血清转录因子样蛋白5预测子宫内膜癌及其预后的临床价值

目的探讨血清转录因子样蛋白5(TCFL5)预测子宫内膜癌及其预后的临床价值。方法选取2016年1月至2018年6月邯郸市妇幼保健院收治的120例子宫内膜癌患者作为试验组,选取同期同院行健康体检的120名女性作为对照组。比较TCFL5在血清、子宫内膜癌组织、不同临床分期的表达水平,采用受试者工作特征(ROC)曲线的曲线下面积(AUC)分析血清TCFL5表达水平对子宫内膜癌的预测价值,采用单因素及多因素Cox回归分析血清TCFL5表达水平对子宫内膜癌的预后影响。结果试验组血清TCFL5表达水平高于对照组(P<0.001);与癌旁组织比较,TCFL5在癌组织中高表达(P<0.001);临床分期越晚,TCFL5表达水平越高(P<0.05)。TCFL5表达水平对子宫内膜癌的预测性能较高(AUC=0.907,95%CI:0.878~0.937)。单因素及多因素Cox回归分析显示,年龄和TCFL5表达水平是子宫内膜癌预后的独立影响因素(P<0.05)。结论TCFL5在子宫内膜癌患者血清中表达水平显著升高,其可作为诊断子宫内膜癌的标志物,且对患者预后具有较好的预测价值。

微小RNA-181c-5p和Kruppel样因子6在子宫内膜样腺癌组织中的表达及其与患者临床病理特征关系研究

目的:检测子宫内膜样腺癌组织中微小RNA-181c-5p(miR-181c-5p)和Kruppel样因子6(KLF6)的表达,探讨其相关性及临床意义。方法:选择49例子宫内膜样腺癌行手术治疗的患者作为观察组,选择49例增生期子宫内膜组织作为对照组。应用实时荧光定量PCR法检测术后组织中miR-181c-5p的表达,应用免疫组化方法检测KLF6的表达。应用线性相关分析观察miR-181c-5p和KLF6的关系,应用K-M生存分析观察miR-181c-5p和KLF6与术后生存时间的关系。结果:观察组miR-181c-5p表达量明显低于对照组(P<0.05),KLF6的阳性率明显低于对照组(P<0.05)。观察组miR-181c-5p与KLF6表达与肿瘤肌层浸润深度、宫颈管累犯及病理分级密切相关(均P<0.05),且两者具有正相关性,两者的表达与术后生存时间相关(均P<0.05)。结论:子宫内膜样腺癌中miR-181c-5p和KLF6均异常表达且具有正相关性,联合检测miR-181c-5p和KLF6的表达对判断肿瘤预后可能有一定价值。

老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5及Kruppel样因子9表达与患者复发的相关性

目的探讨老年鼻咽癌癌组织中Kruppel样因子5(KLF5)、Kruppel样因子9(KLF9)表达与患者复发间的关系。方法回顾性分析2016年5月至2018年5月湖南省脑科医院收治的263例老年鼻咽癌患者的临床资料,患者治疗后均行5年院外随访,观察患者是否出现复发。通过Western blotting技术检测老年鼻咽癌患者癌组织中KLF5、KLF9相对蛋白表达量,比较复发患者与非复发患者的基础资料信息[性别、年龄、国际抗癌联盟(UICC)分期、病理类型、疗程延长时间、放疗剂量、是否放疗联合化疗、是否鼻腔受侵、是否口咽受侵、是否颅底骨质受侵、是否颅内受损、是否颅神经损伤]及KLF5、KLF9差异。通过多因素logistic逐步回归分析老年鼻咽癌患者复发的危险因素。采用SPSS 22.0软件进行数据分析。根据数据类型,组间比较分别采用t检验及χ^(2)检验。结果263例老年鼻咽癌患者治疗结束后行5年院外随访,复发患者共27例(10.27%)。与非复发组患者相比,复发组患者UICC分期Ⅲ~Ⅳ期、未行放疗联合化疗、颅底骨质受侵、颅神经损伤占比较高,差异有统计学意义(均P<0.05)。与非复发组患者相比,复发组患者KLF5、KLF9相对蛋白表达量下降,差异有统计学意义(P<0.05)。对KLF5、KLF9进行受试者工作特征(ROC)曲线分析,其对老年鼻咽癌患者复发有较好的预测价值,且联合预测价值更高,曲线下面积分别为0.800、0.790、0.894,且均有P<0.05。多因素logistic回归分析显示,UICC分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=3.420,95%CI 1.715~6.820)、未行放疗联合化疗(OR=1.434,95%CI 1.106~1.859)、颅底骨质受侵(OR=2.790,95%CI 1.337~5.822)、颅神经损伤(OR=1.249,95%CI 1.026~1.520)、KLF5<2.495(OR=4.453,95%CI 1.469~13.498)、KLF9<0.305(OR=2.719,95%CI 1.604~4.609)是老年鼻咽癌患者复发的危险因素。结论老年鼻咽癌患者癌组织内KLF5、KLF9表达下降,且KLF5、KLF9表达为患者复发的影响因素。

