人类新型Krppel类转录因子hBKLF的cDNA克垄、亚细胞定位及表达特征

人胎肝cDNA文库FLD4585克隆可能编码一种造血相关的转录因子，本文旨在从22周孕龄人胎肝中获得其编码基因的全长cDNA序列，分析其编码蛋白的功能域、基因组结构、染色体定位、亚细胞定位及表达谱特征。采用5′RACE方法获得FLD4585克隆全长；生物信息学方法确定hBKLF基因结构、染色体定位及功能域特征；GFP融合蛋白技术确定hBKLF亚细胞定位；Northern杂交、RT-PCR、Western印迹方法分析其表达谱。结果获得了Fld4585克隆编码的hBKLFcDNA全长序列，它含1810bp，编码345个氨基酸，与小鼠BKLF同源，C端含3个特征性C2H2结构的锌指，是KLF转录因子家族的新成员。HBKLF基因跨越33kb，含6个外显子和5个内含子，位于4号染色体4p15.2-p16.1。GFP-hBKLF融合蛋白在COS-7细胞中呈细小点状分布于核内，核仁区无分布。HBKLF含有两个转录本，大小为4.4kb-7.5kb和1.35kb-2.4kb。大转录本在成人及胎儿组织广泛表达，小转录本在外周血白细胞、肝脏和骨髓表达量最高，红系和粒系细胞均表达hBKLF。HBKLF表达量随肝脏发育成熟而下降，随红系、粒系成熟而升高。以上研究提示hBKLF可能是一种在体内广泛发挥作用的转录因子，在造血的调控中可能有重要作用。

亲环素A和Krüppel样转录因子2及内皮型一氧化氮合酶在大鼠动脉粥样硬化病变过程中的表达变化

目的观察大鼠动脉粥样硬化病变过程中血管壁亲环素A(Cy PA)、Krüppel样转录因子2(KLF2)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)的表达变化。方法将雄性Wistar大鼠32只按数字表法随机分为对照组及动脉粥样硬化8、12、15周组,每组8只。给予动脉粥样硬化组高脂饲料喂养,并给予维生素D3注射液60万IU/kg一次性腹腔注射;给予对照组大鼠基础饲料喂养。在喂养第8、12、15周时处死大鼠,分离腹主动脉,行苏木素-伊红染色,免疫组化法检测动脉壁CyPA、KLF2、eNOS的表达水平。结果随着动脉粥样硬化病变进展,对照组以及动脉粥样硬化8、12、15周组大鼠分别呈现出血管正常结构、内皮细胞破坏、平滑肌细胞增生、粥样斑块形成以及钙化斑块形成等不同的特征。对照组与动脉粥样硬化8、12、15周组间血管壁CyPA、KLF2、eNOS的表达水平差异均有统计学意义(CyPA:0.0037±0.0018、0.0276±0.0090、0.0526±0.0129、0.1080±0.0388;KLF2:0.0932±0.0331、0.0415±0.0076、0.0207±0.0059、0.0014±0.0003;eNOS:0.0358±0.0185、0.0148±0.0080、0.0049±0.0025、0.0037±0.0026;F值分别为36.395、42.108、21.255,均P<0.05),且组间CyPA的表达呈增高趋势,组间两两比较差异有统计学意义(均P<0.05);KLF2表达水平呈进行性下降趋势,组间两两比较差异有统计学意义(均P<0.05);eNOS表达动脉粥样硬化12周组与15周组差异无统计学意义,其他组间差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论伴随动脉粥样硬化病变进展,CyPA的表达进行性增高,KLF2、eNOS表达进行性下降。CyPA可能是致动脉粥样硬化病变的途径之一。

Krüppel样因子5在心血管疾病中的研究进展

心血管疾病是导致全球非感染性疾病死亡的首要原因,心血管疾病的发生给家庭和社会带来了极大的负担。Krü-ppel样因子(KLF)5是与DNA结合的转录因子,参与调节细胞发育、代谢等其他细胞机制。近年来研究发现,KLF5在心血管疾病如动脉粥样硬化、缺血再灌注、心肌肥厚、心肌代谢、糖尿病心肌病中的调控上也发挥了重要作用。我们综述了KLF5在心血管疾病中的研究进展,为以KLF5为靶点的心血管疾病治疗提供了新的策略。

