微小RNA-181c-5p和Kruppel样因子6在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征关系研究

目的:检测子宫内膜样腺癌组织中微小RNA-181c-5p(miR-181c-5p)和Kruppel样因子6(KLF6)的表达,探讨其相关性及临床意义。方法:选择49例子宫内膜样腺癌行手术治疗的患者作为观察组,选择49例增生期子宫内膜组织作为对照组。应用实时荧光定量PCR法检测术后组织中miR-181c-5p的表达,应用免疫组化方法检测KLF6的表达。应用线性相关分析观察miR-181c-5p和KLF6的关系,应用K-M生存分析观察miR-181c-5p和KLF6与术后生存时间的关系。结果:观察组miR-181c-5p表达量明显低于对照组(P<0.05),KLF6的阳性率明显低于对照组(P<0.05)。观察组miR-181c-5p与KLF6表达与肿瘤肌层浸润深度、宫颈管累犯及病理分级密切相关(均P<0.05),且两者具有正相关性,两者的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。结论:子宫内膜样腺癌中miR-181c-5p和KLF6均异常表达且具有正相关性,联合检测miR-181c-5p和KLF6的表达对判断肿瘤预后可能有一定价值。

老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5及Kruppel样因子9表达与患者复发的相关性

目的探讨老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5(KLF5)、Kruppel样因子9(KLF9)表达与患者复发间的关系。方法回顾性分析2016年5月至2018年5月湖南省脑科医院收治的263例老年鼻咽癌患者的临床资料,患者治疗后均行5年院外随访,观察患者是否出现复发。通过Western blotting技术检测老年鼻咽癌患者癌组织中KLF5、KLF9相对蛋白表达量,比较复发患者与非复发患者的基础资料信息[性别、年龄、国际抗癌联盟(UICC)分期、病理类型、疗程延长时间、放疗剂量、是否放疗联合化疗、是否鼻腔受侵、是否口咽受侵、是否颅底骨质受侵、是否颅内受损、是否颅神经损伤]及KLF5、KLF9差异。通过多因素logistic逐步回归分析老年鼻咽癌患者复发的危险因素。采用SPSS 22.0软件进行数据分析。根据数据类型,组间比较分别采用t检验及χ^(2)检验。结果263例老年鼻咽癌患者治疗结束后行5年院外随访,复发患者共27例(10.27%)。与非复发组患者相比,复发组患者UICC分期Ⅲ~Ⅳ期、未行放疗联合化疗、颅底骨质受侵、颅神经损伤占比较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。与非复发组患者相比,复发组患者KLF5、KLF9相对蛋白表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。对KLF5、KLF9进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,其对老年鼻咽癌患者复发有较好的预测价值,且联合预测价值更高,曲线下面积分别为0.800、0.790、0.894,且均有P<0.05。多因素logistic回归分析显示,UICC分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=3.420,95%CI 1.715~6.820)、未行放疗联合化疗(OR=1.434,95%CI 1.106~1.859)、颅底骨质受侵(OR=2.790,95%CI 1.337~5.822)、颅神经损伤(OR=1.249,95%CI 1.026~1.520)、KLF5<2.495(OR=4.453,95%CI 1.469~13.498)、KLF9<0.305(OR=2.719,95%CI 1.604~4.609)是老年鼻咽癌患者复发的危险因素。结论老年鼻咽癌患者癌组织内KLF5、KLF9表达下降,且KLF5、KLF9表达为患者复发的影响因素。

急性缺血性脑卒中患者血清微小RNA-140-3p、Krüpple样因子5表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性

