Krüppel样转录因子在糖尿病肾病中的作用机制

Krüppel样转录因子(Krüppel-like transcription factor,KLF)是一类含有锌指结构的转录因子,参与基因表达的调控过程,在多种疾病中表达异常。在糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)中,KLF通过调控细胞凋亡、炎症反应、线粒体自噬、细胞脂毒性和纤维化等过程发挥重要作用。本文就KLF家族在DKD中的研究进展进行综述,为今后DKD的预防和治疗提供新的靶点和理论依据。

Krüppel样因子4通过支持PPARγ信号通路维持细胞稳态以保护血管平滑肌细胞免受泡沫细胞样表型转化的损害

动脉粥样硬化(AS)被普遍认为是一种血管壁细胞(包括内皮细胞和血管平滑肌细胞)、循环细胞以及固有免疫原性细胞(例如单核细胞/巨噬细胞)等多种细胞综合作用引起的炎症性疾病。其中血管平滑肌细胞(VSMCs)胆固醇超负荷形成的泡沫细胞可能在动脉粥样硬化的进展中发挥重要作用。Krüppel样因子4(KLF4)是一种关键的抗炎转录因子,尤其在心血管疾病方面,已被证实发挥了重要的血管功能保护作用。然而,目前尚不清楚KLF4是否在AS过程胆固醇对VSMCs的损伤中发挥保护作用。该研究旨在探讨KLF4在AS进展过程中VSMCs泡沫细胞样表型转化的作用及其分子机制。小鼠AS造模结果显示,KLF4缺失增加动脉粥样硬化斑块面积(P<0.05),并增加动脉壁脂质蓄积(P<0.05)及血清胆固醇含量(P<0.05),加速AS进展。细胞内油红O染色及胆固醇含量测定研究证实,KLF4缺失促进VSMCs内胆固醇蓄积(P<0.05)。QRT-PCR和Western印迹结果证实,KLF4缺失促进VSMCs胆固醇摄取、合成、促炎因子分泌及巨噬细胞黏附和胆固醇损伤诱导的巨噬细胞标志物的表达(P<0.05),抑制胆固醇流出和氧化相关基因及收缩表型标志物的表达(P<0.05),加速VSMCs源性泡沫细胞形成。KLF4敲除VSMCs中利用腺病毒Ad-GFP-KLF4补救表达KLF4,显著逆转上述改变,并阻断由胆固醇蓄积诱导的TLR4-MyD88-p65通路的激活。随后,siRNA诱导的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的选择性基因消融消除了KLF4的这些作用。总之,我们的研究结果提示,KLF4通过激活PPARγ途径,抑制胆固醇摄取和合成,加速胆固醇流出,同时抑制促炎因子分泌、巨噬细胞黏附和胆固醇损伤诱导的巨噬细胞标志物表达,从而在VSMCs中实现对胆固醇刺激的保护作用。

冠心病患者血清Krüppel样因子5和7表达水平及其与冠脉病变程度关系研究

目的:探究冠心病(CAD)患者血清Krüppel样因子5(KLF5)和Krüppel样因子7(KLF7)表达水平及其与冠脉病变程度的关系。方法:选取进行冠脉造影检查的CAD患者183例,根据冠脉造影结果分为CAD组(98例)和对照组(85例),又根据Genisini评分将CAD患者分为轻度病变组(56例)和重度病变组(42例)。酶联免疫吸附法(ELISA)检测患者肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、C-反应蛋白(CRP)、KLF5、KLF7水平。全自动生化仪检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、肌酐(Cr)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、血尿酸(BUA)、三酰甘油(TG)以及总胆固醇(TC)水平。Pearson法分析重度病变组KLF5、KLF7水平的相关性。受试者工作特征(ROC)曲线分析KLF5、KLF7对CAD患者发生重度病变的诊断价值。结果:CAD组血清TNF-α、CRP、BUA、LDL-C、TG、TC、Cr、KLF5、KLF7表达高于对照组,HDL-C水平低于对照组(均P<0.05)。重度病变组BUA、Cr、KLF5、KLF7水平高于轻度病变组(均P<0.05)。KLF5、KLF7水平高是CAD患者发生重度冠脉病变的独立危险因素(均P<0.05)。重度病变组KLF5和KLF7水平呈正相关(r=0.427,P=0.000)。血清KLF5、KLF7诊断CAD患者发生重度病变的曲线下面积(AUC)分别为0.823、0.810,两者联合诊断的AUC为0.907,优于各自单独诊断(均P<0.05)。结论:CAD患者血清KLF5、KLF7水平越高,冠脉病变程度越高,两者诊断CAD患者发生重度病变具有较高的价值。

