玫瑰考克氏菌(Kocuria rosea)KDF3胞外蛋白酶KRP3酶学性质与水解大豆蛋白产物研究

从我国传统细菌发酵腐乳中筛选出一株对大豆蛋白具有良好水解活性的玫瑰考克氏菌（犓狅犮狌狉犻犪狉狅狊犲犪）KDF3。在研究了该菌株胞外蛋白酶KRP3的酶学性质基础上，利用氨基酸检测技术分析了该酶水解大豆蛋白产生的氨基酸指纹图谱。实验结果表明，该酶的最适反应温度和pH 分别为50℃和8．0，在20～40℃和pH 5．0～7．0具有良好的稳定性，60℃保温30 min即可灭活；对10％的乙醇和11％的NaCl均有很好的耐受性；Ca2＋和Mn2＋对该酶激活作用显著。由该酶水解大豆蛋白产生的氨基酸图谱可知，总游离氨基酸、必需氨基酸和风味氨基酸的含量均明显增加。由以上结果可知，该酶在酶法促熟和酶法发酵腐乳领域具有潜在的应用价值。

基于基因组信息挖掘的内生细菌Kocuria rosea促进地黄生长的机制研究

明确地黄内生细菌玫瑰色考克菌Kocuria rosea对地黄生长的促进效应及机制,为研发绿色生态菌肥提供科学依据。以地黄“金九”为试验材料,经K.rosea处理后每隔15 d测定地上部参数(叶长、叶宽、株幅、茎粗),120 d后收获地上部及根系,测定根系指标(块根数、根长、根粗、根鲜重、根干重、根体积、根系活力)和次生代谢产物(梓醇、地黄苷A、地黄苷D、毛蕊花糖苷、益母草苷)。通过K.rosea对地黄和根际土壤中营养元素及其基因组分析探讨了K.rosea促进地黄生长的机制。施用K.rosea菌悬液后地黄叶长、叶宽、株幅和茎粗增幅最大分别为35.67%(60 d)、25.39%(45 d)、40.17%(60 d)、113.85%(45 d);块根数、根长、根粗、根体积、根鲜重、根干重和根系活力增加分别为41.71%、45.10%、48.61%、94.34%、101.55%、147.61%、42.08%;块根中地黄苷A和毛蕊花糖苷含量分别提高了76.67%、69.54%。K.rosea能够促进根际土壤中氮(N)、磷(P)、钾(K)向有效态转化,处理组速效氮(54.60 mg·kg^(-1))、速效磷(1.83μmol·g^(-1))、速效钾(83.75 mg·kg^(-1))的含量分别提高了138.78%、44.89%、14.34%,处理组N、P、K元素的含量在地黄根中分别提高了293.22%、202.63%、23.80%,叶中提高了23.60%、107.23%、134.53%。通过对K.rosea基因组分析发现,K.rosea中有与定殖相关的基因(rbsB、efp、bcsA、gmhC),与N、P、K代谢相关的基因(narG、narH、narI、nasA、nasB、GDH2、pyk、aceB、ackA、CS、ppa、ppk、ppk2、pstS、pstA、pstB、pstC),同时也含有与吲哚乙酸、玉米素合成相关的基因(iaaH、miaA),进一步研究发现K.rosea可定殖于地黄根系并分泌吲哚乙酸(3.85μg·mL^(-1))、玉米素(0.10μg·mL^(-1))。综上所述,K.rosea通过促进地黄植株的营养吸收促进地黄生长,可为研制促生微生物菌剂产品提供理论依据。

两种根际促生菌对马铃薯营养品质的影响研究

为了研究两种根际促生菌对马铃薯主要营养品质的影响,本试验利用玫瑰色考克氏菌SDB9和耐寒短杆菌SDB5两种根际促生菌浸泡处理马铃薯种薯,待收获后磨取干粉样品,分别对样品中维生素C、硝酸盐、淀粉、还原糖等主要营养成分进行测定并做对比分析。试验结果表明,SDB9处理除了还原性糖提高降低了品质外,其余指标均显示提高了营养品质,SDB9+5处理除了维生素C含量稍降低(与对照差异不显著)降低了品质外,其余指标均显示提高了营养品质,根据(反)隶属函数值数值综合考虑,营养品质由高到低的顺序为SDB9+5>SDB5>SDB9。综上所述,两种根际促生细菌的影响了马铃薯的五种营养指标,一定程度上改善了马铃薯营养品质,其中SDB9+5处理的效果最好。因此,该研究为改良马铃薯营养品质提供新的思路,从而为这两种根际促生菌在马铃薯上应用提供了理论基础。