Kruppel样因子14介导的JAK-STAT信号通路对非小细胞肺癌预后的影响

目的探讨Kruppel样因子14(KLF14)介导的Janus激酶-信号转导子与转录激活子(JAKSTAT)信号通路对非小细胞肺癌(NSCLC)预后的影响。方法收集2018年1月至2019年9月本院手术切除的80例NSCLC组织和25例癌旁非肿瘤组织。患者随访至2023年4月结束。采用免疫组织化学检测组织中KLF14表达,根据KLF14表达的中值水平将患者分为高表达组和低表达组。通过在A549细胞中转染KLF14、JAK1过表达质粒和在HCC827细胞中转染KLF14、JAK1特异性短发夹RNA(shKLF14、shJAK1)来过表达或敲低KLF14、JAK1。采用细胞克隆形成试验分析细胞的增殖活力。Transwell分析细胞的迁移、侵袭情况。结果与癌旁正常组织相比,KLF14在NSCLC组织中表达降低(P<0.001)。KLF14的低表达与肿瘤直径>3 cm、淋巴结转移、临床分期Ⅲ期显著相关(P<0.05)。在高KLF14表达组和低KLF14表达组之间的总存活率有显著差异,低KLF14表达的患者预后不良(P<0.05)。KLF14过表达后,A549细胞的增殖能力、迁移和侵袭细胞数均显著降低(P<0.05),而KLF14敲低后,HCC827细胞的增殖能力、迁移和侵袭细胞数均显著增加(P<0.05)。与Vector+KLF14组相比,JAK1+KLF14组A549细胞的集落数、迁移和侵袭数显著增加(P<0.05);而与shNC+shKLF14组相比,shJAK1+shKLF14组HCC827细胞的集落数、迁移和侵袭数显著降低(P<0.05)。结论KLF14低表达与NSCLC患者较差的总生存期相关。KLF14上调显著抑制肺癌细胞在体外的增殖、转移能力,其作用机制可能与抑制JAK-STAT信号通路有关。

O-GlcNAc转移酶介导的Kruppel样因子5 O-GlcNAc糖基化修饰调控细胞周期素D1参与结直肠癌发生、发展实验研究

目的:探讨O-GlcNAc转移酶(OGT)通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定Kruppel样因子5(KLF5)蛋白并上调细胞周期素D1(CCDN1)表达参与结直肠癌(CRC)发生、发展的分子机制。方法:采用生物信息学方法分析KLF5 mRNA和蛋白在CRC组织中的表达。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测CRC细胞中KLF5的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。通过生物信息学方法分析KLF5的靶基因和潜在结合位点,并通过双荧光素酶实验证实KLF5蛋白可与CCDN1结合,采用RT-qPCR检测KLF5对CCDN1 mRNA的影响。抑制KLF5并过表达CCDN1,分析KLF5是否通过正调控CCDN1促进细胞增殖和促进细胞进入G 1期。采用生物信息学分析KLF5蛋白是否存在O-GlcNAc糖基化位点,OGT mRNA和蛋白在结直肠癌组织中的表达以及OGT和KLF5表达的相关性。使用OGT抑制剂OSMI-1处理CRC细胞,蛋白质免疫印迹法(Western blot)分析KLF5蛋白表达,O-GlcNAc糖基化蛋白表达水平通过免疫荧光实验检测。并用Western blot法检测OSMI-1和放线菌酮(CHX)处理后KLF5蛋白的稳定性。最后抑制OGT并过表达KLF5,分析OGT是否通过正调控KLF5促进CCDN1表达。结果:KLF5 mRNA和蛋白在CRC中高表达。KLF5在CRC细胞中高表达并可促进细胞增殖和促进细胞进入G 1期。CCND1是KLF5的靶基因并可与CCND1靶向结合。KLF5通过正调控CCND1促进细胞增殖和促进细胞由G 1期向S期转化。生物信息学分析证实KLF5蛋白存在O-GlcNAc糖基化位点。OGT mRNA和蛋白在CRC中高表达,并且OGT和KLF5表达水平呈正相关。抑制OGT表达可降低O-GlcNAc糖基化蛋白和KLF5蛋白水平,并可降低KLF5蛋白的稳定性。OGT通过正调控KLF5上调CCND1表达。结论:KLF5通过正调控CCND1促进CRC细胞增殖,并促进细胞进入G 1期。OGT通过O-GlcNAc糖基化修饰稳定KLF5并上调CCND1表达。

