量:3
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作者 任洪娥 马岩 +2 位作者 唐晓华 张瑞滨 朱晓明 《Journal of Forestry Research》 SCIE CAS CSCD 1999年第3期191-193,共3页
The NDT detection of knobs of logs and timbers was conducted by using computer video technique.The key detection points were taken from these knobs for mathematics description. It can make the drawing ofthese knobs qu... The NDT detection of knobs of logs and timbers was conducted by using computer video technique.The key detection points were taken from these knobs for mathematics description. It can make the drawing ofthese knobs quantitatively and establish corresponding mathematics models. Using the grayness of pictures andcartoon if eatment made the mathemstics reappearance of the knobs become more access to video pictures. 展开更多
关键词 Knob. VIDEO treatment. NDT DETECTION
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Glass Bowl with Knobs
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作者 XUE JIE 《Women of China》 1998年第3期44-44,共1页
IN 1964, the tomb of Hua Fang was excavated at a construction site in Beijing’s western suburbs. Hua Fang was the wife of Wang Jun, who was a prefectural governor of Youzhou (an ancient name for Beijing) during the W... IN 1964, the tomb of Hua Fang was excavated at a construction site in Beijing’s western suburbs. Hua Fang was the wife of Wang Jun, who was a prefectural governor of Youzhou (an ancient name for Beijing) during the Western Jin Dynasty. Found in the tomb were a bone ruler and a silver bell in good condition, as well as a packet of half-transparent pieces of glassware. The fragments were restored by experts in 1984 into a complete vessel, which is currently displayed in the Capital Museum. 展开更多
关键词 Glass Bowl with knobs JUN
原文传递
A Couple Makes Seal Knobs
6
作者 YUAN LILI HONG LIU 《Women of China》 1997年第5期6-8,共3页
FOR Wang Zhao and Ren Meiying, their marriage has a magic power pushing them towards a common cause. Wang and Ren met each other in 1983. At that time Wang was working with an oil company at Langfang, 58
关键词 A Couple Makes Seal knobs
原文传递
禽4型腺病毒knob蛋白的原核表达及纯化蛋白的免疫原性研究
7
作者 黄冬 卜德新 +3 位作者 王睿智 张伯顺 于春梅 丛雁方 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第5期87-92,共6页
为研究Knob蛋白的免疫效果,将合成的mknob基因克隆至pET28a(+)表达载体,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,低温诱导表达,knob蛋白纯化后去内毒素,按不同剂量免疫SPF鸡。结果表明:重组质粒pET28a-mknob可以高效表达目的蛋白;Western blot结... 为研究Knob蛋白的免疫效果,将合成的mknob基因克隆至pET28a(+)表达载体,转化至大肠杆菌BL21感受态细胞,低温诱导表达,knob蛋白纯化后去内毒素,按不同剂量免疫SPF鸡。结果表明:重组质粒pET28a-mknob可以高效表达目的蛋白;Western blot结果表明,表达的蛋白可与禽腺病毒特异性血清发生特异性结合;免疫保护试验分析发现,10μg蛋白免疫SPF鸡即可产生100%保护。本研究为禽4型腺病毒亚单位疫苗的研发奠定了基础。 展开更多
