急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

腺苷A2a受体/Krüppel样因子5对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响

目的:探讨腺苷A2a受体/Krüppel样因子5(KLF5)对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响。方法:42只250~300 g雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组,n=6)、缺血再灌注组(I/R组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体特异性激动剂CGS21680组(I/R+CGS组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体拮抗剂ZM241385组(I/R+ZM组,n=12)。采用结扎左冠状动脉前降支再灌注的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。I/R+CGS组于再灌注前5 min静脉注射CGS21680后持续泵注60 min,CGS+ZM组于再灌注前5 min静脉注射ZM241385。于造模前,缺血5 min,再灌注10 min、45 min及120 min时分别记录各组大鼠的心率(HR)、平均动脉压(MAP)以及心率与收缩压乘积(RPP)。再灌注结束后取血液,酶联免疫吸附测定法检测血清心肌钙蛋白I(c TnI)和成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平。再灌注结束后再次结扎左冠状动脉前降支,采用TTC染色法确定心肌梗死面积。处死大鼠,采用Western blot法检测缺血区心肌组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和KLF5的蛋白表达水平。结果:各组造模前、Sham组各时间点HR、MAP及RPP差异无统计学意义。与Sham组比较,I/R组缺血5 min时HR、MAP及RPP降低;与I/R组比较,I/R+CGS组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP降低,I/R+ZM组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP升高(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积增大,血清cTnI水平升高,FGF21水平降低;与I/R组比较,I/R+CGS组心肌梗死面积减小,血清cTnI水平降低,FGF21水平升高,I/R+ZM组心肌梗死面积增大,血清c TnI水平升高,FGF21水平降低(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高;与I/R组相比,I/R+CGS组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显降低,I/R+ZM组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论:激活腺苷A2a受体可抑制缺血心肌细胞中KLF5表达,降低心肌梗死再灌注损伤程度,缓解心肌细胞缺氧状态,促进心肌细胞损伤后修复,对缺血再灌注损伤大鼠心肌起保护作用。

Krüppel样因子5和肿瘤坏死因子受体超家族成员11a在宫颈癌组织及细胞中的表达及其作用

目的探讨Krüppel样因子5(KLF5)和肿瘤坏死因子受体超家族成员11a(TNFRSF11a)在宫颈癌组织中的表达及对宫颈癌细胞增殖、迁移和侵袭的作用。方法利用基因芯片筛查宫颈组织中细胞应答炎症反应的相关基因mRNA的表达。采用实时荧光定量PCR对芯片检测的结果进行验证。免疫双荧光染色检测宫颈组织中KLF5和TNFRSF11a的共表达。在人宫颈癌He La细胞中,采用脂质体转染特异性小分子干扰RNA分别敲低KLF5和TNFRSF11a的表达,构建KLF5超表达腺病毒,感染细胞过表达KLF5。Western blot检测细胞内相关蛋白水平变化。采用双荧光素酶报告基因检测转录因子KLF5对TNFRSF11a的表达调控作用。CCK8和Transwell实验检测细胞增殖和迁移侵袭情况。临床分析TNFRSF11a的mRNA表达与宫颈癌临床病理参数的关系。结果基因芯片结果证实宫颈鳞癌组织中基因TNFRSF11a、KLF5较正常宫颈组织表达上调(P=0.002,P=0.045),实时荧光定量PCR结果证实与正常宫颈组织相比,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈鳞癌组织中KLF5和TNFRSF11a的mRNA表达结果均上调(KLF5:F=32.79,P=0.018,P=0.014,P=0.011;TNFRSF11a:F=36.72,P=0.013,P=0.010,P=0.009)。免疫双荧光染色结果证实与正常宫颈组织相比,CINⅠ、CINⅡ-Ⅲ、宫颈鳞癌组织中KLF5和TNFRSF11a的蛋白表达结果均上调(KLF5:F=42.38,P=0.014,P=0.008,P=0.002;TNFRSF11a:F=35.42,P=0.021,P=0.012,P=0.004)。体外实验证实KLF5靶向调控TNFRSF11a的表达并促进宫颈癌细胞的增殖和迁移侵袭。临床分析显示TNFRSF11a的mRNA表达与肿瘤病理分级、临床分期、肌层浸润深度、淋巴结转移正相关(P<0.05)。结论 KLF5和TNFRSF11a与宫颈癌相关;KLF5通过上调TNFRSF11a的表达促进宫颈癌细胞的增殖和侵袭、转移。