微小RNA-98-5p靶向Kruppel样转录因子9对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用

目的探讨微小RNA(miR)-98-5p靶向Kruppel样转录因子9(KLF9)对大鼠心肌缺血/再灌注(MI/R)损伤的保护作用。方法50只大鼠随机分为假手术组、模型组、miR-98-5p agomir组、agomir-NC组及miR-98-5p agomir+pcDNA-3.1-KLF9组,每组10只。通过冠状动脉结扎法建立MI/R注模型。HE染色观察心肌组织病理情况;TUNEL检测心肌组织细胞凋亡情况;ELISA检测血清肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;Real-time PCR检测心肌组织miR-98-5p、KLF9 mRNA表达水平;Western blotting检测心肌组织KLF9、Bax和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-98-5p与KLF9的关系。结果与假手术组相比,模型组大鼠心肌细胞排列较乱,出现坏死;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量均升高,心肌组织miR-98-5p表达水平下降,KLF9 mRNA和蛋白及p-JAK2和p-STAT3蛋白表达均升高(P<0.05)。过表达miR-98-5p后,大鼠心肌细胞排列较为整齐,心肌细胞坏死减少;心肌组织细胞凋亡率、血清CK、CK-MB、LDH含量及心肌组织p-JAK2、p-STAT3蛋白表达均下降(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果验证KLF9是miR-98-5p的靶基因。过表达KLF9逆转了miR-98-5p agomir对心肌损伤大鼠产生的作用。结论MiR-98-5p靶向KLF9改善MI/R大鼠心肌损伤,其机制可能与miR-98-5p调控JAK2/STAT3信号通路抑制心肌细胞凋亡相关。

Kruppel样转录因子5对食管鳞状上皮转分化绒毛蛋白表达的影响

目的 探讨脱氧胆酸诱导食管鳞状上皮细胞肠化生过程中，Krüppel样转录因子（KLF）5对绒毛蛋白的调节作用。 方法 采用免疫组织化学法检测KLF5和绒毛蛋白在人正常食管鳞状上皮组织（20份）、反流性食管炎组织（59份）、Barrett食管组织（21份）中的表达；使用HET-1A细胞，分别用脱氧胆酸处理2、4、8、12 h，KLF5 RNA干扰（小干扰RNA）下调和慢病毒过表达KLF5后，PCR、蛋白质印迹法检测其KLF5、绒毛蛋白mRNA及其蛋白质的表达。计数资料采用卡方检验比较，计量资料采用配对t检验分析比较。 结果 免疫组织化学法显示，KLF5、绒毛蛋白在正常食管黏膜未见表达，在食管炎组织呈部分弱表达[分别为27.1%（16/59）和20.3%（12/59）]，而在Barrett食管组织中表达明显增强[分别为85.7%（18/21）和100.0%（21/21），差异均有统计学意义（χ2＝36.576、56.765, P均〈0.01）]。200 μmol/L脱氧胆酸分别处理HET-1A细胞2 h后，与未加脱氧胆酸的对照组（0 h）相比，KLF5、绒毛蛋白mRNA（t＝－16.64, －11.85）及其蛋白质（t＝－30.80, －20.70）表达量增加（P均〈0.01）。采用RNA干扰技术下调KLF5表达可阻止胆酸诱导的绒毛蛋白表达，采用基因转染技术上调KLF5表达后，可同时上调绒毛蛋白在HET-1A细胞中的表达。 结论 在胆酸介导的食管鳞状上皮细胞肠化生过程中，KLF5对绒毛蛋白表达具有调节作用，可能参与Barrett食管的发生。

