6株禽源滑液囊支原体分离株的分子生物学鉴定及MSPB蛋白原核表达

从分子水平对6株禽源滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)分离株进行鉴定,探讨MS宁夏本地株膜蛋白MSPB的生物学功能。通过PCR技术扩增分离株的16S rRNA和MSPB基因序列,并构建分子进化树,对6株MS分离株进行同源性分析;用生物信息学工具对MSPB在蛋白水平进行分析,预测其亚细胞定位,探究MSPB的理化性质。构建pET-30a-MSPB重组表达载体,在大肠埃希氏菌BL 21(DE3)中进行表达,用镍柱亲和层析纯化并用蛋白质免疫印迹验证其反应原性。结果6株MS分离株在16S rRNA基因序列上与MS参考菌株具有同源性;MSPB等电点低,疏水性氨基酸占比较高;成功对MSPB进行表达,大小约为70 ku,纯化所得MSPB蛋白能与MS阳性血清特异结合。结果表明,6株菌株为MS,而MSPB具有反应原性,可以作为候选抗原应用于MS的诊断或防控。

S100蛋白和CD43在涎腺腺样囊性癌和基底细胞腺瘤中的表达及意义

目的:探讨S100蛋白和簇分化抗原(CD)43免疫组化标记在涎腺腺样囊性癌(ACC)和基底细胞腺瘤(BCA)中的表达及意义。方法:收集复旦大学附属中山医院厦门医院2018年1月至2023年12月间手术切除的21例ACC和8例BCA患者病灶标本,采用免疫组化EnVision两步法行S100蛋白和CD43免疫组化染色并分析表达情况。结果:S100蛋白标记显示所有ACC病例均未见S100蛋白阳性的梭形细胞间质(0.0%),BCA可见S100蛋白强阳性的梭形细胞间质(62.5%),差异具有统计学意义(P<0.01);CD43标记显示ACC肿瘤细胞CD43阳性表达率为71.4%,而BCA肿瘤细胞CD43阳性表达率为12.5%,差异具有统计学意义(P=0.01)。结论:联合S100蛋白和CD43免疫组化标记有助于涎腺ACC和BCA的鉴别诊断。

棕囊藻北部湾株的18S rDNA分子鉴定

为研究北部湾棕囊藻（Phaeocystis）藻华的成因，采用PCR克隆了棕囊藻北部湾株核糖体18SrDNA序列。结果表明，棕囊藻北部湾株具有游动单细胞与群体结构两种形态；其18SrDNA序列和NCBI基因库中球形棕囊藻（Phaeocystis globosa）的同源性为99％～100％，在系统进化树上与不同海域来源的球形棕囊藻聚在一大分支上，且与球形棕囊藻问的遗传距离均小于其他种。首次从分子生物学上确定棕囊藻北部湾株为球形棕囊藻。

棕囊藻渤海株核糖体18SrDNA和ITS基因结构序列分析

对分离自渤海赤潮发生区的1株棕囊藻进行核糖体18S rDNA及ITS序列克隆测定,获得了长度为1 648bp的18S rDNA序列和长度为890 bp的ITS序列。对获得的基因序列进行同源性分析,结果表明,该棕囊藻的核糖体18S rDNA及ITS序列均与NCBI数据库中登录的球形棕囊藻的相应序列同源性最高;从GenBank中获取不同地理来源的19种棕囊藻的18S rDNA序列及6种棕囊藻的ITS序列,分别以棕囊藻核糖体18S rDNA和ITS为对象构建了棕囊藻属的系统发育树,从分子生物学角度确定了棕囊藻渤海株为球形棕囊藻(Phaeocystis globosa)。