关键词 禽4型腺病毒 knob蛋白 原核表达 纯化 免疫原性
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产蛋下降综合征病毒纤突蛋白Knob-S区原核表达及其活性分析 被引量:6
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作者 陈滔 唐应华 +5 位作者 陆吉虎 高峰 于漾 何家惠 黎满香 侯继波 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2012年第6期41-44,共4页
通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用... 通过PCR扩增得到产蛋下降综合征病毒(EDSV)纤突蛋白Knob-S区基因,将其克隆至原核表达载体pET-32(a)的多克隆位点构建了原核表达载体pET-32(a)-Knob-S,将其转化至感受态细胞BL21中,经IPTG诱导,SDS-PAGE分析,结果获得了42ku的融合蛋白,用纯化的融合蛋白免疫鸡制备抗血清,通过血凝试验、Western blot和血凝抑制试验分析,表明该融合蛋白不能凝集鸡红细胞,无血凝活性;但可与EDSV阳性血清发生特异反应,并诱导机体产生特异性抗体,具有很好的抗原性。 展开更多
关键词 产蛋下降综合征病毒 原核表达 Knob—S区
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累及Hand knob区的分水岭梗死致“垂腕”1例及文献复习 被引量:2
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作者 王继蕊 林梅青 +1 位作者 徐家欢 商秀丽 《中国实用神经疾病杂志》 2020年第16期1462-1465,共4页
目的探讨以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死的临床特点及影像学特点。方法收集1例以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死患者的临床资料并复习相关文献。结果Hand knob区受累的分水岭梗死也可使患者出现单纯“垂腕”症状。结论“垂... 目的探讨以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死的临床特点及影像学特点。方法收集1例以“垂腕”为主要临床表现的分水岭梗死患者的临床资料并复习相关文献。结果Hand knob区受累的分水岭梗死也可使患者出现单纯“垂腕”症状。结论“垂腕”不仅是周围神经系统受累的标志,也可由于Hand knob区受累的分水岭梗死所致。 展开更多
关键词 分水岭梗死 垂腕 Hand knob区 临床特点 影像学特点
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腺病毒5型knob蛋白的原核表达、纯化及其单克隆抗体的制备
10
作者 王鹏 王华茂 +4 位作者 周敏 刘素霞 林志新 徐宇虹 李宗海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第11期1038-1040,共3页
目的:表达、纯化腺病毒5型knob蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆并表达腺病毒的knob蛋白,其氨基端带有6-His标签。纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:成功表达了knob蛋白。SDS-PAGE显示所表达蛋白的... 目的:表达、纯化腺病毒5型knob蛋白,并制备其单克隆抗体(mAb)。方法:克隆并表达腺病毒的knob蛋白,其氨基端带有6-His标签。纯化后的蛋白免疫BALB/c小鼠,经融合、筛选制备特异性mAb。结果:成功表达了knob蛋白。SDS-PAGE显示所表达蛋白的相对分子质量(Mr)约为23000。获得了2株分泌针对knob的杂交瘤细胞系(8D7和6D4),其分泌的mAb的Ig亚类(型)均为IgG2b。ELISA检测,对应腹水mAb的效价分别为1:2.1×105,1:2.2×105。Western blot结果显示抗knobmAb具有良好的特异性。结论:成功地制备了knob蛋白及其mAb。 展开更多
关键词 knob蛋白 原核表达 单克隆抗体
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改进KNOB法实用化开关电容滤波器设计程序
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作者 李松银 郑君里 李梅 《电子学报》 EI CAS CSCD 北大核心 1993年第2期55-63,共9页
本文给出一个开关电容滤波器(SCF)设计程序。利用作者提出的改进KNOB法自动生成等效电路,借助通用电路模拟程序SPICE计算SCF频响特性。同时考虑了运放的有限增益带宽等非理想因素的影响,方法简便易行,几种实例硬件测试与计算机模拟结果... 本文给出一个开关电容滤波器(SCF)设计程序。利用作者提出的改进KNOB法自动生成等效电路,借助通用电路模拟程序SPICE计算SCF频响特性。同时考虑了运放的有限增益带宽等非理想因素的影响,方法简便易行,几种实例硬件测试与计算机模拟结果一致。 展开更多
关键词 开关电容 滤波器 KNOB法 等效电路
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Ad5-knob蛋白在大肠杆菌中可溶性表达及其活性检测
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作者 赵颜忠 陈玉祥 +2 位作者 文路 刘霆 朱晒红 《中国病毒学》 CSCD 2005年第2期193-196,共4页