微小RNA-135a-5p和Krüppel样因子16在胃腺癌中的表达及靶向关系研究

目的:检测微小RNA-135a-5p(miR-135a-5p)和Krüppel样因子16(KLF16)在胃腺癌中的表达,分析两者的靶向关系。方法:收集胃腺癌并行手术治疗的患者45例,留取术后肿瘤组织和正常胃黏膜组织。选择胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901和正常胃细胞株GES-1进行培养及相关实验。基于MGC-803细胞株建立si-KLF16组、miR-135a-5p mimic组,并设立无关序列组。应用免疫组化染色检测KLF16蛋白表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-135a-5p、KLF16 mRNA的表达。采用双荧光素酶报告基因实验,构建含有野生型KLF16的质粒(WT-KLF16)和突变型KLF16的质粒(MT-KLF16),分别与miR-135a-5p mimic、miR-135a-5p空白对照组(NC)进行共转染,验证miR-135a-5p和KLF16的靶向关系。结果:胃腺癌组织中miR-135a-5p表达量明显低于正常胃黏膜组织,KLF16阳性率明显高于正常胃黏膜组织(均P<0.05)。不同肿瘤最大径和浸润深度胃腺癌患者miR-135a-5p相对表达量及KLF16阳性率比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。线性相关分析显示,miR-135a-5p表达与KLF16阳性呈负相关(R=-0.623,P<0.05)。胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901细胞株miR-135a-5p表达明显低于正常胃GES-1细胞株,KLF16 mRNA表达明显高于GES-1细胞株(均P<0.05)。si-KLF16组中miR-135a-5p表达明显高于无关序列组(P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-135a-5p mimic+WT-KLF16与NC+WT-KLF16、miR-135a-5p mimic+MT-KLF16、NC+MT-KLF16比较,相对荧光素酶活性明显下降(均P<0.05),提示miR-135a-5p和KLF16具有靶向关系。结论:胃腺癌miR-135a-5p低表达,KLF16高表达,它们都参与肿瘤的形成和进展,且具有靶向关系。

Krüppel样转录因子8(KLF8)的结构及功能

Krüppel样转录因子8(Krüppel-like factor 8,KLF8)是KLFs家族中的一员.KLF8在羧基端含有3个保守的C2H2锌指结构域,用于与DNA结合.KLF8的转录受粘着斑激酶(focal adhesionkinase,FAK)、KLF1(erythroid krüppel-like factor1)、KLF3(basic Krüppel-like factor)的调控.类泛素化是KLF8翻译后主要的修饰方式.KLF8在氨基端含有特定的PVALS/T基序,与辅助抑制因子C末端结合蛋白(C-terminal binding protein,CtBP)相互作用,抑制调节区含CACCC元件的基因表达.此外,还可以通过招募辅助激活因子p300和p300/CBP相关因子(P/CAF)辅助激活靶基因的表达.同时,KLF8在细胞周期循环、细胞侵袭和上皮-间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)、细胞致癌性转化及肿瘤发生发展中发挥作用.