急性缺血性脑卒中患者血清Kruppel样转录因子2水平表达与脑梗死体积及预后的相关性研究

目的 研究急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者血清Kruppel样转录因子2(kruppel-like factor 2,KLF2)水平表达与脑梗死体积及预后的关系,探讨KLF2对AIS脑梗死体积及预后不良的预测价值,并分析KLF2诱导AIS发生的可能机制。方法 收集2021年4月~2022年11月在空军军医大学第二附属医院收治的141例AIS患者为研究对象,并收集同期行健康体检者50例作为对照。根据Pullicino公式计算AIS脑梗死体积,分为小梗死灶组、中梗死灶组和大梗死灶组;根据改良Rankin量表(modified rankin scale,mRS)评分分为预后良好组和预后不良组;采用Pearson相关性分析血清KLF2表达与AIS患者脑梗死体积、预后及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、鞘氨醇激酶1(sphingosine kinase 1,SphK1)和鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)表达的相关性;绘制ROC曲线评估血清KLF2对AIS预后不良的预测价值。结果 AIS组患者血清KLF2(194.37±32.37pg/ml)水平显著低于对照组(242.85±17.39pg/ml);IL-6(13.70±2.89pg/ml),S1P(432.58±101.37pg/ml)和SphK1(2.65±0.58pg/ml)水平显著高于对照组(9.92±2.45pg/ml,259.15±78.24pg/ml,1.48±0.36 pg/ml),差异具有统计学意义(t=10.076,-8.253,-10.986,-13.367,均P <0.05)。小梗死灶组、中梗死灶组和大梗死灶组血清KLF2水平分别为217.69±33.14pg/ml,196.48±29.53pg/ml和168.94±31.62pg/ml,差异有统计学意义(F=25.753,P<0.001)。AIS预后良好组血清KLF2水平为211.83±28.46pg/ml,明显高于预后不良组的170.12±25.34pg/ml,差异有统计学意义(t=8.982,P<0.001)。血清KLF2水平与AIS脑梗死体积、预后及IL-6,SphK1水平呈负相关性(r=-0.607,-0.586,-0.480,-0.522,均P<0.05),与S1P水平无明显相关性(r=0.172,P>0.05);血清SphK1与S1P水平呈明显正相关(r=0.480,P<0.05)。血清KLF2预测AIS脑梗死体积(中~大梗死灶)和预后不良的AUC值分别为0.871和0.889,当截断值分别取206.1 pg/ml和192.37 pg/ml时,诊断灵敏度和特异度较高。结论 AIS血清中KLF2表达降低与患者脑梗死体积及预后关系密切,可作为AIS病情评估及判断预后不良的有效生物指标。血清KLF2表达与IL-6,SphK1水平存在明显相关性,KLF2可能调控SphK1/S1P途径参与神经炎症反应,介导AIS发生、发展,为临床研究及治疗提供了新的靶标。

Krüppel样因子5在心血管疾病中的研究进展

心血管疾病是导致全球非感染性疾病死亡的首要原因,心血管疾病的发生给家庭和社会带来了极大的负担。Krü-ppel样因子(KLF)5是与DNA结合的转录因子,参与调节细胞发育、代谢等其他细胞机制。近年来研究发现,KLF5在心血管疾病如动脉粥样硬化、缺血再灌注、心肌肥厚、心肌代谢、糖尿病心肌病中的调控上也发挥了重要作用。我们综述了KLF5在心血管疾病中的研究进展,为以KLF5为靶点的心血管疾病治疗提供了新的策略。