KLF5转录因子对预测乳癌肺转移的临床意义

目的探讨Kruppel样因子5(KLF5)及其下游基因在乳癌组织中的表达,分析其与乳癌病理特点的相关性及在预测乳癌肺转移中的临床意义。方法应用免疫组织化学方法,检测乳癌肺转移乳癌组织(35例)、乳癌无肺转移乳癌组织(35例)、乳腺良性肿瘤组织(20例)及乳癌肺转移原发灶癌旁正常组织(20例)KLF5、肿瘤坏死因子-α诱导蛋白2(TNFAIP2)和β-连环蛋白(β-catenin)表达,分析各因子表达与乳癌肺转移病人临床病理特征间的关系,Kaplan-Meier生存分析模型分析各因子表达与乳癌病人5年无远处转移生存率(DFS)及总生存率(OS)的相关性,单因素卡方检验和多因素二元Logistic回归模型分析KLF5、TNFAIP2和β-catenin对乳癌肺转移风险的预测价值。结果乳癌肺转移组KLF5(χ^(2)=25.881,P<0.01)、TNFAIP2(χ^(2)=23.669,P<0.01)和β-catenin(P=0.002)阳性表达明显高于其他3组,乳癌肺转移组KLF5、TNFAIP2、β-catenin表达与组织学分级、脉管内癌栓有关(P=0.001~0.048);与年龄、分子亚型、ER、PR、HER-2、Ki67及生存状态无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,乳癌病人KLF5、TNFAIP2和β-catenin表达与DFS(χ^(2)=5.371~7.084,P<0.05)、OS(χ^(2)=4.152~7.670,P<0.05)显著相关。单因素和多因素分析表明,KLF5表达是乳癌发生肺转移的独立危险因素(HR=3.246,95%CI=1.197~12.046,P=0.034)。结论 KLF5、TNFAIP2和β-catenin在乳癌肺转移乳癌组织中高表达且KLF5可能为预测乳癌肺转移风险的分子标志物。

固本防哮饮对信号转导及转录激活因子1及哮喘易感基因ORMDL3的影响

目的观察固本防哮饮对信号转导和转录因子1(STAT1)及哮喘易感基因血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)的调控作用,分析其防治哮喘机制。方法利用白介素-4诱导人支气管上皮细胞建立哮喘细胞模型,固本防哮饮含药血清对其进行干预,采用实时荧光定量-PCR(Real Time PCR)、免疫印迹法(Western blotting,WB)、免疫荧光法(IF)分别从基因、蛋白水平检测细胞中ORMDL3和STAT1的表达及亚细胞定位。结果与正常组比较,模型组ORMDL3、STAT1 m RNA含量升高,但差异无统计学意义(P>0.05),固本防哮饮可降低模型组细胞ORMDL3、STAT1 m RNA水平,差异无统计学意义(P>0.05);与正常组比较,模型组ORMDL3、STAT1蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01),与模型组相比,固本防哮饮组ORMDL3及STAT1蛋白表达均显著(P<0.05)。结论固本防哮饮对STAT1及ORMDL3的表达有一定的调控作用,可能为固本防哮饮防治哮喘的内在机制。

Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响

背景:研究表明,Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是,关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。目的:观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。方法:取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体p CDH-KLF6,作为对照组和Kruppel样因子6组,另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体p CDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后,得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组。结果与结论:与对照组相比,氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显著增加(P<0.05)。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比,Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降,胆固醇酯/总胆固醇明显降低(P<0.05)。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少,且对照组与Kruppel样因子6组相比,细胞内脂质表达水平差异无显著性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达,抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。