目的探索急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清微小RNA-140-3p(miR-140-3p)、Krüpple样因子5(KLF5)表达水平与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度的相关性。方法选择2022年10月—2024年1月本院收治的285例AIS患者作为研究对象,依据超声结果将患者分为斑块易损组(196例)、斑块稳定组(53例)以及无斑块组(36例);将患者依据斑块狭窄程度分为狭窄重度组(42例)、狭窄中度组(57例)、狭窄轻度组(150例)以及无狭窄组(36例)。收集患者的一般资料,采用实时荧光定量PCR对血清miR-140-3p、KLF5表达水平进行检测;多因素Logistic回归分析AIS患者颈动脉斑块不稳定性的影响因素;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-140-3p、KLF5水平检测对AIS患者颈动脉斑块不稳定的诊断价值;分析不同狭窄程度血清miR-140-3p、KLF5水平;Pearson法和Spearman法相关性分析血清miR-140-3p、KLF5水平的相关性及二者与AIS患者颈动脉斑块稳定及狭窄程度的相关性。结果斑块易损组患者高血压人数、糖尿病人数、总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(FIB)、膀抑素C(Cys-C)及KLF5水平高于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),血小板(PLT)及miR-140-3p水平低于斑块稳定组及无斑块组(P<0.05),斑块稳定组LDL-C、FIB、D-D、Cys-C及KLF5水平高于无斑块组(P<0.05),PLT及miR-140-3p水平低于无斑块组(P<0.05);多因素Logistic回归分析显示PLT、D-D、FIB、Cys-C、miR-140-3p、KLF5是AIS患者斑块不稳定性的影响因素(P<0.05);ROC分析显示,miR-140-3p、KLF5联合诊断AIS患者颈动脉斑块不稳定的ROC曲线下面积(AUC)显著大于miR-140-3p单独诊断的AUC(Z=4.617,P<0.001),KLF5单独诊断的AUC(Z=3.473,P=0.001);随着患者狭窄程度的增加,患者血清miR-140-3p水平降低(F=341.819,P<0.001),血清KLF5水平升高(F=152.186,P<0.001);Pearson法相关性分析显示,血清miR-140-3p水平与血清KLF5水平及斑块稳定性、狭窄程度呈负相关(r=-0.536,-0.529,-0.601,P<0.001),血清KLF5水平与斑块稳定性及狭窄程度呈正相关(r=0.511,0.634,P<0.001)。结论AIS患者血清miR-140-3p水平降低,血清KLF5水平升高,其水平变化与颈动脉斑块稳定性及狭窄程度密切相关。

O-GlcNAc转移酶介导的Kruppel样因子5 O-GlcNAc糖基化修饰调控细胞周期素D1参与结直肠癌发生、发展实验研究

目的:探讨O-GlcNAc转移酶(OGT)通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定Kruppel样因子5(KLF5)蛋白并上调细胞周期素D1(CCDN1)表达参与结直肠癌(CRC)发生、发展的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析KLF5 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CRC细胞中KLF5的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。通过生物信息学方法分析KLF5的靶基因和潜在结合位点,并通过双荧光素酶实验证实KLF5蛋白可与CCDN1结合,采用RT-qPCR检测KLF5对CCDN1 mRNA的影响。抑制KLF5并过表达CCDN1,分析KLF5是否通过正调控CCDN1促进细胞增殖和促进细胞进入G 1期。采用生物信息学分析KLF5蛋白是否存在O-GlcNAc糖基化位点,OGT mRNA和蛋白在结直肠癌组织中的表达以及OGT和KLF5表达的相关性。使用OGT抑制剂OSMI-1处理CRC细胞,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析KLF5蛋白表达,O-GlcNAc糖基化蛋白表达水平通过免疫荧光实验检测。并用Western blot法检测OSMI-1和放线菌酮(CHX)处理后KLF5蛋白的稳定性。最后抑制OGT并过表达KLF5,分析OGT是否通过正调控KLF5促进CCDN1表达。结果:KLF5 mRNA和蛋白在CRC中高表达。KLF5在CRC细胞中高表达并可促进细胞增殖和促进细胞进入G 1期。CCND1是KLF5的靶基因并可与CCND1靶向结合。KLF5通过正调控CCND1促进细胞增殖和促进细胞由G 1期向S期转化。生物信息学分析证实KLF5蛋白存在O-GlcNAc糖基化位点。OGT mRNA和蛋白在CRC中高表达,并且OGT和KLF5表达水平呈正相关。抑制OGT表达可降低O-GlcNAc糖基化蛋白和KLF5蛋白水平,并可降低KLF5蛋白的稳定性。OGT通过正调控KLF5上调CCND1表达。结论:KLF5通过正调控CCND1促进CRC细胞增殖,并促进细胞进入G 1期。OGT通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定KLF5并上调CCND1表达。

下调胰岛素样生长因子抑制miR-767-5p的表达对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间充质转化的影响