Krüppel样转录因子8与乳腺癌他莫昔芬耐药的相关性

目的:探讨Krüppel样转录因子8(KLF8)与乳腺癌他莫昔芬(TAM)耐药及预后的相关性。方法:利用公共数据库分析KLF8 mRNA在TAM敏感与耐药细胞中的表达差异及KLF8 mRNA对接受TAM治疗乳腺癌患者预后的影响。运用RT-PCR及Western印迹方法检测MCF-7与LCC2细胞中KLF8 mRNA及蛋白表达差异,免疫组化检测97例Luminal A/B亚型接受TAM治疗乳腺癌中KLF8表达情况并分析其与预后的关系,运用CCK-8试剂盒检测沉默及过表达KLF8后在不同浓度TAM作用下细胞增殖变化。结果:TAM耐药细胞中KLF8表达水平高于TAM敏感细胞,接受TAM治疗Luminal A/B亚型乳腺癌患者中,KLF8高表达者预后差,过表达KLF8后细胞对TAM耐药性增强,而沉默KLF8后细胞对TAM耐药性减弱。结论:KLF8高表达与乳腺癌TAM耐药正相关,在Luminal A/B亚型的乳腺癌中,KLF8高表达TAM治疗效果差,KLF8或可成为TAM疗效判断及逆转耐药的新靶点。

血清Krüppel样因子2和血管紧张素Ⅱ受体样1内源性配体13对血液透析患者自体动静脉内瘘狭窄的预测价值

目的探讨血清Krüppel样因子2(KLF2)、血管紧张素Ⅱ受体样1内源性配体13(Apelin-13)水平对血液透析患者自体动静脉内瘘(AVF)狭窄的预测价值。方法选取2018年6月至2022年12月山东省济南市人民医院收治的214例以AVF为血管通路的血液透析患者为血液透析组,另选取同期53例体检健康者为对照组。血液透析组患者根据是否伴有AVF狭窄分为狭窄组(37例)和非狭窄组(177例)。记录患者临床资料,采用酶联免疫吸附试验法检测血清KLF2、Apelin-13水平。通过多因素Logistic回归方法分析血液透析患者AVF狭窄的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清KLF2、Apelin-13水平对血液透析患者AVF狭窄的预测价值。结果血液透析组血清KLF2、Apelin-13水平均低于对照组(均P<0.001)。狭窄组年龄、透析龄、透析中低血压比例、超滤率、低密度脂蛋白胆固醇水平均大于/长于/高于非狭窄组,体重指数、收缩压、KLF2、Apelin-13水平均低于非狭窄组(均P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,透析龄延长、透析中低血压、超滤率增加为血液透析患者AVF狭窄的独立危险因素,体重指数增加、KLF2升高、Apelin-13升高为独立保护因素(均P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清KLF2、Apelin-13单独与联合预测血液透析患者AVF狭窄的曲线下面积分别为0.797、0.794、0.907,敏感度分别为54.05%、100.00%、91.89%,特异度分别为92.66%、50.85%、83.05%。结论血清KLF2、Apelin-13水平降低与血液透析患者AVF狭窄密切相关,可作为AVF狭窄的辅助预测指标。