Kruppel样因子4抑制巨噬细胞向破骨细胞分化介导平滑肌细胞钙化

目的探讨Kruppel样因子4(KLF4)在巨噬细胞向破骨细胞分化中的作用及相关机制。方法提取雄性C57BL/6J小鼠腹腔原代巨噬细胞并鉴定,将其分为对照组,NF-κB受体激动剂配体(RANKL)组,共刺激组(KLF4抗体和RANKL共刺激4 d),用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞分化情况,用鬼笔环肽染色检测破骨细胞成熟程度;通过骨吸收陷窝实验测破骨细胞骨吸收能力;通过qRT-PCR检测破骨细胞分化相关基因表达,用钙盐染色检测血管平滑肌细胞钙化情况。结果TRAP染色显示,TRAP阳性细胞直径约100μm,细胞核>3个。共刺激组破骨细胞数量较RANKL组明显增多(P<0.05)。与RANKL组比较,共刺激组破骨细胞成熟程度进一步升高、陷窝面积及数量升高(P<0.05)。RANKL组较对照组相关破骨基因表达明显升高(P<0.05);共刺激组较RANKL组相关破骨基因表达明显升高(P<0.05),而血管平滑肌细胞钙化明显降低(P<0.05)。结论KLF4抗体可促进巨噬细胞向破骨细胞转分化,进而抑制平滑肌细胞钙化。

肾透明细胞癌尿液中锌指蛋白转录因子4的表达及临床意义

目的:探讨肾透明细胞癌尿液脱落细胞中锌指蛋白转录因子4(Krüppel-like factor 4,KLF4)的表达及临床意义。方法:分别收集58例术后病检证实为肾透明细胞癌的肾癌患者及40例健康志愿者尿液。采用RT-PCR技术检测KLF4 mRNA的表达率,Western blot检测KLF4蛋白的表达率;分析KLF4因子的表达与肾透明细胞癌患者临床病理参数的关系。结果:肾透明细胞癌患者尿液脱落细胞KLF4表达明显下调,肾透明细胞癌组KLF4表达阴性率为87.9%(51/58),表达阳性率仅12.1%;而对照组KLF4表达阴性率为7.50%(3/40),表达阳性率为92.5%,2组表达阴性率比较有统计学差异(P<0.05)。肾癌患者中KLF4表达下调与患者年龄(χ2=0.369,P=0.544)、性别(χ2=0.705,P=0.401)、肿瘤大小(χ2=3.481,P=0.062)、肾透明细胞癌患者的临床分期(χ2=0.762,P=0.859)、组织分化程度(χ2=0.064,P=0.996)、淋巴结转移(χ2=0.301,P=0.583)均无关。结论:检测尿液KLF4因子可能有助于肾透明细胞癌的诊断及术后监测。RT-PCR为临床可行的检测方法。

Krüppel样因子家族在女性生殖系统疾病中的研究进展

女性生殖系统疾病很大程度上与雌、孕激素及其受体介导信号通路失调所致细胞增殖、凋亡和分化异常有关。这些核受体的精细调控是复杂的,许多核因子参与其中。Krüppel样因子(Krüppel-like factors,KLFs)是一组与真核细胞转录调控密切相关的锌指蛋白,在女性生殖系统中普遍表达,作为类固醇激素反应的共同调控者和整合者。KLF4在子宫内膜异位症(EMs)患者的在位内膜和子宫内膜肿瘤中表达减少。围着床期,KLF5在子宫内膜容受性的形成中起重要作用,与胚胎成功植入有关。KLF6参与胎盘发育和妊娠的维持。KLF9对孕激素受体起正向调节作用,而对雌激素受体起到负向调节作用。KLF11是一种转录抑制因子,具有潜在地抑制子宫肌瘤、EMs异位病灶生长的功能。深入探讨KLFs的生物功能,对认识女性生殖系统疾病的发病机制有重要意义。

Krüppel样因子4在肝细胞癌发生发展中的作用机制

肝细胞癌发生发展机制复杂,目前尚未完全阐明。KLF4又称为胃肠富集Krüppel样因子,具有抑癌和促癌的双重调节作用。KLF4在肝癌中发挥抑癌作用,介绍了KLF4在肝癌发展过程中的生物学功能及调控机制,研究KLF4在肝癌中作用机制有望为肝癌的靶向治疗和预后监测提供新思路。