目的研究抑制miR-767-5p对乳腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间充质转化(EMT)的影响。方法体外培养乳腺癌细胞,将miR-767-5p inhibitor和inhibitor-NC转染到乳腺癌细胞中。细胞分为3组:空白对照组(Control组),miR-767-5p inhibitor组和inhibitor-NC组,采用CCK-8法、Transwell法、划痕实验检测miR-767-5p抑制剂对乳腺癌细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。Western blot检测迁移相关蛋白基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-767-5p和胰岛素样生长因子-1(IGF1)的靶向结合作用。RT-qPCR和Western blot实验检测IGF1 mRNA和蛋白的表达水平。采用Western blot检测EMT相关蛋白的表达水平。结果CCK-8实验结果显示,与Control组和inhibitorNC组相比,miR-767-5p inhibitor组显著抑制MCF-7细胞的增殖(P<0.05)。Transwell实验结果表明,与Control组和inhibitor-NC组相比,miR-767-5p inhibitor组乳腺癌细胞侵袭细胞数显著下降(P<0.05)。划痕实验结果显示,与Control组和inhibitor-NC组相比,miR-767-5p inhibitor组乳腺癌细胞迁移率显著下降(P<0.05)。荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-767-5p能够靶向结合IGF1。Western blot结果表明,与Control组和inhibitor-NC组相比,miR-767-5p inhibitor组的E-cadherin蛋白表达水平显著增高(P<0.05),Ncadherin、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低(P<0.05)。与Control组和inhibitor-NC组相比,miR-767-5p inhibitor组中IGF1的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论抑制miR-767-5p的表达可通过下调IGF1抑制乳腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移及EMT的发生。

腺苷A2a受体/Krüppel样因子5对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响

目的:探讨腺苷A2a受体/Krüppel样因子5(KLF5)对缺血再灌注损伤大鼠心肌的影响。方法:42只250~300 g雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组,n=6)、缺血再灌注组(I/R组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体特异性激动剂CGS21680组(I/R+CGS组,n=12)、缺血再灌注+腺苷A2a受体拮抗剂ZM241385组(I/R+ZM组,n=12)。采用结扎左冠状动脉前降支再灌注的方法制备大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。I/R+CGS组于再灌注前5 min静脉注射CGS21680后持续泵注60 min,CGS+ZM组于再灌注前5 min静脉注射ZM241385。于造模前,缺血5 min,再灌注10 min、45 min及120 min时分别记录各组大鼠的心率(HR)、平均动脉压(MAP)以及心率与收缩压乘积(RPP)。再灌注结束后取血液,酶联免疫吸附测定法检测血清心肌钙蛋白I(c TnI)和成纤维细胞生长因子21(FGF21)水平。再灌注结束后再次结扎左冠状动脉前降支,采用TTC染色法确定心肌梗死面积。处死大鼠,采用Western blot法检测缺血区心肌组织中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-1β和KLF5的蛋白表达水平。结果:各组造模前、Sham组各时间点HR、MAP及RPP差异无统计学意义。与Sham组比较,I/R组缺血5 min时HR、MAP及RPP降低;与I/R组比较,I/R+CGS组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP降低,I/R+ZM组再灌注10 min和45 min时HR、MAP及RPP升高(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌梗死面积增大,血清cTnI水平升高,FGF21水平降低;与I/R组比较,I/R+CGS组心肌梗死面积减小,血清cTnI水平降低,FGF21水平升高,I/R+ZM组心肌梗死面积增大,血清c TnI水平升高,FGF21水平降低(P均<0.05)。与Sham组比较,I/R组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高;与I/R组相比,I/R+CGS组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显降低,I/R+ZM组心肌组织中TNF-α、IL-1β和KLF5的蛋白表达水平均明显升高(P均<0.05)。结论:激活腺苷A2a受体可抑制缺血心肌细胞中KLF5表达,降低心肌梗死再灌注损伤程度,缓解心肌细胞缺氧状态,促进心肌细胞损伤后修复,对缺血再灌注损伤大鼠心肌起保护作用。

支气管哮喘并发肺部感染患儿血清HDAC1、 KLF5水平及意义

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)、Kruppel样因子5(KLF5)在支气管哮喘(BA)并发肺部感染患儿血清中的水平及意义。方法 收集山东省青岛市市立医院2022年6月至2023年1月收治的140例BA患儿作为研究对象,根据是否并发肺部感染分为未感染组(79例)和感染组(61例);另选取同期在山东省青岛市市立医院体检健康儿童140例作为对照组。比较各组血清HDAC1、KLF5水平;采用多因素Logistic回归分析BA患儿并发肺部感染的影响因素;绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清HDAC1、KLF5水平对BA患儿并发肺部感染的预测价值。结果 感染组血清HDAC1、KLF5水平显著高于未感染组和对照组(P<0.05);未感染组血清HDAC1、KLF5水平显著高于对照组(P<0.05)。感染组有哮喘家族史患者比例高于未感染组,病程长于未感染组,差异均有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,血清HDAC1、KLF5水平及哮喘家族史、病程均是BA患儿并发肺部感染的影响因素(P<0.05)。ROC曲线结果显示,HDAC1、KLF5二者联合预测BA患儿并发肺部感染的曲线下面积(AUC)为0.930,优于HDAC1、KLF5单独预测的AUC(Z=3.408,P=0.001;Z=2.539,P=0.011)。结论 BA并发肺部感染患儿血清HDAC1、KLF5水平显著升高,且HDAC1、KLF5联合检测对BA患儿并发肺部感染有较好的预测价值。