腺苷A2a受体/Krüppel样因子5对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响

目的:探讨腺苷A2a受体/Krüppel样因子5(KLF5)对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响。方法:42只250~300 g雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组,n=6)、缺血再灌注组(I/R组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体特异性激动剂CGS21680组(I/R+CGS组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体拮抗剂ZM241385组(I/R+ZM组,n=12)。采用结扎左冠状动脉前降支再灌注的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。I/R+CGS组于再灌注前5 min静脉注射CGS21680后持续泵注60 min,CGS+ZM组于再灌注前5 min静脉注射ZM241385。于造模前,缺血5 min,再灌注10 min、45 min及120 min时分别记录各组大鼠的心率(HR)、平均动脉压(MAP)以及心率与收缩压乘积(RPP)。再灌注结束后取血液,酶联免疫吸附测定法检测血清心肌钙蛋白I(c TnI)和成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平。再灌注结束后再次结扎左冠状动脉前降支,采用TTC染色法确定心肌梗死面积。处死大鼠,采用Western blot法检测缺血区心肌组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和KLF5的蛋白表达水平。结果:各组造模前、Sham组各时间点HR、MAP及RPP差异无统计学意义。与Sham组比较,I/R组缺血5 min时HR、MAP及RPP降低;与I/R组比较,I/R+CGS组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP降低,I/R+ZM组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP升高(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积增大,血清cTnI水平升高,FGF21水平降低;与I/R组比较,I/R+CGS组心肌梗死面积减小,血清cTnI水平降低,FGF21水平升高,I/R+ZM组心肌梗死面积增大,血清c TnI水平升高,FGF21水平降低(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高;与I/R组相比,I/R+CGS组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显降低,I/R+ZM组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论:激活腺苷A2a受体可抑制缺血心肌细胞中KLF5表达,降低心肌梗死再灌注损伤程度,缓解心肌细胞缺氧状态,促进心肌细胞损伤后修复,对缺血再灌注损伤大鼠心肌起保护作用。

Krüppel样因子7促进创伤性颅脑损伤时JAK2/STAT3信号通路的活化和抑制神经元凋亡

目的 探讨Krüppel样因子7(KLF7)在创伤性颅脑损伤(TBI)后海马区细胞凋亡和神经功能障碍的保护作用及调控机制。方法 应用控制性皮质撞击(CCI)法建立小鼠TBI模型,侧脑室注射KLF7慢病毒(AAV-KLF7)过表达KLF7,Western bolt和实时荧光定量PCR检测小鼠海马内KLF7表达变化,Western bolt检测海马组织细胞凋亡因子、JAK2/STAT3信号通路关键因子及其磷酸化水平,TUNEL法检测海马组织神经元凋亡情况,甲酚紫染色检测各组动物大脑皮质损伤体积,神经功能评分和旋转杆实验检测神经功能障碍改变。结果 TBI后1 d,海马区KLF7蛋白和mRNA表达显著增高,3 d后恢复正常。TBI海马区Bax和Cleaved Caspase-3(C-Cas-3)水平、TUNEL阳性细胞百分比、脑皮质损伤体积百分比、p-STAT3/t-STAT3和p-JAK2/t-JAK2比值显著增加,Bcl-2水平显著降低,神经功能评分和旋转杆上运动时间均显著降低;侧脑室注射AAV-KLF7可促进TBI诱导的p-STAT3/t-STAT3和p-JAK2/t-JAK2比值增加,抑制TBI诱导的Bax和C-Cas-3水平增加。结论 KLF7可通过促进TBI对JAK2/STAT3信号通路的活化,减少TBI所致的神经元凋亡。