玫瑰色考克氏菌SDB9对玉米农艺性状的影响研究

为研究沙地柏根际促生细菌(PGPR)玫瑰色考克氏菌SDB9与玉米互作后对玉米生长的影响,本试验选取陕单636为研究对象,在不施肥条件下,将浓度为1×106-107CFU/mL的菌液浇施在三叶期玉米的根部,在玉米抽雄期后,于试验及对照两组果穗茎节处取得鲜叶,测定叶片内的SOD、POD和CAT活性、MDA含量、脯氨酸含量;在玉米完熟期选取整株长势一致的植株,测定两组农艺性状指标和相同部位的根、茎、叶及籽粒的氮、磷、钾的平均含量,还有土壤中的氮、磷、钾含量。结果显示,与对照相比,接种SDB9的玉米的POD活性增加47%-67%,其它4个指标差异均不显著;玉米营养器官生长更加旺盛,产量提高14.58%;土壤中的氮、磷差异不显著,但是钾含量提高57.02%,差异显著。因此,推测玫瑰色考克氏菌SDB9与玉米互作后,能促进玉米的生长发育、提高耐受性,增产且能对根际土壤有解钾作用。

海参细菌的分离鉴定和生长特性研究

对大连产海参(刺参)不同部位的细菌进行了分离鉴定,得到3种菌株,分别为Kocuriaroseastacke-brandt、棒状杆菌(Corynebacteriumsp.)和有毒威克斯菌(WeeksellaviroseHolmes),其中Kocuriaroseastacke-brandt在国内尚未见报道,国内的菌种库中也没有。有毒威克斯菌是一种致病菌,其余两种为优势菌。对这3种菌进行了胞外酶活性研究,同时研究了温度、盐浓度和pH值对菌生长的影响。实验结果表明:3种菌对酯均无分解能力,对蛋白有一定的分解能力。棒状杆菌、Kocuriaroseastackebrandt和有毒威克斯菌最佳生长条件分别为:20℃,pH5.5,盐质量分数3%;25℃,pH5.5,盐质量分数4%;20℃,pH6.5,盐质量分数3.5%。

基于寡培养可视化的铀污染检测的微生物组合

为了评估监测铀污染对环境影响程度,为环境治理提供参考依据,本研究通过筛选获得对铀胁迫敏感和抗性的2类微生物,用以响应土壤或水体的铀污染,并考察其对铀污染响应灵敏度。实验筛选得到的红色敏感菌与粉色抗性菌经鉴定分别为粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)和玫瑰色考克氏菌(Kocuria rosea),明显的菌落特征实现了微生物检测的可视化与简单化。通过寡培养基的应用,成功地以粘质沙雷氏菌:玫瑰色考克氏菌为1∶2的比例构建了微生物检测体系。经验证,该体系在水体中能够检测出铀的最低浓度约为5 mg·L^(-1),在土壤中能检出的铀浓度高于10 mg·kg^(-1)才有明显效果,表明本微生物组合对于监测水体和土壤铀污染是有效的。该体系为水体和土壤铀污染的微生物监测提供了前期技术基础。同时,寡培养方式的使用为外界因素对微生物的影响的"效果保真培养"提供了一定的参考。

雾霾中库克菌属细菌的分离鉴定及药物敏感性分析

目的对雾霾中分离的库克细菌进行种属鉴定和药敏实验,研究环境中库克菌属细菌的分布状态、生化特性和耐药特征。方法于2016年冬季雾霾环境下使用空气撞击法收集距地面10~15 m的空气微生物,将分离的细菌纯化培养后进行革兰染色、16S r DNA序列分析、生化鉴定和耐药性分析。结果 8株细菌经16S r DNA测序分析确定为库克菌属细菌,为革兰阳性球菌;经VITEK 2革兰阳性细菌鉴定卡分析,8株菌鉴定为玫瑰色库克菌;其对青霉素类、碳青霉烯类、氨基糖苷类、丙酰胺类、四环素类、安沙霉素类等6类药物有不同程度的敏感,个别菌株对氟喹诺酮类、头孢类、大环内酯类、林可霉素类药物的耐药性表现为中介,未发现耐药株。结论雾霾空气中存在少量的条件致病菌玫瑰色库克菌,该菌对大部分抗生素敏感。