急性大动脉粥样硬化型脑梗死患者血清CTRP5水平的相关性分析

目的探究血清补体C1q关联的肿瘤坏死因子相关蛋白5(CTRP5)水平在急性大动脉粥样硬化(ALAA)型脑梗死患者病程中的血清表达水平及其潜在关联性特征。方法前瞻性研究,选取2022年12月至2023年8月在内蒙古自治区人民医院住院的112例首次发病ALAA型脑梗死患者[ALAA型脑梗死组,男69例,女43例,年龄(64.25±9.42)岁],并配以55例虽有颅内外大动脉粥样硬化却未表现出脑梗死症状患者[大动脉粥样硬化(LAA)型非脑梗死组,男36例,女19例,年龄(66.98±9.78)岁]、41例存在颅内外大动脉斑块患者[斑块组,男18例,女23例,年龄(65.10±7.63)岁]及37名健康体检者[正常组,男18例,女19例,年龄(63.03±10.85)岁]。通过酶联免疫吸附法(ELISA),测定所有入组人员的血清CTRP5水平,比较ALAA型脑梗死组、非脑梗死对照组(包括斑块组和正常组)之间血清CTRP5水平。统计学方法采用t检验、非参数U检验、χ^(2)检验。结果正常组与其他3组(即ALAA型脑梗死组、LAA型非脑梗死组以及斑块组)、斑块组与脑梗死组、斑块组与非脑梗死组之间血清CTRP5水平比较,差异均有统计学意义(F=5259.50、538.00、5327.00、51466.50、5441.00,均P<0.05)。经logistic回归分析,CTRP5水平与患病风险间存在正相关联系(OR值为0.002,95%CI 0~0.171)。CTRP5的受试者操作特征曲线(ROC)分析中得出,ROC曲线下面积为0.937,95%CI 0.895~0.980,证明了CTRP5在鉴别ALAA型脑梗死病例方面具备一定的有效性和准确性。结论血清CTRP5水平与ALAA型脑梗死及大动脉粥样硬化有一定相关性;并未检测到血清CTRP5水平与神经功能缺损的严重程度之间存在明显的关联关系;血清中CTRP5水平有望成为预测ALAA型脑梗死以及评估大动脉粥样硬化风险的一种潜在生物标志物。

miR-135a-5p对氟他胺致隐睾小鼠胰岛素样因子3及睾酮表达的影响

目的探讨miR-135a-5p对氟他胺导致的隐睾症小鼠睾丸组织中胰岛素样因子3(INSL3)和睾酮表达水平的影响。方法构建氟他胺致隐睾小鼠模型,将实验分为正常对照组、氟他胺组、氟他胺+miR-135a-5p敲降组及氟他胺+miR-135a-5p过表达组。用RT-qPCR法检测小鼠睾丸组织中miR-135a-5p和INSL3 mRNA的表达水平;用Western blot检测INSL3蛋白的表达水平;用ELISA法检测睾酮的表达水平。结果氟他胺致隐睾小鼠睾丸组织中miR-135a-5p、INSL3 mRNA和蛋白以及睾酮的表达水平均显著下调(P<0.05)。敲降miR-135a-5p可下调隐睾睾丸组织中INSL3 mRNA和蛋白以及睾酮的表达水平(P<0.01),而过表达miR-135a-5p则具有相反的结果。结论miR-135a-5p在氟他胺致隐睾小鼠睾丸组织中低表达,过表达miR-135a-5p可恢复INSL3和睾酮的表达水平。

微小RNA-98-5p靶向Kruppel样转录因子9对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p靶向Kruppel样转录因子9(KLF9)对大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的保护作用。方法50只大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-98-5p agomir组、agomir-NC组及miR-98-5p agomir+pcDNA-3.1-KLF9组,每组10只。通过冠状动脉结扎法建立MI/R注模型。HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL检测心肌组织细胞凋亡情况;ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;Real-time PCR检测心肌组织miR-98-5p、KLF9 mRNA表达水平;Western blotting检测心肌组织KLF9、Bax和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-98-5p与KLF9的关系。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌细胞排列较乱,出现坏死;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量均升高,心肌组织miR-98-5p表达水平下降,KLF9 mRNA和蛋白及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.05)。过表达miR-98-5p后,大鼠心肌细胞排列较为整齐,心肌细胞坏死减少;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下降(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果验证KLF9是miR-98-5p的靶基因。过表达KLF9逆转了miR-98-5p agomir对心肌损伤大鼠产生的作用。结论MiR-98-5p靶向KLF9改善MI/R大鼠心肌损伤,其机制可能与miR-98-5p调控JAK2/STAT3信号通路抑制心肌细胞凋亡相关。

