KLF4反义基因对内皮细胞血管性血友病因子、纤溶酶原抑制物-1表达的影响

目的 探讨类果蝇分节因子4（Kroppel-like factor4,KLF4）反义基因对原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC）中血管性血友病因子（vWF）、纤溶酶原抑制物-1（PAI-1）表达的影响,明确KLF4在内皮细胞调节血栓形成中的作用.方法 胰蛋白酶消化法分离和培养原代HUVEC,采用同源重组方法 构建携带反义KLF4基因腺病毒,实时定量（Real-time）PCR、Western blot、激光共聚焦显微镜法检测转染KLF4反义基因后内皮细胞KLF4、PAI-1、vWF mRNA和蛋白的表达.结果 成功构建出携带反义KLF4基因片段的重组腺病毒（Ad-反义KLF4）,以感染复数值200的重组腺病毒感染HUVEC,KLF4 mRNA相对表达水平由0.59±0.01下降至0.44±0.06,同时HUVEC中vWF mRNA相对表达水平升至1.17±0.05,与感染携带绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-GFP）组（1.04±0.03）相比,差异均具有统计学意义（P〈0.05）.而HUVEC中PAI-1 mRNA相对表达水平增加至0.73±0.01,与感染Ad-GFP组（0.67±0.04）相比,差异无统计学意义（P〉0.05）.与感染Ad-GFP组相比,感染Ad-反义KLF4的HUVEC中vWF、PAI-1蛋白表达水平明显增加.结论 KLF4反义基因可下调KLF4表达,促进内皮细胞中vWF、PAI-1的表达.KLF4可能参与内皮细胞抗栓作用的转录调节.