晚期肺腺癌患者一线铂类化疗不敏感的影响因素探究

目的:探讨晚期肺腺癌患者一线铂类化疗不敏感的相关因素。方法:回顾性分析2019年2月-2021年1月期间于本院接受一线铂类化疗的67例晚期肺腺癌患者的临床资料。根据实体瘤化疗效果将患者分为不敏感组(n=25)和敏感组(n=42)。收集患者的基线资料,经单因素、多因素分析找出可能导致晚期肺腺癌患者一线铂类化疗不敏感的影响因素。结果:不敏感组与敏感组在Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch-like epichlorohydrinrelated protein-1,Keap1)、核转录因子E2相关因子2(Nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)、甲状腺转录因子-1(Thyroid transcription factor-1,TTF-1)方面比较,差异有统计学意义(P<0.05)。经Logistic回归分析结果显示,Keap1阴性、Nrf2阳性、TTF-1阴性是晚期肺腺癌患者一线铂类化疗不敏感的危险因素(OR>1,P<0.05)。结论:晚期肺腺癌患者一线铂类化疗不敏感可能与Keap1阴性、Nrf2阳性、TTF-1阴性等因素有关,临床可据此提出针对性干预方案以便降低一线铂类化疗不敏感度。

STAT3、VEGF蛋白在涎腺腺样囊性癌中的表达及对血管生成的影响

目的:探讨信号转导和转录活化因子-3(STAT3)及血管内皮生长因子(VEGF)蛋白在涎腺腺样囊性癌(SACC)组织中的表达情况及其与SACC临床病理参数、血管生成的关系。方法:采用免疫组织化学法检测50例SACC(SACC组)与15例正常腮腺组织(对照组)中STAT3、VEGF蛋白表达和微血管密度(MVD)。结果:(1)SACC组的STAT3及VEGF蛋白表达阳性率分别为66%和72%,明显高于正常组的6.7%和20%(P<0.01)。(2)STAT3和VEGF的表达在SACC的不同组织类型、TNM分期、有无淋巴结转移方面差异均有统计学意义(P<0.05),但在不同性别、年龄及肿瘤部位方面差异均无统计学意义(P>0.05)。(3)STAT3与VEGF表达呈正相关(P<0.05);SACC组的STAT3蛋白及VEGF蛋白表达中阳性与阴性者的MVD差异比较均有统计学意义(均P<0.05)。结论:STAT3可能通过上调VEGF表达,促进SACC中新生血管的形成,STAT3可能会成为SACC的抗血管生成的治疗靶点。

新疆鼠尾草酚酸类成分对HK-2细胞氧化损伤的保护作用及机制研究

目的研究新疆鼠尾草酚酸类成分对高糖高脂诱导的人肾小管上皮细胞HK-2氧化损伤的保护作用,并初步探讨其可能机制。方法将HK-2细胞分为对照组、模型组、卡格列净片组(阳性对照组,15μmol/L)、新疆鼠尾草酚酸纯化物组(10.8μg/mL)和4个单体成分组(丹参素、原儿茶醛、咖啡酸、迷迭香酸,均为50μmol/L)。除对照组外,其余各组均建立高糖高脂损伤细胞模型(500μmol/L棕榈酸+30 mmol/L葡萄糖处理48 h)并加药培养48 h。检测各组细胞的凋亡率以及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量和谷胱甘肽(GSH)活性,并检测上述5组(丹参素组、原儿茶醛组、咖啡酸组除外)细胞中核转录因子E2相关因子2(Nrf2)、Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)、血红素氧合酶1(HO-1)、醌NADH脱氢酶1(NQO1)蛋白的表达。结果与对照组比较,模型组细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);细胞中MDA含量显著升高(P<0.01),GSH含量和SOD活性显著降低(P<0.01);细胞中Nrf2、NQO1、HO-1蛋白表达显著下调(P<0.01),Keap1蛋白表达显著上调(P<0.01)。与模型组比较,各给药组细胞的凋亡率及细胞中MDA含量均显著降低(P<0.01),各给药组细胞中GSH含量及酚酸纯化物组、原儿茶醛组、迷迭香酸组细胞中SOD活性均显著升高(P<0.01);酚酸纯化物组细胞中Nrf2、HO-1、NQO1蛋白表达以及迷迭香酸组Nrf2蛋白表达均显著上调(P<0.01),酚酸纯化物组和迷迭香酸组细胞中Keap1蛋白表达均显著下调(P<0.01)。结论新疆鼠尾草酚酸类成分可减轻高糖高脂所致肾小管上皮细胞的氧化应激损伤,其作用可能与其激活Keap1/Nrf2通路、抑制氧化应激反应相关。