趋化素样因子超家族成员5的研究新进展

含有MARVEL跨膜结构域的趋化素样因子基因(CMTM)家族,原名人类趋化素样因子超家族(CKLFSF)。CMTM家族有包括CKLF和CMTM 1-8等9个成员,CMTM5是其中重要一员。有关CMTM5的研究显示,在前列腺癌,乳腺癌,宫颈癌,胃癌等多种肿瘤组织中,CMTM5的表达远远低于相对应的正常组织,恢复CMTM5表达能抑制癌细胞的增殖、侵袭和迁移,提示其可能是一个抑癌基因,进而可能成为肿瘤治疗的一个新靶点。近年来出现了关于CMTM5在冠心病、自身免疫性疾病、精神神经系统疾病中的研究报道,提示CMTM5可能在非肿瘤性疾病中也起着重要作用。

MiR-125a-5p靶向胰岛素样生长因子1受体调节川崎病中内皮细胞的增殖和迁移

目的:探讨miR-125a-5p靶向胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)对川崎病内皮细胞增殖与迁移的影响。方法:培养人冠状动脉内皮细胞(human coronary artery endothelial cells,HCAECs),将细胞分为对照组(20%正常人血清)、20%川崎病血清组(20%川崎病患儿血清)、20%川崎病血清+抵制剂(inhibitor)正常对照(normal control,NC)组、20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组、20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+siRNA组、20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+si IGF1R组,除对照组添加20%正常人血清外,其余各组均添加20%川崎病患儿血清培养。定量RT-PCR法测定miR-125a-5p、IGF1R mRNA表达水平,蛋白质印迹法测定IGF1R蛋白表达;细胞计数试剂盒8(cell counting kit 8,CCK-8)法测定HCAECs细胞增殖能力;Transwell法测定细胞迁移能力;蛋白质印迹法测定Ki-67、血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial-cadherin,VE-cad)、p120连环蛋白(p120-catenin,p120ctn)水平;构建野生型IGF1R重组质粒(pGL4-IGF1R-WT)和突变型IGF1R重组质粒(pGL4-IGF1R-MUT),将HCAECs细胞分为mimic-NC+pGL4-IGF1R-WT组、miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-WT组、mimic-NC+pGL4-IGF1R-MUT组、miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-MUT组,双荧光素酶报告实验测定miR-125a-5p与IGF1R mRNA的水平。结果:与对照组相比,20%川崎病血清组HCAECs细胞5-乙炔基-2’-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine,EdU)结合率、miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均升高(均P<0.05),IGF1R mRNA与蛋白水平、HCAECs细胞光密度(optical density,OD)值、Ki-67均降低(均P<0.05);与20%川崎病血清组相比,20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组HCAECs细胞EdU结合率、miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均降低,IGF1R mRNA水平与蛋白水平、HCAECs细胞OD值、Ki-67均升高(均P<0.05);与20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor组相比,20%川崎病血清+miR-125a-5p inhibitor+si IGF1R组HCAECs细胞EdU结合率miR-125a-5p水平、VE-cad、p120ctn表达均升高(均P<0.05),IGF1R mRNA与蛋白水平、HCAECs细胞OD值、Ki-67均降低(均P<0.05);与mimic-NC+pGL4-IGF1R-WT组对比,miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-WT组荧光素酶活性降低(P<0.05);与mimic-NC+pGL4-IGF1R-MUT组相比,miR-125a-5p mimic+pGL4-IGF1R-MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。结论:川崎病内皮细胞损伤模型中miR-125-5p呈高表达,IGF1R呈低表达,miR-125-5p下调可靶向上调IGF1R表达,促进细胞增殖、迁移。