采用PCR技术, 从AdEasy 1质粒DNA中获得knob全长序列, 克隆入pGEM T vector中。DNA测序鉴定后, 构建pQE 30/knob重组表达载体, 转化大肠杆菌M15 pREP4),IPTG诱导表达腺病毒5 型纤维蛋白的knob功能域(Ad5 knob), SDS PAGE分析,表达产物... 采用PCR技术, 从AdEasy 1质粒DNA中获得knob全长序列, 克隆入pGEM T vector中。DNA测序鉴定后, 构建pQE 30/knob重组表达载体, 转化大肠杆菌M15 pREP4),IPTG诱导表达腺病毒5 型纤维蛋白的knob功能域(Ad5 knob), SDS PAGE分析,表达产物主要以可溶性蛋白的形式存在于细菌裂解液上清之中。经Ni2+ NTA亲和层析一步分离纯化后,洗脱产物中Ad5 knob蛋白纯度超过95%。N 端氨基酸测序证实了纯化产物为Ad5 knob蛋白,细胞受体结合实验检测到所得蛋白能够与Hela细胞上的相应受体特异性结合。上述结果表明在大肠杆菌中已经高效表达了可溶性Ad5 knob蛋白,一步即纯化该蛋白,并具有良好的生物活性,为其下阶段的深入研究提供了重要的实验材料。 展开更多
关键词 腺病毒 原核表达 knob蛋白 活性检测
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双功能酵母展示与分泌系统的构建与验证
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作者 王旭辉 周倩 +3 位作者 凌小敏 刘军建 康立山 顾春银 《生物加工过程》 CAS 2021年第5期547-554,共8页
酵母展示技术被广泛应用于抗体药物候选分子的发现与优化中,但传统酵母展示技术只能将抗体展示于表面,无法同时将抗体分泌至培养基的上清液进行亲和力测定。为克服此难点,将含Knob突变的抗体可结晶片断(Fc)展示于酵母表面作为“诱饵”,... 酵母展示技术被广泛应用于抗体药物候选分子的发现与优化中,但传统酵母展示技术只能将抗体展示于表面,无法同时将抗体分泌至培养基的上清液进行亲和力测定。为克服此难点,将含Knob突变的抗体可结晶片断(Fc)展示于酵母表面作为“诱饵”,通过“Knob into Hole”的方式结合含Hole突变的免疫球蛋白(IgG)半分子,达到展示抗体的作用;同时,含Hole突变的IgG半分子自身可形成同源二聚体,形成IgG完整分子分泌至培养基中,实现酵母抗体展示与分泌的双重功能。结果发现:使用含Knob突变的重链恒定区3作为“诱饵”,展示抗体的效果最佳;双功能酵母展示与分泌系统经模拟文库验证,可高效筛选出占比极低的含高亲和力抗体序列的菌株;筛选出的菌株可将抗体同时分泌至培养基上清,直接用于亲和力测定。本研究结果充分说明,双功能酵母展示与分泌系统搭建成功并可用于抗体的亲和力成熟中,从而显著提高工作效率、缩短抗体亲和力成熟的周期。 展开更多
关键词 酵母展示 抗体展示 抗体分泌 亲和力成熟 Knob突变
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人55型腺病毒Fiber Knob蛋白原核表达、纯化及活性检测
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作者 陈楠 吴同鑫 +5 位作者 章汝 李晓月 顾欣雨 唐香平 李云 易永祥 《生物技术》 CAS 2023年第5期544-550,共7页
[目的]构建Fiber Knob原核表达载体,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导其表达,纯化具有良好生物活性的Fiber Knob重组蛋白。[方法]从人55型腺病毒(HAdV-55)中通过PCR扩增目的基因片段Fiber Knob,将该片段与原核表达载体pET15... [目的]构建Fiber Knob原核表达载体,在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中诱导其表达,纯化具有良好生物活性的Fiber Knob重组蛋白。[方法]从人55型腺病毒(HAdV-55)中通过PCR扩增目的基因片段Fiber Knob,将该片段与原核表达载体pET15b-His连接,构建重组原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,转化大肠杆菌BL21(DE3)中,IPTG诱导表达目的蛋白,通过镍柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,SDS-PAGE和Western Blotting检测目的蛋白的表达与纯度。ELISA检测目的蛋白的生物学活性。[结果]重组表达质粒经双酶切和测序鉴定证明构建正确。重组蛋白主要以包涵体形式存在,上清中也有少量表达,重组蛋白相对分子质量约为25 kDa且纯度95%以上,ELISA结果显示制备的Fiber Knob蛋白与CD46胞外域蛋白之间存在直接的相互作用,并且这种相互作用是剂量依赖性的。[结论]成功构建了原核表达质粒pET15b-Fiber Knob-His,在大肠杆菌中成功诱导表达了Fiber Knob蛋白,纯化的Fiber Knob蛋白具有明显结合CD46胞外域蛋白的生物学活性,为其单克隆抗体的制备及人55型腺病毒新的细胞受体的发现奠定了基础。 展开更多
关键词 Fiber Knob蛋白 人55型腺病毒 原核表达 纯化 活性检测
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犬Ⅰ型腺病毒结构蛋白Knob的可溶性表达及免疫原性研究 被引量:1