Krüppel样因子7(KLF7)生物学功能研究进展

Krüppel样因子7(Krüppel-like factor 7,KLF7)是Sp1样或Krüppel样转录因子家族(specificity protein/Krüppel-like factor,SP/KLF)成员,在多种生物学过程中发挥重要作用,该基因完全敲除小鼠出生时大部分死亡.KLF7是肥胖症、Ⅱ型糖尿病、心血管疾病、癌症、面部发育异常、氧化磷酸化缺陷和Ⅰ型自身免疫性胰腺炎等疾病的相关基因.功能分析显示,KLF7是神经系统发育和脂肪形成的关键因子,同时也在肌肉再生和造血作用中发挥功能.在SP/KLF家族中,KLF7研究相对较少,大部分作用机制尚不清楚.本文从结构和功能方面详述了KLF7的最新研究进展,为其和KLFs家族深入研究提供重要的科学依据.

Krüppel样因子5在心血管重构中的作用

Krüppel样因子(KLF)5是心血管系统、消化系统、呼吸系统、血液和免疫系统相关疾病的重要调节因子。KLF5通过调节内皮细胞、血管平滑肌细胞、心肌细胞中一系列功能相关基因和多条信号通路,在心血管重构的病理生理过程中发挥重要作用。

敲低Krüppel样因子4(KLF4)促进RAW264.7巨噬细胞向M1型极化

目的研究敲低Krüppel样因子4(KLF4)基因对RAW264.7巨噬细胞极化的影响。方法采用RNA干涉技术(RNAi)构建敲低KLF4的慢病毒载体,转染RAW264.7巨噬细胞获得KLF4基因沉默的稳定细胞株。采用白细胞介素4(IL-4)刺激野生型、KLF4敲低组和阴性对照组巨噬细胞,反转录PCR检测细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及精氨酸酶1(Arg1)、IL-10、转化生长因子β(TGF-β)的mRNA水平,免疫细胞化学染色检测和定位巨噬细胞iNOS及Arg1蛋白。结果敲低KLF4基因后,RAW264.7细胞的iNOS、IL-1β的mRNA含量明显增高,而TNF-α、Arg1、IL-10及TGF-β的mRNA含量则明显降低;IL-4处理野生型RAW264.7细胞后KLF4、Arg1、IL-10及TGF-β的mRNA的表达增加,iNOS、IL-1β及TNF-αmRNA的表达减少;IL-4处理敲低KLF4的细胞,其iNOS、IL-1β及TNF-αmRNA含量低于野生型组,但高于阴性对照组,而Arg1、IL-10及TGF-βmRNA含量较高于野生型组,而Arg1及IL-10低于阴性对照组;IL-4处理敲低KLF4细胞12h后,与野生型细胞相比,iNOS蛋白表达显著减少,而Arg1的蛋白的表达则明显增加。结论敲低KLF4促进RAW264.7巨噬细胞向M1型极化、抑制巨噬细胞向M2型极化。

老年结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达变化和意义

目的探讨染色体凝缩蛋白复合物I(NCAP)D2、Krüppel样因子(KLF)5蛋白及跨膜受体蛋白Notch1 mRNA对老年结肠癌患者预后的预测价值。方法选取老年结肠癌患者85例,术中采集肿瘤组织和正常组织(距离肿瘤组织5 cm以上),Western印迹检测组织标本中NCAPD2、KLF5蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本中Notch1 mRNA表达。收集老年结肠癌患者的人口学特征和临床病理资料;以患者出院时日期为随访起点,进行3年随访,记录患者生存情况,分为预后良好组(生存),不良组(死亡)。结果老年结肠癌患者结肠癌组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于正常组织(P<0.01)。NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平在不同病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、远端转移情况的结肠癌患者差异均有统计学意义(P<0.01);其中,浸润程度T3~T4、有淋巴结转移、有远端转移的结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于浸润程度T1~T2、无淋巴结转移、无远端转移的结肠癌患者(P<0.01);随着分化程度的降低,结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01)。不良组NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于预后良好组(P<0.01)。构建受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平对老年结肠癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.01);各指标联合检测对老年结肠癌患者预后的预测价值最高。结论老年结肠癌患者肿瘤组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA高表达,且与浸润程度、分化程度及转移情况密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