CD 44s和CD 44v6在涎腺腺样囊性癌中的表达

目的 研究细胞粘附分子 Ｃ Ｄ４４ｓ（ Ｃ Ｄ４４ 标准型）及其剪接变异体 Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在涎腺腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍ ａ； Ａ Ｃ Ｃ）中的表达，探讨 Ｃ Ｄ４４ｓ 和 Ｃ Ｄ４４ｖ６ 与 Ａ Ｃ Ｃ生物学特性之间的关系。方法 采用免疫组化方法对 ５０ 例涎腺 Ａ Ｃ Ｃ 标本和１０ 例正常涎腺组织进行 Ｃ Ｄ４４ｓ 和 Ｃ Ｄ４４ｖ６ 的检测。结果 （１） Ｃ Ｄ４４ｓ 和 Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在正常涎腺组织均为阳性表达；在 ５０ 例 Ａ Ｃ Ｃ 标本中 Ｃ Ｄ４４ｓ 阳性率为 ５８％ （２９ 例）， Ｃ Ｄ４４ｖ６ 阳性率为７０％ （３５ 例）。（２）涎腺 Ａ Ｃ Ｃ筛状型、管状型和实体型相比较， Ｃ Ｄ４４ｓ 和 Ｃ Ｄ４４ｖ６ 在实体型中表达最差，与其余两组相比较有显著差异（ Ｐ＜ ００５）。（３）在 ２２ 例术后局部有复发的涎腺腺样囊性癌（ａｄｅｎｏｉｄ ｃｙｓｔｉｃ ｃａｒｃｉｎｏｍ ａ； Ａ Ｃ Ｃ），其原发灶 Ｃ Ｄ４４ｓ 阳性率仅为１３６％ （３／２２）。结论 （１） Ｃ Ｄ４４ｓ 及 Ｃ Ｄ４４ｖ６的存在可能与涎腺正常组织结构和功能的维持有关，它们的表达下降或缺失可能和涎腺 Ａ Ｃ Ｃ肿瘤亚型的分化有关；（２） Ｃ Ｄ４４ｓ 的表达下降?

16S rRNA基因序列法对30例泪囊炎致病细菌的鉴定

背景泪囊炎是眼科常见的感染性疾病，对泪囊炎致病菌检测的金标准为培养法，在培养法的基础上结合分子生物学的检测方法可以更精确地鉴定出致病菌的种属，但目前眼科领域类似的研究资料比较缺乏。目的采用PCR法扩增细菌核糖体16SrRNA基因序列鉴定泪囊炎病原细菌的种属。方法取10例质控标准菌样本，利用PCR的加热过程使细菌核酸释放，扩增出细菌16SrRNA基因序列，测序后与GenBank中的基因序列进行比对，鉴定出细菌的种属信息，与生化鉴定法结果进行对比，确定16SrRNA基因检测方法的可靠性。取30例泪囊炎患者泪囊分泌物培养出的细菌，利用上述方法进行病原菌鉴定。结果10例质控标准菌样本经PCR扩增后其产物序列的鉴定结果与生化鉴定法结果完全一致。30例泪囊炎病原细菌标本中，16SrRNA基因序列法鉴定结果为表皮葡萄球菌13例，沃氏葡萄球菌2例，人葡萄球菌1例，麦氏棒杆菌5例，肺炎链球菌3例，蜡状芽孢杆菌2例，藤黄微球菌1例；卡他莫拉菌1例，奥斯陆莫拉菌1例，铜绿假单胞菌1例。结论通过PCR扩增细菌核糖体16SrRNA基因序列鉴定泪囊炎病原细菌种属的方法准确性高，特异性强。