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作者 孙杰 秦飞燕 +6 位作者 朱言柱 薛向红 廉士珍 赵辉 王洋 柴秀丽 闫喜军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第15期10-14,共5页
为了探究犬Ⅰ型腺病毒(Canineadenovirus type1,CAdV-1)F1301株结构蛋白Knob的免疫原性,试验采用原核表达技术将Knob蛋白基因克隆到pColdⅡ原核表达载体中进行低温诱导,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中实现可溶性表达。利用纯化后的... 为了探究犬Ⅰ型腺病毒(Canineadenovirus type1,CAdV-1)F1301株结构蛋白Knob的免疫原性,试验采用原核表达技术将Knob蛋白基因克隆到pColdⅡ原核表达载体中进行低温诱导,并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中实现可溶性表达。利用纯化后的重组蛋白Knob免疫Balb/c小鼠,监测免疫后小鼠血清中重组蛋白Knob特异性抗体ELISA效价、病毒中和抗体效价,测定脾脏T淋巴细胞增殖活性,研究重组蛋白Knob的免疫原性。结果表明:表达的重组蛋白Knob为可溶性蛋白,分子质量约为20ku。第2次免疫后7,14天,试验组小鼠血清ELISA抗体效价分别为1∶6400和1∶3200,中和抗体效价分别为1∶118和1∶96。第2次免疫后7天,试验组小鼠T淋巴细胞增殖指数为1.322,显著高于对照组(P<0.05)。说明试验成功表达出CAdV-1重组蛋白Knob,所表达的重组蛋白Knob具有良好的免疫原性且存在CAdV-1的中和抗原表位。 展开更多
关键词 犬Ⅰ型腺病毒 Knob蛋白 原核表达 免疫原性 中和抗体
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Heterozygosity of Knob-Associated Tandem Repeats and Knob Instability in Mitotic Chromosomes of Zea (Zea mays L. and Z. diploperennis Iltis Doebley) 被引量:1
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作者 Zhi-Yong XIONG Yong LIU +3 位作者 Yong-Gang HE Yun-Chun SONG Ke-Xiu LI Guan-Yuan HE 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2005年第11期1345-1351,共7页
Knobs are blocks of heterochromatin present on chromosomes of maize (Zea mays L.) and its relatives that have effects on the frequency of genetic recombination, as well as on chromosome behavior. Knob heterozygosity... Knobs are blocks of heterochromatin present on chromosomes of maize (Zea mays L.) and its relatives that have effects on the frequency of genetic recombination, as well as on chromosome behavior. Knob heterozygosity and instability in six maize inbred lines and one Z. diploperennis Iltis Doebley line were investigated using the fluorescence in situ hybridization (FISH) technique with knob-associated tandem repeats (180 bp and 350 bp (TR- 1)) as probes. Signals of seven heterozygous knobs containing 180- bp repeats and of one heterozygous knob containing TR- 1 were captured in chromosomes of all materials tested according to the results of FISH, which demonstrates that the 180-bp repeat is the main contributor to knob heterozygosity compared with the TR- 1 element. In addition, one target cell with two TR- 1 signals on one homolog of chromosome 2L, which was different from the normal cells in the maize inbred line GB57, was observed, suggesting knob duplication and an instability phenomenon in the maize genome. 展开更多
关键词 fluorescence in situ hybridization KNOB repetitive DNA sequence Zea diploperennis Z. mays.
原文传递
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