miR-216a抑制Kruppel样转录因子9调控核因子-κB信号通路对肾小管上皮细胞急性肾损伤的影响

目的探讨miR-216a对Kruppel样转录因子9(KLF9)的调控作用,及其对缺氧-复氧(H/R)诱导的肾小管上皮细胞急性肾损伤的影响。方法将293T细胞(人肾上皮细胞系)分为KLF9野生型载体、miR-216a mimics(类似物)+KLF9野生型载体、miR-216a NC(阴性对照)+KLF9野生型载体,利用荧光素酶报告基因验证miR-216a与KLF9的结合关系。H/R诱导大鼠肾脏近端肾小管上皮细胞,并转染miR-216a mimics,将大鼠肾脏近端肾小管上皮细胞系RPTC分为对照组,H/R组,H/R+miR-216a NC组,H/R+miR-216a mimics组。检测miR-216a、KLF9、核因子-κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、血管生长因子A(VEGF-A)、尿激酶型纤溶酶原激活物(u PA)mRNA表达。结果 miR-216a mimics+KLF9野生型共转染组的荧光素酶活性显著低于KLF9野生型组、miR-216a NC+KLF9野生型共转染组的荧光素酶活性(P<0.05)。与对照组比较,H/R组和H/R+miR-216a NC组miR-216a[(0.56±0.11)及(0.48±0.06)比(1.00±0.00)]表达量下调(P<0.05),KLF9[(2.77±0.19)及(2.79±0.10)比(1.00±0.00)]、NF-κB p65[(2.35±0.02)及(2.42±0.27)比(1.00±0.00)]、TNF-α[(2.40±0.21)及(2.44±0.11)比(1.00±0.00)]、VEGF-A[(4.17±0.07)及(4.19±0.11)比(1.00±0.00)]、uPA[(2.28±0.05)及(2.38±0.13)比(1.00±0.00)]mRNA表达量上调(P<0.05);与H/R组和H/R+miR-216a NC组比较,H/R+miR-216a mimics组中miR-216a[(31.75±2.40),F=45.87,P=0.000]表达量上调,KLF9[(1.96±0.04),F=13.98,P=0.005]、NF-κB p65[(2.15±0.15),F=14.89,P=0.001]、TNF-α[(1.79±0.10),F=18.90,P=0.000]、VEGF-A[(3.65±0.04),F=15.94,P=0.000]、uPA[(2.06±0.11),F=14.22,P=0.001]mRNA表达量下调(P<0.05)。结论 miR-216a过表达通过靶向下调KLF9表达进而抑制NF-κB信号通路,降低肾小管上皮细胞急性肾损伤。

Kruppel样转录因子8的结构和功能多样性

Kruppel样转录因子8(KLF8)是KLFs家族中的一员,其在羧基端含有3个保守的C2H2锌指结构及氨基端可变的转录调节结构域,转录调节结构域含PVALS/T基序,在氨基端和羧基端内存在核定位序。KLF8在细胞侵袭和上皮-间质转化、细胞周期循环、细胞致癌性转化及各种肿瘤(肝癌、口腔癌、卵巢癌、胃癌)发生发展中发挥重要作用。

胃腺癌中Kruppel样因子4、5和增殖细胞核抗原表达

目的应用免疫组化方法检测胃腺癌术后组织中Kruppel样因子(KLF)4、5和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达特征。方法 51例经病理医师确诊的胃腺癌术后组织作为观察组,40例距肿物边缘>5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织作为对照组。两组KLF4、KLF5和PCNA蛋白表达应用免疫组化检测。结果两组KLF4、KLF5和PCNA表达差别有显著性。观察组中KLF4、KLF5和PCNA的阳性率均与浸润深度相关,KLF4的阳性率与脉管内瘤栓相关,KLF5的阳性率与肿瘤的最大径、脉管瘤栓相关,PCNA的阳性率与肿瘤的最大径相关。线性相关分析显示观察组中KLF5和PCNA具有正相关性,其他指标间未见明显相关性。结论胃腺癌术后组织中KLF4、KLF5和PCNA异常表达,三者异常表达对肿瘤性的进展过程起一定的作用。KLF5可能对细胞增殖有影响。

转录因子KLF6对大鼠趋化因子CCL5基因启动子活性的影响及其可能的结合部位

目的:构建大鼠趋化因子CCL5基因启动子(全长和截短)荧光素酶报告质粒,检测大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)中过表达Kruppel样转录因子6(Kruppel-like factor 6,KLF6)对CCL5基因启动子活性的影响。同时,筛选KLF6与CCL5基因启动子区的结合位点。方法:采用PCR技术,将扩增出的大鼠CCL5基因启动子全长序列(-1744nt^-14nt)插入荧光素酶报告基因载体p GL3-basic中,获得CCL5基因启动子全长荧光素酶报告质粒(p GL3-CCL5-FL)。然后,将p GL3-CCL5-FL与大鼠野生型KLF6表达质粒(p IRES2/KLF6)共转染GMC,测定其荧光素酶活性。另用生物信息学软件预测CCL5基因启动子上KLF6潜在的结合位点,并据此构建出4个CCL5基因启动子截短的荧光素酶报告质粒(即p GL3-CCL5-1~4)。将上述CCL5基因启动子全长和各截短的荧光素酶报告质粒分别与KLF6过表达质粒共转染GMC,再行荧光素酶活性的测定,初筛KLF6可能的结合部位。结果:菌液PCR以及核酸测序结果证实,上述所有启动子荧光素酶报告质粒均构建成功。p GL3-CCL5-FL和p IRES2/KLF6共转染GMC结果显示,CCL5基因启动子的活性显著增强。p GL3-CCL5-FL、p GL3-CCL5-1~4分别与p IRES2/KLF6共转染GMC后发现,p GL3-CCL5-4的启动活性显著降低。提示KLF6可能结合在CCL5基因启动子的-343nt^-191nt区域。结论:本实验成功构建了大鼠CCL5基因启动子全长及截短荧光素酶报告质粒,并初步筛查出KLF6在CCL5基因启动子上可能的结合部位在-343nt^-191nt区域。