胃腺癌中Kruppel样因子4、5和增殖细胞核抗原表达

目的应用免疫组化方法检测胃腺癌术后组织中Kruppel样因子(KLF)4、5和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特征。方法 51例经病理医师确诊的胃腺癌术后组织作为观察组,40例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织作为对照组。两组KLF4、KLF5和PCNA蛋白表达应用免疫组化检测。结果两组KLF4、KLF5和PCNA表达差别有显著性。观察组中KLF4、KLF5和PCNA的阳性率均与浸润深度相关,KLF4的阳性率与脉管内瘤栓相关,KLF5的阳性率与肿瘤的最大径、脉管瘤栓相关,PCNA的阳性率与肿瘤的最大径相关。线性相关分析显示观察组中KLF5和PCNA具有正相关性,其他指标间未见明显相关性。结论胃腺癌术后组织中KLF4、KLF5和PCNA异常表达,三者异常表达对肿瘤性的进展过程起一定的作用。KLF5可能对细胞增殖有影响。

食管癌组织ARL5B表达与临床病理特征的关系及作用机制

目的应用生物信息学技术探讨ARL5B的临床意义及可能的潜在作用机制,并通过临床资料、基础实验等进行了初步验证。方法从TCGA数据库下载食管癌数据集,R软件分析差异表达的mRNA,结合患者的临床数据集进行生存分析。取临床食管癌及癌旁组织标本,采用实时定量PCR(qRT-PCR)及蛋白印迹(Western blotting)验证ARL5B表达。免疫组化检测ARL5B表达并评价其与食管癌患者临床病理特征的关系。利用生物信息学对ARL5B潜在作用机制初步分析,qRT-PCR初步验证可能与其作用的基因。结果生物信息学结果显示ARL5B在人食管癌组织中的表达明显高于癌旁组织且ARL5B高表达是食管癌患者预后差的标志。淋巴结组织、肿瘤组织、癌旁组织中,ARL5B的mRNA和蛋白的表达由高到低,与生物信息学结果符合。临床分析表明ARL5B表达与肿瘤的淋巴结转移、临床分期有关,其高表达是患者预后差的标志。富集分析显示ARL5B与囊泡传输、内体传输、细胞器定位等生物学过程有关。蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)分析提示与ARL5B互作的蛋白质有VPS16、KIF1A、TOM1等。qRT-PCR验证表明,VPS16、KIF1A、TOM1的mRNA在食管癌组织中表达高于癌旁组织(n=60)且与ARL5B表达呈正相关。结论食管癌中ARL5B存在高表达,与肿瘤淋巴结转移、临床分期及预后有关;ARL5B可能通过多种分子机制调控参与食管癌进展。

老年结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达变化和意义

目的探讨染色体凝缩蛋白复合物I(NCAP)D2、Krüppel样因子(KLF)5蛋白及跨膜受体蛋白Notch1 mRNA对老年结肠癌患者预后的预测价值。方法选取老年结肠癌患者85例,术中采集肿瘤组织和正常组织(距离肿瘤组织5 cm以上),Western印迹检测组织标本中NCAPD2、KLF5蛋白表达,反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测组织标本中Notch1 mRNA表达。收集老年结肠癌患者的人口学特征和临床病理资料;以患者出院时日期为随访起点,进行3年随访,记录患者生存情况,分为预后良好组(生存),不良组(死亡)。结果老年结肠癌患者结肠癌组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于正常组织(P<0.01)。NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平在不同病理分期、分化程度、淋巴结转移情况、远端转移情况的结肠癌患者差异均有统计学意义(P<0.01);其中,浸润程度T3~T4、有淋巴结转移、有远端转移的结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于浸润程度T1~T2、无淋巴结转移、无远端转移的结肠癌患者(P<0.01);随着分化程度的降低,结肠癌患者NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平逐渐升高(P<0.01)。不良组NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平明显高于预后良好组(P<0.01)。构建受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA表达水平对老年结肠癌患者预后均具有较高的预测价值(P<0.01);各指标联合检测对老年结肠癌患者预后的预测价值最高。结论老年结肠癌患者肿瘤组织中NCAPD2、KLF5蛋白及Notch1 mRNA高表达,且与浸润程度、分化程度及转移情况密切相关,联合检测可用于患者预后评估。

