溃结安康汤通过抑制PI3K/Akt信号通路缓解三硝基苯磺酸诱导的溃疡性结肠炎大鼠炎症机制研究

目的 观察溃结安康汤对大鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)免疫炎性反应的影响,探究其是否参与磷脂酰肌醇3-羟基激酶(phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase, Akt)信号通路的调控。方法 肠道注射三硝基苯磺酸(trinitrobenzene sulfonic acid, TNBS)构建大鼠UC模型,随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶(salicylazosulfapyridine, SASP)组、溃结安康汤组。造模后给药21 d,统计各组大鼠疾病活动指数(disease activity index, DAI)评分,采用酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法检测各组大鼠结肠组织中髓过氧化物酶(myeloperoxidase, MPO)含量,以及血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)的表达水平,HE染色切片观察各组大鼠结肠组织的病理改变,采用蛋白免疫印迹法检测结肠组织中PI3K/Akt通路的相关蛋白表达水平。结果 与模型组相较,溃结安康汤组DAI评分显著降低(P<0.05),结肠HE染色切片中结肠黏膜上皮较为完整,炎症细胞浸润较少。与模型组相比,溃结安康汤干预后降低MPO活性同时减少IL-6、TNF-α的含量(P<0.05)。此外,溃结安康汤组里活化后的PI3K(p-PI3K)及活化后的Akt(p-Akt)、核转录因子-κB(nuclear factor kappa-B kinase, NF-κBp65)蛋白表达明显低于模型组(P<0.05)。结论 溃结安康汤可能通过抑制PI3K/Akt信号通路,从而改善溃疡性结肠炎大鼠炎症反应发挥保护作用。

溃结康激活自噬及调节肠道菌群防治溃疡性结肠炎的作用机制研究

目的:探讨溃结康调控自噬及肠道菌群防治溃疡性结肠炎的作用机制。方法:采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulphate sodium,DSS)制备急性溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)小鼠模型,随机分为正常对照组、模型对照组、柳氮磺胺吡啶0.45 g/kg组、溃结康3.2、6.4、12.8 g/kg组。除正常对照组外,各组小鼠自由饮用3%DSS水溶液7 d,隔天更换新鲜DSS水溶液。每天观察各组小鼠体质量及疾病活动指数变化,并于第8 d试验结束时,脱颈椎处死各组小鼠收集结肠和粪便;HE染色观察结肠组织病理学改变;电镜检测结肠上皮损伤及自噬体形成数量;RT-qPCR及Western-blot法检测结肠微管相关蛋白轻链(Lc3)、苄氯素1(Beclin1)、自噬蛋白(P62)mRNA及蛋白表达;16S核糖体RNA(16S rRNA)测序技术检测小鼠粪便肠道菌群的变化。结果:与正常对照组比较,模型对照组小鼠体质量显著下降、DAI评分显著升高,结肠长度显著降低,结肠黏膜损伤严重,病理CMDI评分显著升高(P<0.01),视野内未见自噬小体,结肠组织中Lc3、Beclin-1 mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05或P<0.01),P62 mRNA和蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),肠道菌群多样性及丰度明显降低,Shannon、sobs指数明显降低(P<0.05);与模型对照组比较,溃结康6.4、12.8 g/kg组小鼠体质量显著增加、DAI评分显著降低,结肠长度显著升高,结肠黏膜病理损伤减轻,病理CMDI评分显著降低(P<0.01),视野内见少许自噬小体形成,结肠组织中Lc3、Beclin-1 mRNA及蛋白表达明显上调(P<0.05或P<0.01),P62蛋白表达显著下调(P<0.01);溃结康12.8 g/kg组小鼠肠道菌群多样性及丰富度增加,Shannon指数、Sobs指数明显升高(P<0.05)。结论:溃结康可明显改善UC小鼠肠黏膜损伤,调控结肠自噬水平及肠道菌群紊乱可能为其防治UC的重要作用机制。

溃结康对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜炎症因子及肠屏障功能相关蛋白的影响

目的:探讨溃结康对溃疡性结肠炎小鼠肠粘膜炎症因子及肠屏障功能的影响。方法:建立葡聚糖硫酸钠诱导小鼠实验性溃疡性结肠炎模型,实验分为正常对照组、模型组、柳氮磺胺吡啶组(0.45g/kg)、溃结康组(12.8g/kg、6.4g/kg、3.2g/kg)。造模7天内,每天观察UC小鼠体质量及疾病活动指数变化,第8天实验结束时,采集结肠组织,量取各组小鼠结肠长度,HE染色观察小鼠结肠病理变化,酶联免疫法检测结肠组织IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10含量变化,实时荧光定量PCR检测结肠ITF、NF-κB、Occludin、Claudin 1mRNA表达,Western-blot法检测结肠ITF、NF-κB、Occludin、Claudin 1蛋白表达。结果:模型组小鼠体质量较正常对照明显减轻,疾病活动指数显著升高,结肠长度明显缩短,结肠组织损伤明显,病理学评分显著增加,结肠IL-1β、TNF-α含量显著增加,IL-4、IL-10含量显著降低,NF-κBmRNA及蛋白表达均明显增加,而ITF、Occludin、Claudin 1mRNA及蛋白表达均显著降低;溃结康组(12.8g/kg、6.4g/kg)及柳氮磺胺吡啶组(0.5g/kg)小鼠体质量及结肠长度较模型组增加,疾病活动指数降低,结肠病理损伤较模型组减轻,病理学评分降低,TNF-α含量显著降低,NF-κB mRNA及蛋白表达明显减少,而occludin mRNA水平明显增加;溃结康组(12.8g/kg)还可明显增加IL-4含量,上调ITF mRNA、蛋白及occludin蛋白表达,溃结康组(6.4g/kg)可降低IL-1β含量,增加IL-10含量,上调ITF mRNA水平。溃结康组(3.2g/kg)除可上调ITF mRNA水平外,对各指标均无明显影响。结论:溃结康可能通过降低结肠组织致炎因子含量、增加抑炎因子含量,同时促进肠粘膜修复,保护肠粘膜屏障功能而治疗溃疡性结肠炎。