KLF5转录因子对预测乳癌肺转移的临床意义

目的探讨Kruppel样因子5(KLF5)及其下游基因在乳癌组织中的表达,分析其与乳癌病理特点的相关性及在预测乳癌肺转移中的临床意义。方法应用免疫组织化学方法,检测乳癌肺转移乳癌组织(35例)、乳癌无肺转移乳癌组织(35例)、乳腺良性肿瘤组织(20例)及乳癌肺转移原发灶癌旁正常组织(20例)KLF5、肿瘤坏死因子-α诱导蛋白2(TNFAIP2)和β-连环蛋白(β-catenin)表达,分析各因子表达与乳癌肺转移病人临床病理特征间的关系,Kaplan-Meier生存分析模型分析各因子表达与乳癌病人5年无远处转移生存率(DFS)及总生存率(OS)的相关性,单因素卡方检验和多因素二元Logistic回归模型分析KLF5、TNFAIP2和β-catenin对乳癌肺转移风险的预测价值。结果乳癌肺转移组KLF5(χ^(2)=25.881,P<0.01)、TNFAIP2(χ^(2)=23.669,P<0.01)和β-catenin(P=0.002)阳性表达明显高于其他3组,乳癌肺转移组KLF5、TNFAIP2、β-catenin表达与组织学分级、脉管内癌栓有关(P=0.001~0.048);与年龄、分子亚型、ER、PR、HER-2、Ki67及生存状态无关(P>0.05)。Kaplan-Meier生存分析显示,乳癌病人KLF5、TNFAIP2和β-catenin表达与DFS(χ^(2)=5.371~7.084,P<0.05)、OS(χ^(2)=4.152~7.670,P<0.05)显著相关。单因素和多因素分析表明,KLF5表达是乳癌发生肺转移的独立危险因素(HR=3.246,95%CI=1.197~12.046,P=0.034)。结论 KLF5、TNFAIP2和β-catenin在乳癌肺转移乳癌组织中高表达且KLF5可能为预测乳癌肺转移风险的分子标志物。