α_1-抗糜蛋白酶对类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)诱导细胞表达核转录因子的影响

目的研究α_1 抗糜蛋白酶(ACT)与类淀粉样蛋白Aβ_(1-42)在体外形成复合物的性质,以及该复合物对神经母细胞瘤细胞(Kelly)表达核转录因子过氧化物酶体增殖子激活受体γ(PPARγ)和核因子κB(NFκB)的影响。方法Aβ_(1-42)与ACT溶液以10∶1mol/L混合,用琼脂糖凝胶电泳检测2h和24h反应产物Aβ_(1-42)/ACT(2h)、Aβ_(1-42)/ACT(24h),电泳迁移率检测法(EMSA)检测Aβ_(1-42)/ACT复合物对Kelly细胞表达PPARγ和NFκB的影响。结果Aβ_(1-42)与ACT分子之间可以结合形成复合物,而且复合物的功能随反应时间的不同而不同与对照组细胞相比,Aβ_(1-42)/ACT(2h)使Kelly细胞对PPARγ和NFκB的表达分别增加158% (P<0 05)和77% (P<0 05),而Aβ_(1-42)/ACT(24h)和Aβ_(1-42)、ACT单个分子则无类似作用。结论PPARγ和NFκB是调节人体炎性反应过程的重要细胞核转录因子,与阿尔茨海默病(AD)的病理改变相关。ACT通过与Aβ_(1-42)结合影响两种细胞因子的表达,可能是AD中神经系统炎性反应平衡失调的病理通路之一,提示对AD的发病有影响。

Krüppel样转录因子9在胰腺癌中的表达及其临床意义

目的:探讨Krüppel样转录因子9(KLF9)在胰腺癌中的表达并探讨其与胰腺癌患者临床病理参数、预后的关系。方法:收集200例配对的胰腺癌组织与癌旁组织标本,分别用RT-PCR(28对)、Westernblot(4对)和免疫组化(全部标本)检测KLF9的表达,分析KLF9的表达水平与患者临床病理参数以及生存率的关系。结果:RT-PCR结果显示,在28例配对标本中,21例(75%)胰腺癌组织中KLF9m RNA的表达水平明显低于其癌旁正常胰腺组织。Westernblot结果显示,与癌旁正常胰腺组织比较,胰腺癌组织中KLF9蛋白表达水平明显下调。免疫组化显示,在胰腺癌组织中KLF9的染色强度明显减弱。与患者临床病理参数关系分析结果显示,KLF9的表达水平与肿瘤的分化程度(P=0.008)和血管侵犯(P=0.006)有关。生存分析显示,KLF9阳性表达患者1、2、3年总生存率明显高KLF9阴性表达患者(41%、31%、16%vs.18%、6%、6%)、中位生存时间明显长于KLF9阴性表达患者(21.05个月vs.11.82个月)(均P<0.05)。结论:KLF9在胰腺癌中表达下调,且可能与不良预后密切相关。