基于16S rRNA测序技术初步探讨多囊卵巢综合征大鼠肠道菌群多样性

目的应用16S rRNA测序技术分析来曲唑联合高脂饮食诱导的多囊卵巢综合征(PCOS)大鼠肠道菌群多样性的特点。方法2018年10月—2019年3月于北京中医药大学进行实验。选取SPF级雌性SD大鼠12只,随机数字表法分为对照组和模型组,每组6只;对照组予普通饮食,模型组予来曲唑联合高脂饮食诱导大鼠PCOS模型,采用16S rRNA高通量基因测序技术检测肠道菌群多样性。结果与对照组比较,模型组大鼠肠道菌群中拟杆菌门丰度减少(t=-2.951,P=0.033),厚壁杆菌门丰度增加(t=2.800,P=0.038),拟杆菌门/厚壁杆菌门比值显著降低(t=-3.378,P=0.02)。模型组大鼠肠道菌群中各分类水平的拟杆菌丰度均减少,包括属水平的Allpprevotella、拟杆菌属、副拟杆菌属、普氏菌属等;厚壁杆菌门中多个分类水平的菌群丰度增加,包括属水平的丹毒丝菌属、红蝽菌属等,而瘤胃菌科丰度减少;变形菌门中属水平的Parasutterella增多,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论来曲唑联合高脂饮食诱导的PCOS大鼠肠道菌群存在菌群失调的现象,主要表现为拟杆菌门丰度减少,厚壁杆菌门丰度增加;Allpprevotella、拟杆菌属、副拟杆菌属、普氏菌属、瘤胃菌科等益生菌丰度减少,而梭菌属、Parasutterella、红蝽菌科等有害菌群丰度增加。

TGF-β_1对Tenon’s囊成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子表达的影响

目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法用MTT法检测不同质量浓度TGFβ1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度TGFβ1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon’s囊成纤维细胞诱导表达CTGF的影响。结果GFβ1能够剂量依赖性地促进Tenon’s囊成纤维细胞增殖(P<0.05);TGFβ1能够促进CTGF的表达,有随质量浓度的增加而增强的趋势(P<0.05),但1ng/mL和10ng/mLTGFβ1组之间无统计学差异(P>0.05)。结论GFβ1能够促进Tenon’s囊成纤维细胞增殖,并促进其下游介质CTGF的表达,可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕形成的重要机制。

人Tenon's囊成纤维细胞的离体培养及生长特性观察

目的离体培养人Tenon′s囊成纤维细胞,观察其生长特性。方法将人Tenon′s囊成纤维细胞进行离体培养及生长抑制实验,采用含10%胎牛血清的DMEM培养基,细胞计数法及MTT法描述细胞生长曲线。并通过免疫组织化学法对细胞进行鉴定。结果人Tenon′s囊成纤维细胞离体培养48 h至7 d处于对数生长期。细胞角蛋白染色阴性,波蛋白染色阳性。结论人Tenon′s囊成纤维细胞在体外易于生长,是细胞离体实验研究的良好材料。

南海球形棕囊藻质体16S rDNA序列分析

测定了采自香港2株球形棕囊藻和湛江1株等鞭金藻质体16SrDNA基因序列，结合GenBank中下载的32条同源序列，分析序列特征并构建分子系统树。发现600bp序列中有可变位点42个，简约信息位点33个，可变位点和简约信息位点分别为全序列的7．0％和5．5％。A＋T的含量（52．5％）略大于C＋G含量（47．5％），与已报道的棕囊藻属叶绿体和线粒体基因相似；在分子系统树上，同属藻种聚类在一起，属间遗传距离分别为0．0255-0．0503。棕囊藻属属内遗传距离0-0．0050，不同藻种相混杂，并未独立成支；质体16srDNA部分序列虽不能区分棕囊藻属内不同藻种，但能鉴定出GenBank中27个环境样品为棕囊藻属藻株，从而能确定其地理分布和相对丰度，对棕囊藻赤潮的预测预报具有重要意义。质体16srDNA在其他赤潮藻类物种鉴定方面的应用需要进一步研究。

肌动蛋白和S100蛋白在腺样囊性癌中的共表达及其意义

目的:探讨S100蛋白在腺样囊性癌中表达的准确定位,为揭示腺样囊性癌嗜神经侵袭的机制提供实验依据。方法:利用双重免疫荧光染色及激光共聚焦显微镜技术检测肌上皮细胞标记物肌动蛋白(MA)和神经膜细胞标记物S100蛋白在腺样囊性癌中的共表达。结果:MA主要表达于腺样囊性癌细胞的细胞质中,S100蛋白则主要表达于腺样囊性癌的细胞核中。激光共聚焦扫描后发现,MA与S100蛋白在同一种腺样囊性癌细胞中表达。结论:S100蛋白表达于腺样囊性癌的肌上皮细胞中,推测这些突变的肌上皮细胞可能发生了神经膜细胞分化。