Kuippel样因子6经活化转录因子4通路对晶状体上皮细胞凋亡的调控作用

目的以活化转录因子4（ATF4）为靶点，探讨Krüppel样因子6（KLF6）调控紫外线B（UVB）诱导的晶状体上皮细胞（HLECs）凋亡的分子机制。方法HLECs系（HLE-B3）进行常规培养，采用脂质体转染法将构建的真核表达质粒pEGFP-C2-ATF4转染HLECs作为UVB＋ATF4转染组，并用能量密度为20 mJ/cm2的UVB照射细胞；未转染的ATF4细胞作为正常对照组。采用苏木精－伊红染色法和Hoechst染色法观察ATF4对HLECs细胞形态学的影响。将培养的细胞分为KLF6转染组及相应空质粒对照组，小干扰KLF6（siKLF6）组（转染pSilencer-KLF6质粒）及相应的空载体对照组（转染pSilencer空质粒），采用Western blot法检测细胞中ATF4蛋白的相对表达量。将培养的细胞分为4个组，联合空载体组HLECs联合转染pEGFP-C2空载体和pSilencer空载体；KLF6＋pSilencer空质粒组HLECs联合转染pEGFP-C2-KLF6和pSilencer空载体；小干扰ATF4（siATF4）＋pEGFP-C2组HLECs联合转染pEGFP-C2空载体和pSilencer-ATF4；KLF6＋siATF4组HLECs联合转染pEGFP-C2-KLF6和pSilencer-ATF4，各组细胞均暴露于UVB 200 s，采用ELISA法检测上述各组HLECs凋亡值。结果正常对照组培养的HLECs大小均匀，排列整齐，细胞核呈卵圆形，数量多且完整；UVB照射后部分细胞核固缩，细胞间隙增大，少数细胞出现核分裂；UCB＋ATF4转染组细胞数量减少，多数细胞出现核固缩和核分裂。UVB＋ATF4转染组细胞中ATF4蛋白表达条带灰度明显强于UVB＋空载体组，ATF4蛋白相对表达量分别为0.99±0.06和0.13±0.02，差异有统计学意义（t＝23.13，P〈0.01）。KLF6转染组细胞中KLF6和ATF4蛋白相对表达量均明显高于其空载体对照组，siKLF6组细胞中KLF6和ATF4蛋白相对表达量均明显低于其空载体对照组，差异均有统计学意义（均P〈0.01）。ELISA检测显示ATF4转染组HLECs凋亡值为1.37±0.11，明显高于正常对照组的0.31±0.11，差异有统计学意义（t＝8.034，P＝0.001）；KLF6＋pSilencer空质粒组细胞凋亡值明显高于联合空载体组，siATF4＋pEGFP-C2组细胞凋亡值明显低于联合空载体组，差异均有统计学意义（P〈0.01，P＝0.02）；KLF6＋siATF4组细胞凋亡率明显低于KLF6＋pSilencer空质粒组，差异有统计学意义（P〈0.01）。 结论KLF6通过活化ATF4促进UVB诱导的HLECs凋亡，ATF4基因沉默可使细胞凋亡值明显降低，因此ATF4可作为KLF6调控HLECs凋亡的靶因子，也是KLF6调控LECs凋亡的主要生物机制之一。

胃肠富集Kruppel样因子的研究进展

胃肠富集Kruppel样因子(GKLF)是一种新发现的真核锌指蛋白转录因子.他通过调节其下游目标基因的转录表达而在细胞周期调控、细胞的增生分化中担任重要的角色,他可能与肿瘤发生、发展有着密切的联系.现就GKLF的结构、调节、功能及其与肿瘤的关系等方面的研究进展做一综述.

Kruppel样因子6基因对巨噬细胞中胆固醇蓄积的影响

背景:研究表明,Kruppel样因子6与巨噬细胞极化密切相关。但是,关于Kruppel样因子6在巨噬泡沫细胞形成中的作用尚不清楚。目的:观察Kruppel样因子6过表达对氧化低密度脂蛋白刺激下的小鼠巨噬细胞(RAW264.7)胆固醇蓄积及对ATP结合盒转运蛋白A1表达的影响。方法:取Raw264.7巨噬细胞株分别转染慢病毒空载体和重组载体p CDH-KLF6,作为对照组和Kruppel样因子6组,另取稳定感染慢病毒空载体的Raw264.7巨噬细胞株和稳定感染重组载体p CDH-KLF6的Raw264.7巨噬细胞株均加入50 mg/L氧化低密度脂蛋白共孵育48 h后,得到氧化低密度脂蛋白组和Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组。结果与结论:与对照组相比,氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平显著增加(P<0.05)。与氧化低密度脂蛋白组巨噬细胞相比,Kruppel样因子6+氧化低密度脂蛋白组细胞内总胆固醇和胆固醇酯表达水平明显下降,胆固醇酯/总胆固醇明显降低(P<0.05)。而未加入氧化低密度脂蛋白处理的2组细胞内脂质表达水平少,且对照组与Kruppel样因子6组相比,细胞内脂质表达水平差异无显著性意义。提示Kruppel样因子6可能通过促进ATP结合盒转运蛋白A1的表达,抑制氧化低密度脂蛋白诱导的RAW264.7巨噬细胞胆固醇蓄积。