叉头框转录因子O1和Kruppel样转录因子9在非小细胞肺癌中的表达及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中叉头框转录因子O1(FOXO1)与Kruppel样转录因子9(KLF9)的表达及其临床意义。方法收集2012年9月至2015年6月榆林市第一医院手术切除的102例NSCLC肿瘤组织标本,另选取距癌组织边缘≥5 cm的癌旁组织作为对照组。采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测NSCLC组织及癌旁组织中FOXO1与KLF9 mRNA相对表达量,免疫组织化学法检测NSCLC组织及癌旁组织中FOXO1、KLF9蛋白表达。根据癌组织mRNA检测结果的均值将FOXO1、KLF9分为高表达组与低表达组,分析二者与患者临床病理参数的关系。采用Pearson法对FOXO1、KLF9的表达进行相关性分析,采用Kaplan-Meier法对患者生存情况进行分析,对影响NSCLC预后的相关因素进行logistic回归分析。结果与癌旁组织相比,NSCLC组织FOXO1 mRNA相对表达量升高(2.82±0.15比1.28±0.47,t=31.525,P<0.05),KLF9 mRNA相对表达量降低(0.34±0.07比1.04±0.11,t=54.222,P<0.05)。FOXO1在有淋巴结转移、分化程度高、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织中的表达水平较高,差异均有统计学意义(均P<0.05);KLF9在有淋巴结转移、分化程度高、TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期患者癌组织中的表达水平较低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析法显示FOXO1与KLF9表达无相关性(r=0.154,P=0.156)。Kaplan-Meier法分析结果显示FOXO1高表达组3年总生存率低于FOXO1低表达组(10.81%比60.71%,χ^2=27.341,P<0.01),KLF9低表达组3年总生存率低于KLF9高表达组(26.32%比61.54%,χ^2=8.526,P=0.003)。logistic回归分析结果显示FOXO1高表达是影响NSCLC预后的危险因素(OR=2.682,P=0.003),KLF9高表达是NSCLC预后的保护因素(OR=0.446,P=0.012)。结论NSCLC组织中FOXO1高表达与KLF9低表达可作为预测NSCLC进展情况的有效指标,二者均与患者预后不良密切相关。

胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3表达及与患者临床病理特征的关系

目的探讨胃癌组织中类泛素样含环指域蛋白1(UHRF1)、Yes相关蛋白1(YAP1)和叉头翼状螺旋转录因子3(FOXP3)表达及与患者临床病理特征的关系。方法收集2021年1至12月湖州市第一人民医院经手术切除的85例胃癌患者的癌组织与配对癌旁组织,采用免疫组化法测定UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。比较胃癌组织与癌旁组织及不同临床病理特征患者间UHRF1、YAP1和FOXP3的阳性率。结果胃癌组织中UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率均显著高于癌旁组织,差异均有统计学意义(均P<0.01)。不同性别、年龄、BMI和肿瘤直径胃癌患者UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率比较,差异均无统计意义(均P>0.05);低分化胃癌患者高于高、中分化胃癌患者,Ⅲ、Ⅳ期胃癌患者高于Ⅰ、Ⅱ期胃癌患者,淋巴结转移胃癌患者高于无淋巴结转移胃癌患者,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论胃癌组织UHRF1、YAP1和FOXP3阳性率高,并与患者肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移等临床病理特征有关。

Krüppel样转录因子8在肝细胞癌中经PI3K/Akt通路调控VEGFA的表达

目的 :探讨肝细胞癌中Krüppel样转录因子8(Krüppel-like transcription factor 8,KLF8)对血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)表达的调控作用及其可能的分子机制。方法 :采用免疫组织化学染色法检测配对的肝细胞癌及癌旁组织中KLF8与VEGFA的表达,分析两蛋白表达水平之间的相关性。将重组质粒pc DNA3.1-KLF8及其对照质粒分别转染人肝癌SMMC7721细胞后,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测SMMC7721细胞中VEGFA及磷酯酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase,PI3K)/Akt通路相关蛋白磷酸化Akt(phospho-Akt,p-Akt)、磷酸化磷酸肌醇依赖激酶1(phospho-phosphoinositide-dependent kinase 1,p-PDK1)和磷酸化染色体10缺失的磷酸酶与张力蛋白同源物(phospho-phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10,p-PTEN)的表达水平;同时,蛋白质印迹法检测PI3K/Akt通路抑制剂LY294002对过表达KLF8的SMMC7721细胞中VEGFA蛋白表达的作用。采用鸡胚绒毛尿囊膜模型检测上调KLF8表达的SMMC7721细胞对鸡胚血管生成的诱导作用。结果 :与癌旁组织相比,KLF8与VEGFA蛋白在肝细胞癌组织中表达水平均明显升高(P<0.01)。肝癌组织中,KLF8与VEGFA蛋白表达之间具有正相关性(r=0.622,P<0.01)。与对照组相比,转染pc DNA3.1-KLF8的SMMC7721细胞中,KLF8、VEGFA、p-Akt、p-PDK1和p-PTEN蛋白的表达水平均升高(P<0.05);LY294002可抑制KLF8过表达的SMMC7721细胞中VEGFA的表达(P<0.05)。上调KLF8表达的SMMC7721细胞具有更强的诱导鸡胚血管生长的作用(P<0.01)。结论 :KLF8基因在肝细胞癌中可能通过PI3K/Akt信号通路诱导VEGFA的表达,进而调控肿瘤血管新生。