急性缺血性脑卒中患者血清CKLF1、claudin-5预测溶栓后出血转化的价值及与短期预后的关系

目的分析急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清趋化素样因子1(CKLF1)、claudin-5预测静脉溶栓后出血转化(HT)的价值及与短期预后的关系。方法选取2019年7月—2021年1月武汉市中医医院神经内科收治接受静脉溶栓的AIS患者321例为AIS组,根据是否发生HT分为HT亚组63例和非HT亚组258例。患者出院后3个月根据改良Rankin量表(mRS)评分再分为预后不良亚组88例和预后良好亚组233例,另选取医院同期体检健康志愿者60例为健康对照组。采用酶联免疫吸附法检测血清CKLF1、claudin-5水平,比较各组血清CKLF1、claudin-5水平。采用多因素Logistic回归分析AIS患者静脉溶栓后HT的影响因素;Spearman相关性分析AIS患者血清CKLF1、claudin-5水平与mRS评分的相关性;受试者工作特征(ROC)曲线分析血清CKLF1、claudin-5水平对AIS患者静脉溶栓后HT的预测价值。结果与健康对照组比较,AIS组血清CKLF1、claudin-5水平升高(Z=11.953、11.069,P均<0.001)。AIS患者321例静脉溶栓后HT发生率为19.63%(63/321)。心源性栓塞、美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分升高和血清CKLF1、claudin-5升高为AIS患者静脉溶栓后HT的独立危险因素[OR(95%CI)=1.104(1.047~1.165)、4.377(2.011~9.526)、1.195(1.106~1.292)、1.039(1.024~1.052)]。AIS患者321例静脉溶栓后3个月预后不良发生率为27.41%(88/321)。与预后良好亚组比较,预后不良亚组血清CKLF1、claudin-5水平升高(Z=7.145、7.279,P均<0.001)。AIS患者血清CKLF1、claudin-5水平与mRS评分呈正相关(rs=0.517、0.491,P均<0.001)。血清CKLF1、claudin-5水平单独及二者联合预测AIS患者静脉溶栓后HT的曲线下面积(AUC)分别为0.769、0.772、0.876,二者联合预测的AUC大于CKLF1、claudin-5单独预测(Z=2.542、3.786,P均<0.001)。结论血清CKLF1、claudin-5水平升高是AIS患者静脉溶栓后HT的独立危险因素,二者联合预测AIS患者静脉溶栓后HT的价值较高,且血清CKLF1、claudin-5水平升高与AIS患者短期预后不良有关,有望成为AIS患者静脉溶栓后HT和短期预后的辅助评估指标。

趋化素样因子超家族成员5研究进展

趋化素样因子超家族(CMTM)是北京大学人类疾病基因研究中心在国际上首次报道的新基因家族,CMTM5是该家族成员,其基因编码产物具有潜在的四次跨膜蛋白结构,是一个新的肿瘤抑制基因。研究表明,CMTM5广泛表达于人类正常组织,在大多数肿瘤细胞系和组织中表达明显下调或不表达,恢复其表达可抑制肿瘤细胞的增殖、黏附和迁移等生物行为。CMTM5抗肿瘤活性的机制尚不明确,可能参与了多个与癌症发生发展密切相关的信号通路。对CMTM5与肿瘤发生发展机制的进一步研究具有重要意义,其有望成为肿瘤基因治疗的新靶标。

炎症细胞因子刺激下胰岛素样生长因子结合蛋白5对牙周膜干细胞成骨分化的积极效应

背景:既往已有研究证实胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin-like growth factor-binding protein 5,IGFBP5)在牙源性干细胞中高表达,并通过激活多种信号通路发挥作用。然而,在炎症微环境条件下IGFPB5是否参与调控间充质干细胞骨向分化尚不清楚。目的:探讨IGFBP5在炎症微环境下对牙周膜干细胞成骨分化的影响及分子调控机制,为炎症微环境下牙周组织再生寻找治疗靶点。方法:(1)采用酶消化法分离培养人牙周膜干细胞,通过流式细胞术检测其表面抗原标志物;(2)分别以肿瘤坏死因子α、白细胞介素17模拟体内炎症微环境作用,并建立IGFBP5稳定敲低的细胞系,然后进行成骨诱导分化,检测碱性磷酸酶活性、成骨分化相关标志性基因及相关的组蛋白去甲基化酶的表达。该研究的实施符合天津医科大学口腔医院的相关伦理要求。结果与结论:(1)加入肿瘤坏死因子α、白细胞介素17后,牙周膜干细胞成骨能力降低,具体表现为碱性磷酸酶活性及成骨分化相关基因OCN、BSPmRNA表达显著降低;(2)基因沉默IGFBP5进一步加重了肿瘤坏死因子α、白细胞介素17对牙周膜干细胞的成骨抑制作用,表现在碱性磷酸酶活性及成骨分化相关基因OCN、BSP mRNA表达进一步降低;(3)炎症因子刺激及基因沉默IGFBP5同时影响了组蛋白去甲基化酶KDM2A、KDM3B、KDM5B、JMJD6 mRNA的表达;(4)结果提示IGFBP5在炎症微环境下对牙周膜干细胞的成骨分化过程可能起到积极作用。