保留Tenon’s囊的翼状胬肉切除联合羊膜移植术的临床初步研究

目的：探讨一种治疗初发性翼状胬肉的新的手术方法，防止初发性翼状胬肉术后复发的最佳手术方法。方法：24例（24眼）初发性翼状胬肉，在手术显微镜下进行手术，保留翼状胬肉表面的球结膜及巩膜表面的Tenon’s囊，在自然解剖状态下彻底分离切除球结膜下的翼状胬肉组织，同时行羊膜移植。术后随访14-35个月，平均（17.21±3.45）月。结果：24例（24眼）均治愈，均无复发。术中术后未见并发症。结论：手术显微镜下行保留Tenon’s囊的翼状胬肉切除联合球结膜下羊膜移植具有手术损伤小，最大限度保留了正常眼表面的解剖结构，术后复发率低，不影响白内障、青光眼的手术的优势，是治疗初发性翼状胬肉的一种新的有效方法。

囊内结节的MRI特征对Rathke's囊肿的诊断价值

目的探讨Rathke's囊肿囊内结节的MRI特点反其对Rathke's囊肿术前诊断的作用。方法回顾性分析22例经术后病理学证实的Rathke's囊肿患者的影像学资料,评价囊内结节MRI特点的诊断价值。结果 22例患者中14例病变位于鞍内,6例向鞍上发展,2例位于垂体上方;T1高信号12例,等或低信号6例,信号不均4例;T2高信号7例,等或低信号10例,信号不均5例。5例可见囊内结节,表现为T1高信号3例,等信号1例,未显示1例;T2均呈低信号,均无强化效应。5例伴囊内结节性患者术前正确诊断率100%,其余17例术前正确诊断率为64.7%(11/17)。结论 Rathke's囊肿的术前诊断较为困难,MRI显示囊内有结节的比例尽管不高,但具有特异性诊断价值。

Feloy’s导尿管自制水囊在足月妊娠引产中的临床观察

目的：探讨Feloy’s导尿管用于足月妊娠引产中的安全性及有效性。方法采用随机对照研究的方法，对150例足月妊娠、无阴道分娩禁忌、宫颈成熟度评分＜6分的初产妇随机分为两组，Feloy’s导尿管自制水囊组（水囊组）86例，缩宫素组64例，分别利用Feloy’s导尿管自制水囊、缩宫素引产。结果水囊组、缩宫素组引产的有效率分别为95．3％和82．8％，两组比较差异有统计学意义；两组用药前后宫颈评分自身比较差异有显著性提高，水囊引产组阴道分娩率高于缩宫素引产组，两组比较，差异有统计学意义。结论Feloy’s导尿管自制水囊对宫颈不成熟的足月妊娠能有效地提高宫颈评分，是一种安全、有效、方便、成本低的引产方法。

雷帕霉素对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的作用

目的:观察雷帕霉素(rapamycin)对培养的人Tenon′s囊成纤维细胞的增殖及细胞周期的作用。方法:将培养的人Tenon′s囊成纤维细胞用含不同雷帕霉素浓度的培养液培养24 h后,用MTT法测定细胞的增殖情况,用流式细胞仪测定细胞周期的变化情况。结果:用含10、20、40、80和160 ng/ml雷帕霉素的培养液培养细胞时,细胞增殖抑制率分别为9.32%,22.55%,41.42%,42.25%,43.57%。细胞周期分析显示,雷帕霉素(40 ng/ml)作用后,G0/G1期细胞较对照组增多(41.76%vs 44.19%,P<0.05),S期细胞较对照组减少(45.42%vs 40.18%,P<0.05)。结论:雷帕霉素具有抑制人Tenon′s囊成纤维细胞增殖的效果,且随浓度增加抑制作用增强,并将细胞抑制在G1期的限制点内。