Kruppel样转录因子2对人肝窦内皮细胞体外迁移的影响

目的探索Kruppel样转录因子2（KLF2）对肝窦内皮细胞（LSEC）体外迁移的影响及其机制。方法采用慢病毒感染的方式构建过表达和干扰KLF2表达的LSEC（分别为LV5-KLF2和LV3-shKLF2），采用荧光定量PCR和蛋白印迹法检测病毒感染效率，未处理LSEC作为野生对照（wT）组。采用Transwell实验检测KLF2表达的改变对LSEC迁移能力的影响，荧光定量PCR和蛋白印迹法检测促迁移因子血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR2）的表达，蛋白印迹法检测迁移相关信号通路蛋白Src，P38MAPK，P44／42MAPK的表达。结果Transwell实验计数12h细胞迁移数，过表达KLF2可抑制LSEC的体外迁移能力，LV5-KLF2组LSEC细胞迁移数目较LV5-NC和wT组少[（35．6±1．4）、（71．3±2．4）和（69．3±1．6）]，差异均有统计学意义（均P〈0．001）。而下调KLF2表达后，LV3-shKLF2组LSEC的细胞迁移能力较LV5-NC和WT组增强，细胞迁移数目较对照组多[（189．5±5．4）、（83．4±2．5）和（82．2±3．4）]，差异均有统计学意义（均P〈0．001）。荧光定量PCR和蛋白印迹法证实过表达KLF2可抑制LSEC中促迁移因子VEGFR2的mRNA和蛋白水平的表达，而干扰KLF2则上调VEGFR2的mRNA和蛋白表达水平。蛋白印迹结果提示过表达KLF2，抑制LSEC中信号通路蛋白p-Src、p-P38 MAPK及p-P44／42的表达，而干扰KLF2则促进LSEC中上述磷酸化蛋白的表达。结论KLF2可能通过Src／MAPK通路抑制LSEC的体外迁移。

胃肠富集Krüppel样因子基因转染对人胃癌细胞株SGC-7901及裸鼠移植瘤生长的影响

目的探讨外源性胃肠富集Krueppel样因子（GKLF）基因转染对人胃癌细胞株SGC-7901在体内外的抗肿瘤效应。方法荧光实时定量PCR和Western印迹法检测GKLF基因转染前后人胃癌细胞株SGC-7901中GKLFmRNA和蛋白的表达。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞技术、克隆形成实验和细胞侵袭实验分别检测GKLF基因转染后SGC7901细胞增殖和侵袭力的变化。观察裸鼠移植瘤生长情况和应用免疫组织化学法检测移植瘤组织中微血管密度（MVD）。结果GKLF基因转染后，SGC7901-pcDNA3．1-GKLF组中GKLFmRNA（0．1216±0．0061）和蛋白（1．0547±0．0172）的表达明显高于SGC7901组[分别为（0．0029±0．0012）和（O．6240±0．0177）]和SGC7901pcDNA3．1组[分别为（O．0037±0．0013）和（O．5627±0．0510）]，P〈0．05。与SGC7901组和SGC7901-pcDNA3．1组相比，从48h开始，SGC7901-pcDNA3．1-GKLF组细胞生长速度减慢、细胞出现G0／G1期部分阻滞、克隆形成率低、细胞侵袭力明显减弱（P值均〈0．05）。SGC7901-pcDNA3．1-GKLF组皮下移植瘤生长速度减慢、瘤重轻、MVD低（P值均〈0．05）。结论GKLF基因转染可导致人胃癌细胞株SGC-7901的增殖活性和侵袭力降低，抑制裸鼠移植瘤生长和血管生成。