老年冠心病血CC类趋化因子配体5和高敏C-反应蛋白水平与冠状动脉粥样硬化程度的相关性研究

目的探讨老年冠心病血浆中CC类趋化因子配体5(CCL5)和高敏C-反应蛋白(hcRP)与冠状动脉粥样硬化程度之间的相关性,为冠心病诊治提供参考。方法根据临床表现及冠状动脉造影结果,将330例患者分为2组:对照组(n=82)和冠心病组(n=248);根据Gensini积分再将冠心病组分为2个亚组:轻度狭窄组(n=176)和重度狭窄组(n=72)。测定并比较各组冠状动脉粥样硬化程度、血CCL5和hs·CRP水平。结果与对照组比较,冠心病组血浆CCL5及hCRP水平明显升高[(8.9±1.9)ng/mL vs(10.0±1.4)ng/mL,(2.3±1.9)ng/mL vs(5.1±2.2)ng/mL],差异均有统计学意义(均P<0.05);轻度狭窄组、重度狭窄组血浆CCL5和hCRP水平呈升高趋势;与轻度狭窄组比,重度狭窄组中hCRP和CCL5水平明显升高(P<0.05,P<0.01)。多重线性回归分析显示,血浆CCL5水平与动脉粥样硬化程度呈独立正相关,P<0.05。结论血清CCL5和hCRP能反映冠心病患者冠状动脉狭窄程度,血浆CCL5与冠状动脉粥样硬化程度呈独立正相关,可能成为冠心病诊治的参考指标。

IGFBP5增龄性表达促进胸腺上皮细胞线粒体自噬和凋亡

目的 探讨在胸腺上皮细胞中随年龄增长而上调表达的胰岛素样生长因子结合蛋白5(Insulin Like Growth Factor Binding Protein 5,IGFBP5)在胸腺衰退中的作用和机制。方法 使用基因差异表达分析方法从已发表人胸腺基质细胞单细胞数据集(GSE147520)中筛选出随年龄增长表达上调程度最高的基因IGFBP5;Mfuzz趋势分析筛选出与IGFBP5具有相同表达趋势的基因;富集分析注释与IGFBP5共趋势基因集;使用蛋白序列比对工具研究IGFBP5蛋白氨基酸序列的人鼠同源性;使用NIH基因数据库研究IGFBP5在人鼠器官组织中表达模式;免疫组化研究IGFBP5在不同年龄C57/BL6小鼠胸腺中的表达模式;构建IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系;透射电镜观察IGFBP5过表达胸腺上皮细胞系中线粒体的形态变化;免疫蛋白印记(Western Blot, WB)对线粒体及全细胞组分线粒体自噬标志物微管相关蛋白1B(Microtubule Associated Protein 1 Light Chain 3 Beta, LC3B)、PTEN诱导激酶1(Pten Induced Kinase 1, PINK1)、Parkin泛素蛋白连接酶(Parkin Rbr E3 Ubiquitin Protein Ligase, Parkin)、BCL2互作蛋白3(BCL2 Interacting Protein 3, BNIP3),细胞凋亡标记物活化型胱天蛋白酶3 (Cleaved-Caspase3)表达水平进行检测;细胞双重免疫荧光对线粒体标志物与线粒体探针(MitoTracker)胞内定位进行检测;使用流式细胞术(Flow Cytometry, FCM)对细胞系凋亡水平进行检测。结果 IGFBP5是人胸腺上皮细胞中随年龄增长表达上调程度最大的基因,与其具有共同表达模式的基因集显著富集在线粒体相关通路上。人与小鼠IGFBP5蛋白序列高度保守,其在人、小鼠多器官组织中表达模式相近,且IGFBP5在人、小鼠胸腺中均呈现中等表达水平;此外,IGFBP5在人和小鼠胸腺上皮中随年龄增长表达升高;在IGFBP5过表达小鼠胸腺上皮细胞系中,透射电镜结果表明线粒体自噬体增多,WB结果表明线粒体组分和细胞组分LC3B、PINK1、Parkin蛋白表达水平上调,BNIP3无明显差异;细胞双重免疫荧光结果表明LC3B、PINK1、Parkin蛋白胞质表达增多且与线粒体共定位;WB表明IGFBP5过表达鼠胸腺上皮细胞系中细胞凋亡标志物Cleaved-Caspase3水平升高;FCM表明IGFBP5过表达细胞系凋亡细胞比例增加。结论 人、小鼠胸腺上皮细胞中随年龄增长而表达升高的IGFBP5促进线粒体自噬和细胞凋亡,从而导致胸腺上皮细胞减少和胸腺功能衰退,因此,IGFBP5可成为干预胸腺衰老、重构人体免疫力的潜在靶标。