Krüppel样转录因子12在结直肠癌患者肿瘤组织和血清中的表达及其意义

目的:检测Krüppel样转录因子12(KLF12)蛋白在结直肠癌患者肿瘤组织和血清中的表达,并探讨其临床价值。方法:选择120例结直肠癌手术患者作为研究对象(病例组),收集结直肠癌组织和癌旁组织的石蜡标本,选择体检正常者100人作为对照组。免疫组织化学染色检测结直肠癌组织和癌旁肠组织中KLF12、nm23、周期素E1(CyclinE1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白的表达情况;ELISA法检测手术前和术后1个月时患者血清中KLF12水平并检测对照组受试者血清中KLF12水平。结果:结直肠癌组织中KLF12、CyclinE1、MMP-2和MMP-9蛋白阳性表达率高于癌旁组织(χ2=66.155,52.795,64.515,52.632;P<0.001),nm23蛋白阳性表达率低于癌旁组织(χ2=13.019,P<0.001)。Spearman相关分析,结直肠癌组织中KLF12蛋白与MMP-2和MMP-9蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.396 3,P<0.001;r=0.326 4,P<0.001),与nm23蛋白表达水平呈负相关关系(r=-0.227 3,P=0.013)。病例组结直肠癌患者手术前血清中KLF12蛋白表达水平高于对照组,血清中KLF12蛋白表达水平受试者工作特征曲线(ROC)的最佳cut-off值为3.795μg·L^(-1),曲线下面积为0.834,其对诊断结直肠癌的敏感度和特异度分别为60.8%和94.0%。病例组结直肠癌患者手术后血清中KLF12蛋白表达水平降低,但仍高于对照组(t=2.708,P=0.007);结直肠癌组织中KLF12蛋白表达水平与血清中KLF12蛋白表达水平呈正相关关系(r=0.406 9,P<0.001)。淋巴结转移程度为N3的(N3组)患者血清中KLF12水平最高,N0组患者最低(F=21.731,P<0.001)。结论:KLF12蛋白可能参与了结直肠癌的侵袭转移,检测患者血清中KLF12蛋白表达水平可能对判断病情和预测淋巴结转移有价值。

Krüppel样因子4在肿瘤相关巨噬细胞极化中的作用机制研究进展

Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)是一种参与细胞生长与分化的核转录因子,在人体中具有促进和抑制基因活化的双向作用。近年来,有大量的研究表明KLF4在M2型巨噬细胞中的表达远高于M1型巨噬细胞,是肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage,TAM)极化的关键调节因子,且研究表明KLF4可通过白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)相关信号通路等多种途径参与TAM细胞表型分化。鉴于TAM在肿瘤的发生发展、转移和耐药性中发挥重要的调控作用,进一步深入研究KLF4对TAMs活化的分子调控机制,有望成为癌症治疗的潜在干预靶点。

采用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达对C_2C_(12)细胞基因表达谱的影响

目的采用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达对C2C12细胞中基因表达谱的影响。方法用cDNA芯片检测Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中基因表达谱的改变(以空载体细胞为对照);用MEDLINE、Genomatix等生物信息学数据库和分析软件对在Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中表达发生改变的已命名基因进行功能和细胞信号通路分析。结果采用cDNA芯片筛选到在Krüppel样因子4过表达的C2C12细胞中表达发生改变的基因605个;其中下调的基因为250个,已命名基因为155个;上调的基因为355个,已命名基因为255个;其中包含多个炎症相关基因和凋亡相关基因。上述炎症相关基因属于13条细胞信号通路,凋亡相关基因属于9条细胞信号通路。结论Krüppel样因子4过表达能够引起C2C12细胞中多个下游基因表达发生改变。