Krüpple样因子5在成牙本质细胞中的表达及临床意义

目的 :研究转录因子Krüpple样因子5(Krüpple-like factor 5,KLF5)在人牙髓-牙本质复合体中的表达,探讨其在成牙本质细胞分化及牙本质形成过程中的作用。方法:应用免疫组织化学方法检测KLF5在人牙髓-牙本质复合体中及牙髓细胞矿化诱导过程中的表达,Western印迹法检测KLF5在成牙本质细胞分化过程中的表达变化。采用SPSS17.0软件包对实验结果进行单因素方差分析和Tukey检验。结果 :在正常及龋坏牙中,KLF5表达于人成牙本质细胞和成牙本质样细胞,而在牙本质及前期牙本质中无表达。细胞免疫组织化学结果显示,在矿化诱导0、7、14 d的人牙髓细胞中,KLF5在细胞核中呈强阳性表达。Western印迹结果显示,随着矿化诱导时间的延长,KLF5蛋白表达量逐渐增加。诱导14~21 d时,KLF5表达量增加最显著。结论:KLF5可能参与成牙本质细胞分化及牙本质的形成过程。

HEK 293T细胞中TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式及其修饰位点的鉴定

目的:研究人胚肾293T(HEK 293T,简称293T)细胞中外源性肿瘤坏死因子受体相关因子(tumor necrosis factor receptor⁃associated factor 6,TRAF6)与Krüppel样因子5(Krüppel⁃like factor 5,KLF5)的结合及TRAF6多聚泛素化修饰KLF5的方式和修饰的位点。方法:将构建的Flag⁃TRAF6、HA⁃KLF5、泛素过表达质粒、shTRAF6小干扰质粒和TRAF6 C70A位点突变质粒行不同组合转染293T细胞48 h。用免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和免疫印迹(immunoblotting,IB)实验检查TRAF6与KLF5的结合以及KLF5 K63或K48多聚泛素化水平。此外,构建KLF5全部赖氨酸突变的质粒,分别与TRAF6质粒共转染293T细胞。用前述IP/IB检测KLF5 K63连接的多聚泛素化修饰,并确定KLF5 K63泛素化修饰的位点。结果:293T细胞中TRAF6能与KLF5结合;TRAF6过表达和基因沉默或TRA6酶活性缺失能相应上调或下调KLF5 K63的多聚泛素化;KLF5被TRAF6 K63多聚泛素化修饰的位点是其第99位和第100位的赖氨酸。结论:TRAF6能与KLF5相互作用,并对KLF5⁃K99和K100进行K63多聚泛素化修饰。

乳腺癌组织中eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)和5A2(eIF5A2)、Krüppel样因子4(KLF4)、Yes相关蛋白1(YAP1)的表达水平及临床意义。方法 :将接受手术治疗的乳腺癌组织50例作为观察组,同时选取50例癌旁正常组织作为对照组,检测两组eIF4E、eIF5A2、KLF4、YAP1的表达水平,分析其与乳腺癌病理特征的临床意义。结果 :观察组eIF4E、eIF5A2、YAP1阳性表达率均高于对照组(P <0.05),KLF4低于对照组(P <0.05);在临床分期Ⅰ~Ⅱ期及发生淋巴结转移的患者中,eIF4E、eIF5A2、YAP1高表达患者占比高于低表达(P <0.05),KLF4高表达患者占比低于低表达(P <0.05)。结论 :乳腺癌组织中,eIF4E、eIF5A2、YAP1水平呈高表达,KLF4水平呈低表达,是评估疾病进展的重要指标。