环孢素A对人Tenon’s囊成纤维细胞增殖及TGF-β_1分泌的影响

目的 观察环孢素A(CsA)对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞 (HTFs)增殖及其转化生长因子 β1 (TGF β1 )分泌的影响。方法 以体外培养的人HTFs为实验对象 ,分别加入 0 0 0 1～ 10 μg/mLCsA作用 48h ,细胞计数观察CsA对细胞增殖的影响。收集 0 0 0 1～ 5 μg/mLCsA处理后细胞培养上清液 ,采用ELISA方法检测细胞TGF β1 的分泌量。光镜及透射电镜观察细胞的结构变化。结果 CsA在 0 1～ 10 μg/mL范围内以质量浓度依赖方式抑制人HTFs的增殖 ,IC50 为0 5 5 μg/mL ,并在 0 0 1～ 5 μg/mL范围内刺激细胞TGF β1 的分泌。CsA作用后细胞形态学改变的主要特征为胞浆内大量空泡形成。结论 一定质量浓度的CsA可能通过直接的细胞损伤作用在促进TGF β1 分泌的同时仍显著抑制人HTFs的增殖。

腺样囊性癌中雪旺氏细胞标记物S100蛋白表达的超微结构观察

目的:从超微结构水平了解雪旺氏细胞标记物 S100蛋白在腺样囊性癌中的表达,进而分析腺样囊性癌中哪种细胞成份发生了雪旺氏细胞分化。方法:采用免疫电镜方法研究 S100蛋白,肌动蛋白(muscle actin,MA)在腺样囊性癌中的表达。结果:S100阳性细胞与 MA 阳性细胞具有相同的分布和超微结构。这种超微结构符合肌上皮细胞的超微结构特点。结论:腺样囊性癌中突变的肌上皮细胞可能发生了雪旺氏细胞分化。

S100蛋白和GFAP在腺样囊性癌中的表达及与嗜神经侵袭的关系

目的观察S100蛋白和GFAP在腺样囊性癌中的表达情况,探讨其与腺样囊性癌嗜神经侵袭间的关系。方法采用免疫组化方法对45例腺样囊性癌以及正常腮腺组织中的S100蛋白和GFAP进行检测。结果45例腺样囊性癌中,有34例出现癌细胞包绕或侵袭神经现象,11例无此类现象,S100蛋白和GFAP在嗜神经现象组的阳性率分别为100%(34/34)、94.14%(32/34),在非嗜神经现象组阳性率为90.91%(10/11)、45.45%(5/11)。两组间S100蛋白阳性率无明显差异(P>0.05),GFAP阳性率比较差异明显,P<0.01。结论S100蛋白和GFAP在腺样囊性癌中均过表达,但GFAP在两组间差异明显,可能与腺样囊性癌嗜神经侵袭的关系密切。

S100A4和HIF-lα蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及相关性研究

目的探讨S100A4和HIF-lα蛋白在卵巢浆液性囊腺癌中的表达及相关临床病理特征及预后的关系.方法采用免疫组织化学法检测S100A4和HIF-1α.结果 S100A4和HIF-lα蛋白在卵巢浆液性囊腺癌组织中高表达,在卵巢浆液性囊腺瘤组和正常卵巢组中低表达或不表达.S100A4和HIF-lα蛋白表达与手术病理分期、术后复发有关系(P<0.05);HIF-lα蛋白表达与伴有淋巴结转移有密切关系(P<0.05).S100A4与HIF-lα蛋白表达呈显著正相关性P<0.05).结论 S100A4和HIF-lα的表达促进卵巢浆液性囊腺癌的发生发展,S100A4和HIF-lα间存在协同作用.