肺腺癌中Krüppel样因子7的表达及与患者临床特征和预后的相关性

目的探讨肺腺癌中Krüppel样因子7(KLF7)的表达及与患者临床特征和预后的相关性。方法分析80例肺腺癌患者肺腺癌组织中的KLF7表达情况,根据KLF7表达情况分为KLF7高表达组(54例)和KLF7低表达组(26例),比较KLF7高表达组与KLF7低表达组患者的临床特征,分析KLF7表达与临床特征及预后的相关性。结果80例肺腺癌患者无病生存率为70.00%(56/80),总生存率为77.50%(62/80)。KLF7高表达组与KLF7低表达组患者年龄、分化程度、胸膜侵犯情况、组织学亚型、大体类型比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05);KLF7高表达组与KLF7低表达组患者吸烟情况、肿瘤体积、淋巴结转移情况、TNM分期比较,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。Spearman相关分析结果显示,KLF7表达与吸烟、肿瘤体积、淋巴结转移、TNM分期均呈正相关,与无病生存率和总生存率均呈负相关(P﹤0.01)。结论KLF7表达与肺腺癌的发生、发展及预后存在一定关联,临床可根据肺腺癌患者的KLF7表达情况,判断其病情进展情况,并预测其预后,以便临床及时帮助患者制订针对性的治疗方案,进而达到提高患者临床治疗效果的目的。

Krüppel样因子4在实验性肺纤维化小鼠肺组织中的表达及意义

目的探讨博莱霉素诱导小鼠肺纤维化模型中,Krüppel样因子4(KLF4)的表达及其意义。方法 C57BL/6小鼠随机分为生理盐水对照组(Control)和博莱霉素组(BLM),经气管内注入博莱霉素(2.5 mg/kg)建立实验性小鼠肺纤维化模型,注入等量生理盐水作为对照组,分别于术后第12 h、1 d、2 d、3 d、7 d、14 d及28 d取材,采用HE染色和Masson染色观察肺组织病理变化及胶原的沉积部位和数量,实时定量PCR法和免疫组织化学法分别检测各组肺组织中KLF4 mRNA和蛋白表达水平。结果博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化过程中,第1、2及3 d表现为急性炎症;第7 d炎症加重,并出现胶原沉积;第14 d肺泡结构塌陷,胶原沉积明显;第28 d肺泡结构基本正常,炎症程度和胶原沉积较轻。与对照组相比,博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4 mRNA的表达水平第1 d开始升高,而后降低,第3 d达最低后逐渐升高直至第28 d。博莱霉素组小鼠肺组织中KLF4蛋白的表达趋势与mRNA水平基本一致,第1 d开始升高,而后降低,第3 d达最低后逐渐增加至第14 d后再次降低。结论 KLF4在博莱霉素致肺纤维化过程中呈现明显的动态变化,并可能参与了肺纤维化的发生与发展。

Sp1/Krüppel样因子的研究进展

Sp1/Krüppel样因子(Sp1-like and Krüppel-like factors,Sp1/KLFs)是一组与真核细胞转录调控密切相关的锌指蛋白。Sp1/KLFs的羧基末端高度保守,含有3个串联的Cys2His2锌指结构,用于结合DNA;其氨基末端在不同的家族成员间存在较大差异,主要是通过结合辅助因子发挥转录调控作用。Sp1/KLFs的表达具有组织、细胞分布以及发育时期的特异性,它们通过调控多种富含GC或CACCC的启动子的基因的表达,参与细胞增殖、分化、凋亡和肿瘤发生、发展等多种生理、病理过程。文章综述了Sp1/KLFs的结构特征、作用机制及生物学功能。