Kruppel样因子4抑制巨噬细胞向破骨细胞分化介导平滑肌细胞钙化

目的探讨Kruppel样因子4(KLF4)在巨噬细胞向破骨细胞分化中的作用及相关机制。方法提取雄性C57BL/6J小鼠腹腔原代巨噬细胞并鉴定,将其分为对照组,NF-κB受体激动剂配体(RANKL)组,共刺激组(KLF4抗体和RANKL共刺激4 d),用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色检测破骨细胞分化情况,用鬼笔环肽染色检测破骨细胞成熟程度;通过骨吸收陷窝实验测破骨细胞骨吸收能力;通过qRT-PCR检测破骨细胞分化相关基因表达,用钙盐染色检测血管平滑肌细胞钙化情况。结果TRAP染色显示,TRAP阳性细胞直径约100μm,细胞核>3个。共刺激组破骨细胞数量较RANKL组明显增多(P<0.05)。与RANKL组比较,共刺激组破骨细胞成熟程度进一步升高、陷窝面积及数量升高(P<0.05)。RANKL组较对照组相关破骨基因表达明显升高(P<0.05);共刺激组较RANKL组相关破骨基因表达明显升高(P<0.05),而血管平滑肌细胞钙化明显降低(P<0.05)。结论KLF4抗体可促进巨噬细胞向破骨细胞转分化,进而抑制平滑肌细胞钙化。

干扰miR-483-5p对骨关节炎软骨细胞增殖及炎症因子的影响

目的探讨miR-483-5p对骨关节炎软骨细胞增殖及炎症因子的影响及机制。方法分离培养骨关节炎软骨细胞,将其分为Con组、miR-483-5p inhibitor组、miR-483-5p inhibitor+LPS组;四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-6水平;Western印迹检测蛋白表达。结果与Con组相比,miR-483-5p inhibitor组软骨细胞存活率明显升高,G0-G1期细胞所占比例明显降低,S期细胞所占比例明显升高,TNF-α、IL-6水平明显降低,TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。与miR-483-5p inhibitor组相比,miR-483-5p inhibitor+LPS组软骨细胞存活率明显降低,G0-G1期细胞所占比例明显升高,S期细胞所占比例明显降低,TNF-α、IL-6水平明显升高(P<0.05)。结论干扰miR-483-5p可抑制骨关节炎软骨细胞的增殖及炎症因子的释放,其机制可能与Toll样受体(TLR)4/核转录因子(NF)-κB信号通路有关。

慢性阻塞性肺疾病急性加重期合并Ⅱ型呼吸衰竭患者血清KLF5和CXCL12水平变化及意义

目的研究慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)合并Ⅱ型呼吸衰竭(Ⅱ-RF)患者血清中Kruppel样因子5(KLF5)和趋化因子配体12(CXCL12)的水平变化及意义。方法选取2020年8月至2023年1月该院收治的164例AECOPD合并Ⅱ-RF患者为观察组,根据预后情况将观察组患者分为预后良好组和预后不良组,另选取同期在该院体检的体检健康者90例作为对照组。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定所有研究对象血清KLF5、CXCL12水平;Pearson相关分析AECOPD合并Ⅱ-RF患者血清KLF5、CXCL12水平与肺功能相关指标及急性生理与慢性健康状况评价Ⅱ(APACHEⅡ)评分之间的关系;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清KLF5、CXCL12对AECOPD合并Ⅱ-RF患者预后的预测价值。结果观察组血清KLF5、CXCL12水平明显高于对照组(P<0.05)。与预后良好组相比,预后不良组血清KLF5、CXCL12水平及二氧化碳分压(PCO_(2))、APACHEⅡ评分均升高(P<0.05),第1秒用力呼气容积(FEV_(1))、第1秒呼气容积/用力肺活量(FEV_(1)/FVC%)及第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV_(1)%pred)、动脉血氧分压(PO_(2))均降低(P<0.05)。FEV_(1)、FEV_(1)/FVC、FEV_(1)%pred、PO_(2)与血清KLF5、CXCL12水平均呈负相关(P<0.05),PCO_(2)、APACHEⅡ评分与血清KLF5、CXCL12水平均呈正相关(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清KLF5与CXCL12联合检测预测AECOPD合并Ⅱ-RF患者预后不良的曲线下面积(AUC)为0.947(95%CI:0.913~0.981),明显大于KLF5、CXCL12单独检测预测的AUC[0.870(95%CI:0.816~0.923)、0.843(95%CI:0.770~0.915)],差异均有统计学意义(Z=2.413,P=0.016;Z=2.554,P=0.011)。结论AECOPD合并Ⅱ-RF患者血清KLF5、CXCL12水平均明显升高,且2项指标联合检测对AECOPD合并Ⅱ-RF患者预后不良具有良好的预测价值,因此血清KLF5、CXCL12可作为预测AECOPD合并Ⅱ-RF患者预后不良的血清标志物,指导临床诊治。