KLF5转录因子抑制TRAIL诱导PC-3前列腺癌细胞凋亡的分子机制

目的探究通过抑制KLF5表达促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞凋亡的分子机制。方法在TRAIL诱导下,使用MTT实验、流式细胞实验、Western blot及qRT-PCR检测KLF5敲低组与对照组的PC-3细胞在细胞活性、凋亡比例及凋亡相关标志物的表达。结果在PC-3细胞中抑制KLF5表达后,TRAIL诱导下的细胞凋亡明显增加,TRAIL受体DR4、DR5表达上升,凋亡抑制因子c-FLIP蛋白表达下调,但是其mRNA表达水平不变。结论抑制KLF5,可以通过上调TRAIL受体、下调c-FLIP蛋白表达的途径,促进TRAIL诱导的前列腺癌PC-3细胞的凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。使用小干扰RNA或小分子药物抑制KLF5表达,可能是潜在的激素非敏感前列腺癌治疗手段。

转录因子KLF 5在肿瘤中的研究进展

Krüppel样因子5(KLF 5)属于含锌指的转录因子家族,参与调控多种基因的表达,从而影响细胞的多种功能。如干细胞自我更新、细胞增殖、分化和凋亡。KLF 5作为一种重要的转录因子和潜在的药物靶点受到了越来越多的关注。在这篇综述中,我们阐述了KLF 5和KLF家族的特点及其在相关肿瘤中的研究进展。

Krüppel样因子4抑制高糖刺激MES-13细胞炎症的机制

目的:观察Krüppel样因子4(KLF4)在小鼠肾小球系膜细胞(MES-13细胞)中的表达。观察甲基化抑制剂5-氮杂胞苷(5-azacytidine,5-Az)对高糖刺激的MES-13细胞中KLF4、IL-6、MCP-1表达的影响。方法:常规培养MES-13细胞,经高糖(30 mmol/L)处理不同时间后,检测KLF4蛋白表达水平。将细胞分为低糖组、高渗组、高糖组、高糖+不同浓度5-Az组,检测KLF4、IL-6、MCP-1 mRNA和蛋白表达水平。慢病毒质粒转染细胞后,高糖处理0h、48h,检测KLF4、IL-6、MCP-1 mRNA表达。结果:高糖处理MES-13细胞后,KLF4蛋白表达于24 h开始下调,于48h时下调明显。高糖处理细胞48h后,KLF4 mRNA和蛋白表达明显下调,MCP-1、IL-6 mRNA和蛋白表达水平明显上调(P<0.01),加用5-Az(5μmol/L)干预后,KLF4 mRNA和蛋白表达水平明显上调,而IL-6、MCP-1mRNA和蛋白表达均较干预前下调。慢病毒质粒转染细胞后,KLF4 mRNA表达明显增加,IL-6、MCP-1 mRNA表达无明显变化。高糖处理转染细胞48h后,Lv-NC(hi)组与Lv-NC组相比,KLF4 mRNA表达水平明显下调,IL-6、MCP-1 mRNA表达水平明显上调。Lv-KLF4 (hi)组与Lv-NC (hi)组相比,KLF4 mRNA表达水平明显上调,IL-6、MCP-1 mRNA表达水平明显下调。结论:在MES-13细胞中存在KLF4表达,且高糖处理可使KLF4表达下调,IL-6、MCP-1表达上调。高糖引起的MES-13细胞炎症与KLF4低表达有关,恢复KLF4表达,可减轻细胞炎症,推测其机制部分与DNA甲基化相关。

Krüppel样转录因子2的功能

Krüppel样转录因子2(Krüppel-like transcription factor 2,KLF2)作为KLF家族(KLFs)中重要一员,高表达于血管内皮细胞,参与节血管张力、抗炎、抗血栓和血管形成/血管新生等重要过程,对维持血管稳态至关重要.对KLF家族、KLF2结构特点、KLF2的血流依赖性调节、KLF2在血管内皮以及非血管内皮的作用进行综述.