猪脂肪源间充质干细胞诱导成脂分化及Krüppel样因子2的表达

目的旨在阐明猪脂肪源间充质干细胞(AMSCs)在诱导成脂分化过程中Krüppel样因子2(KLF2)的表达模式。方法采用I型胶原酶消化法处理猪脂肪组织,经原代和传代培养分离、纯化和扩增AMSCs,用流式细胞仪检测AMSCs纯度,在倒置显微镜下用形态学和油红O染色法检测AMSCs的成脂分化,用实时定量PCR检测KLF2的表达模式,并与过氧化物酶体增殖物激活受体2(PPARγ2)的表达进行了比较。结果分离、纯化的AMSCs,其间充质干细胞表面抗原CD29、CD44和CD105表达量分别为91.7%、95.1%和95.6%,而造血干细胞表面抗原CD34表达量仅为3.39%;在诱导分化2d后,个别细胞质中出现小脂滴,且含脂滴的细胞数量和脂滴量随诱导时间的延长而增加,在诱导分化第18天成脂分化率达48.2%;在诱导分化第2天、第8天和第16天,KLF2的表达量分别为1.84±0.206、1.07±0.072和0.83±0.095,而PPARγ2 mRNA的表达量分别为3.06±0.542、13.22±0.5736和15.11±1.073。结论获得纯度较高的AMSCs,具有良好的成脂分化潜能,KLF2的表达量在成脂分化早期的前脂肪细胞阶段增加,成脂分化开始后逐步减少,KLF2作为脂肪分化负调控转录因子而发挥作用。

姜黄素对猪脂肪间充质干细胞成脂分化及Krüppel样因子2表达的影响

目的探讨姜黄素对猪脂肪间充质干细胞(AMSCs)成脂分化的影响,及姜黄素调控成脂分化的机制。方法用不同浓度姜黄素处理猪AMSCs,用MTT比色法检测姜黄素对猪AMSCs增殖的影响,用油红O染色提取法检测对成脂分化的程度,用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测对Krüppel样因子(KLF2)和过氧化物酶增殖物激活受体γ(PPARγ)2 mRNA表达的影响。结果当姜黄素浓度为1、5、10μmol/L用于猪AMSCs时对,AMSCs增殖无明显影响,但高于15μmol/L时,则具有显著的抑制作用(P<0.05);当姜黄素用于猪AMSCs的成脂诱导分化时,1~30μmol/L的浓度即能显著抑制成脂分化(P<0.05),其中25μmol/L浓度获得68.19%的高抑制率;当25μmol/L姜黄素用于检测KLF2和PPARγ2 mRNA的表达,诱导分化2、8和16d的KLF2 mRNA的表达上调率分别达到48.37%、20.56%和9.64%,而PPARγ2 mRNA的表达下调率分别达到16.01%、35.93%和27.27%。结论姜黄素具有抑制猪AMSCs增殖和成脂分化作用,该抑制作用与姜黄素促进KLF2 mRNA的表达和抑制PPARγ2 mRNA的表达相关。

Krüppel样因子7(KLF7)生物学功能研究进展

Krüppel样因子7(Krüppel-like factor 7,KLF7)是Sp1样或Krüppel样转录因子家族(specificity protein/Krüppel-like factor,SP/KLF)成员,在多种生物学过程中发挥重要作用,该基因完全敲除小鼠出生时大部分死亡.KLF7是肥胖症、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病、癌症、面部发育异常、氧化磷酸化缺陷和Ⅰ型自身免疫性胰腺炎等疾病的相关基因.功能分析显示,KLF7是神经系统发育和脂肪形成的关键因子,同时也在肌肉再生和造血作用中发挥功能.在SP/KLF家族中,KLF7研究相对较少,大部分作用机制尚不清楚.本文从结构和功能方面详述了KLF7的最新研究进展,为其和KLFs家族深入研究提供重要的科学依据.

结直肠癌组织中Krüppel样因子17的表达及其与预后的关系

目的研究Krüppel样因子17(Krüppel-like factor 17,KLF17)在结直肠癌组织中的表达及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集武汉市第一医院128例结直肠癌患者的临床病理资料,采用免疫组织化学法检测KLF17在结直肠癌及对应的非癌结直肠黏膜组织中的表达,Kaplan-Meier法绘制生存曲线,Cox比例风险模型进行生存分析。结果 128例结直肠癌中,83例癌组织存在KLF17低表达。KLF17低表达与结直肠癌患者淋巴结转移相关(P=0.012)。KLF17低表达患者5年无病生存率及总生存率分别为46.3%和49.3%,明显低于KLF17高表达患者的78.3%和82.0%(P均=0.001)。Cox模型分析结果显示:KLF17、术前肠梗阻、肿瘤分化程度和病理学N分期是结直肠癌患者无病生存时间及总生存时间的独立预后因素(P均<0.05)。结论 KLF17低表达与结直肠癌淋巴结转移相关,是结直肠癌患者预后不良的一个潜在分子指标。

