克氏原螯虾热休克蛋白70ku类似物基因的cDNA分析

根据已测序的克隆号PCI246基因序列设计2条引物,用快速扩增cDNA末端技术扩增克氏原螯虾(Procambarus clarkii)70 ku热休克蛋白同类物基因cDNA的5'端片段和3'端片段,测序得到1 184 bp基因片段,包含该基因的完整3'端,GenBank登录号AY357302,与GenBank序列号AB016836家蚕(Bombyx mori)的70 ku热休克蛋白同类物mRNA的部分片段83%同源。和果蝇(Drosophila melanogaster)的热休克蛋白同类物3的同源性最高(GenBank的登录号分别是NP_727 563,NP_511 132,NP_727 564,NP_727 565),为85%。

胃癌组织中雷帕霉素靶蛋白/70 ku核糖体蛋白S6激酶信号通路的表达及临床意义

目的 分析雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、70 ku核糖体蛋白S6激酶（P70S6K）的表达水平与胃癌常见临床病理因素的关系.方法 采用逆转录聚合酶链反应技术,蛋白质印迹技术（Western-blot）检测32例胃癌患者癌组织、癌旁胃组织以及22例非胃癌患者胃组织中磷酸化雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及磷酸化70 ku核酸体蛋白S6激酶（P70S6）K mRNA和蛋白水平的表达情况.结果 p-mTOR mRNA在胃癌组织中的表达水平（0.61±0.11）明显高于癌旁胃组织（0.43±0.10）及非胃癌胃组织（0.39 ±0.07）,p-P70S6KmRNA在胃癌组织中的表达水平（0.63 ±0.13）亦明显高于癌旁胃组织（0.45 ±0.14）及非胃癌胃组织（0.44±0.15）,差异均有统计学意义（均P＜0.05）;mTOR mRNA和P70S6K mRNA在胃癌组织中的表达呈正相关（r=0.521,P=0.033）;Western-blot检测结果也证实p-mTOR及p-P70S6K在胃癌组织中的表达高于癌旁胃组织及非胃癌胃组织;mTOR及P70S6K mRNA在胃癌组织中的表达水平与病理分期、淋巴结转移等明显相关,而与肿瘤直径、性别等无明显关系.结论 mTOR/P70S6K信号通路在胃癌组织中过度表达可能是胃癌发生的重要机制之一.

集落形成法和Western Blot法研究ELAC2的辐射增敏作用

目的研究ELAC2基因对乳腺癌细胞MCF-7辐射敏感性的影响。方法利用脂质体转染法将ELAC2基因转入MCF-7细胞,同时设立未转染MCF-7和转染空载体的MCF-7/pcDNA3作为对照。RT-PCR法检测ELAC2基因的mRNA表达;集落形成法检测ELAC2基因对肿瘤细胞辐射敏感性的影响;Western Blot法检测ELAC2、FEN-1、MGMT、MRE11及Ku-70基因的蛋白表达水平。结果 ELAC2基因的mRNA和蛋白水平在转染细胞中表达明显增高。细胞接受0、0.5、1、2、4、6Gy的X射线照射后,ELAC2基因高表达使MCF-7细胞的剂量-效应曲线左移,细胞辐射敏感性增强。细胞经5Gy的X射线照射,ELAC2基因高表达未使MGMT蛋白和MRE11蛋白表达发生明显变化,而FEN-1蛋白及Ku-70蛋白表达水平显著下降。结论 ELAC2基因高表达使细胞辐射敏感性增高,其涉及的分子机制可能与ELAC2下调FEN-1蛋白及Ku-70蛋白表达水平有关。