转录因子KLF5在恶性肿瘤发生中作用的研究进展

Krüppel样因子5(KLF5)是一种能与DNA结合的锌指转录调节因子,其在乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌和肺癌等多种恶性肿瘤中的作用具有环境依赖性。微RNA和长链非编码RNA可以调控KLF5的表达。同时KLF5也可以调控众多的下游靶基因的表达。本文主要介绍了KLF5在恶性肿瘤中的作用,也分析了在不同的细胞状态下通过调节KLF5蛋白的水平而影响下游基因表达的机制差异。深入研究这些差异性或能进一步揭示KLF5在肿瘤发生发展中的作用规律。

转录因子KLF5调控宫颈癌细胞上皮-间充质转化的分子机制

上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程。为了探究Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)调控宫颈癌细胞发生EMT过程的分子机制,首先在宫颈癌HeLa细胞瞬时转染Flag-KLF5质粒进行KLF5过表达,并通过MTT法、细胞划痕和Transwell实验证实,KLF5可以显著地抑制HeLa细胞的侵袭和迁移能力。然后采用Western-blot和实时定量PCR技术检测HeLa细胞中EMT相关基因的表达水平,结果显示E-cadherin表达升高,N-cadherin和MMP9表达降低;而且,E-cadherin基因的上游调控因子如SNAI1、SLUG、ZEB1/2和TWIST1等的mRNA表达下降。进一步开展对比研究,在SiHa细胞中用siRNA沉默KLF5基因,再次验证了KLF5对EMT相关基因表达水平的影响。随后构建不同长度的SNAI1启动子截短体,用荧光素酶报告基因实验检测KLF5对SNAI1启动子活性的影响,结果显示KLF5可以抑制SNAI1启动子区域的活性,并且在HeLa细胞中过表达SNAI1基因后,可显著地促进细胞的EMT过程。以上结果表明,KLF5可通过调控SNAI1基因的表达来调节宫颈癌细胞的EMT过程,进而抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。

KLF5与c-Jun相互作用促进Ang Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖

KLF5(Krüppel-like factor 5)是KLF家族转录因子中的成员,参与多种与增殖相关基因的转录调节.通过体外培养大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC),以AngⅡ为增殖诱导因素,研究KLF5介导VSMC增殖的机制.研究发现,AngⅡ可剂量依赖性诱导VSMC增殖,并伴有KLF5和c-Jun蛋白表达水平的升高.为了证实KLF5参与AngⅡ诱导的细胞增殖过程,用siRNA敲低内源性KLF5的表达后,发现细胞增殖活力受到明显的抑制;交互免疫沉淀和GST pulldown分析结果显示,KLF5与c-Jun在体内和体外存在物理学上的相互作用,并且AngⅡ可诱导二者之间的相互缔合.这些结果表明,KLF5通过与c-Jun相互作用进而介导AngⅡ诱导的VSMC增殖.

KLF5与NF-κB p50相互作用促进高糖诱导的血管平滑肌细胞炎症

目的探讨锌指转录因子Krüppel样因子5(Krüppel-like factor 5,KLF5)在高糖诱导的血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)炎症中的作用及机制。方法体外培养VSMCs,实时定量反转录聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)检测高糖对VSMCs炎症基因肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、KLF5和核因子κB p50(nuclear factorκB p50,NF-κB p50)表达的影响。用小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)内源性敲低KLF5,Western blot检测VSMCs中TNF-α的表达。免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CoIP)检测VSMCs中高糖对KLF5和NF-κB p50相互作用的影响。结果qRT-PCR和Western blot结果显示,在mRNA和蛋白质水平,高糖显著上调炎症基因TNF-α、KLF5和NF-κB p50的表达,呈剂量及时间依赖性(P<0.05)。用siRNA内源性敲低KLF5后,高糖不能上调炎症基因TNF-α的表达。CoIP结果显示,高糖显著增强KLF5和NF-κB p50的相互作用。结论 KLF5通过与NF-κB p50相互作用促进高糖诱导的VSMCs炎症。