Krüppel样转录因子8(KLF8)的结构及功能

Krüppel样转录因子8(Krüppel-like factor 8,KLF8)是KLFs家族中的一员.KLF8在羧基端含有3个保守的C2H2锌指结构域,用于与DNA结合.KLF8的转录受粘着斑激酶(focal adhesionkinase,FAK)、KLF1(erythroid krüppel-like factor1)、KLF3(basic Krüppel-like factor)的调控.类泛素化是KLF8翻译后主要的修饰方式.KLF8在氨基端含有特定的PVALS/T基序,与辅助抑制因子C末端结合蛋白(C-terminal binding protein,CtBP)相互作用,抑制调节区含CACCC元件的基因表达.此外,还可以通过招募辅助激活因子p300和p300/CBP相关因子(P/CAF)辅助激活靶基因的表达.同时,KLF8在细胞周期循环、细胞侵袭和上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)、细胞致癌性转化及肿瘤发生发展中发挥作用.

Krüppel样因子4基因干扰对RAW264.7细胞凋亡和吞噬的影响

目的应用RNA干扰技术沉默小鼠RAW264.7巨噬细胞Krüppel样因子4(KLF4)基因,建立稳定干扰细胞株,观察其对细胞增殖、凋亡和吞噬活性的影响。方法针对小鼠KLF4基因设计合成重组KLF4 shRNA质粒,脂质体法将重组质粒转染至RAW264.7细胞,经G418筛选后获得稳定表达细胞株。Western blot法检测细胞中KLF4蛋白的表达;CCK-8法检测细胞增殖活性;AnnexinV-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡情况;荧光素标记的大肠杆菌结合流式细胞仪检测细胞的吞噬活性。结果 KLF4 shRNA能明显抑制RAW264.7细胞的KLF4蛋白的表达,抑制率76%以上;从第3天开始,shKLF4组细胞的生长速度明显低于NC组(转染阴性质粒pGPU6/GFP/Neo-NC)(P<0.05);WT组(野生型RAW264.7)、NC组和shKLF4组的细胞凋亡率分别为:1.73%、6.85%和12.76%,shKLF4组明显高于NC组(P<0.05);各组细胞的平均荧光强度分别为:WT组(122.0±2.80)、NC组(48.97±5.69)和shKLF4组(80.10±4.61),与NC组相比,shKLF4组的细胞吞噬活性明显增高(P<0.05)。结论成功构建了稳定干扰KLF4基因表达的RAW264.7巨噬细胞株,KLF4下调能够明显抑制RAW264.7细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞的吞噬活性。

短暂缺血再灌注对大鼠心肌Krppel样因子4表达的影响

目的观察大鼠心肌短暂缺血再灌注及相应的细胞氧化应激反应对Krppel样因子4表达的影响。方法采用短时间结扎及松解左冠状动脉前降支法构建大鼠心肌短暂缺血再灌注动物模型;采用过氧化氢(1mmol/L)处理C2C12肌原细胞法复制相应的氧化应激细胞模型;采用逆转录聚合酶链反应检测Krppel样因子4mR-NA的表达;采用蛋白免疫印迹法检测Krppel样因子4蛋白的表达。结果短暂缺血再灌注后,大鼠心肌组织中Krppel样因子4mRNA的水平明显增加;过氧化氢处理C2C12肌原细胞后,Krppel样因子4mRNA和蛋白的水平均明显增加。结论大鼠心肌短暂缺血再灌注及相应的细胞氧化应激反应均能显著诱导Krppel样因子4的高表达。