基于肠源性高密度脂蛋白调控脂多糖介导Kupffer-肝细胞Cross-Talk探讨脾虚膏脂转输障碍的分子生物学基础

脾虚膏脂转输障碍是血脂异常的关键病机。脾失健运引起肝脏代谢功能障碍可能导致血脂异常。肠道功能紊乱是脾虚膏脂转输障碍的启动因素,以其介导“炎症-代谢”紊乱为切入点,深入揭示血脂异常疾病发病机制以提高中西医结合防治水平逐渐成为基础和临床研究焦点和热点。从肠源性高密度脂蛋白(high-density lipoprotein 3,HDL3)调控脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)介导Kupffer-肝细胞cross-talk的角度,深入分析脾虚膏脂转输障碍的分子生物学机制,揭示健脾化浊法的效应机制,为临床防治血脂异常提供科学依据。

Kupffer细胞在肝脏NK细胞亚群稳态维持和分化成熟中的作用探究

目的:探究Kupffer细胞对肝脏NK细胞的调控作用。方法:利用荧光成像技术分析小鼠Kupffer细胞和肝脏NK细胞的位置关系;通过注射氯磷酸盐脂质体构建体内清除Kupffer细胞模型,流式分选去除肝脏非实质细胞中的Kupffer细胞进行体外共孵育实验;通过抗生素水饲喂清除小鼠肠道共生菌;利用流式细胞术分析肝脏NK细胞亚群的比例、数量和成熟状态。结果:稳态下Kupffer细胞和肝脏NK细胞存在共定位,清除Kupffer细胞后肝脏驻留NK细胞和经典NK细胞数量减少;体内清除和体外共培养实验证实Kupffer细胞可促进肝脏驻留NK细胞和经典NK细胞的成熟,而抗生素处理过的小鼠在清除Kupffer细胞后,肝脏NK细胞亚群的数量和成熟状态无显著变化。结论:Kupffer细胞有利于肝脏NK细胞的数量维持,且以共生菌依赖的方式促进肝脏NK细胞的成熟分化。

维生素D调控Kupffer细胞极化在非酒精性脂肪性肝病防治中的作用

目的探讨维生素D在非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)防治中的作用及可能机制。方法30只C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为对照组(正常饮食)、高脂饮食组(高脂饮食)和维生素D补充组[高脂饮食同时补充活性维生素D-1,25(OH)2D3],每组10只。喂饲相应食物16周后每组取5只小鼠处死后取肝组织,另5只小鼠行胶原酶原位灌注获取Kupffer细胞。采用HE染色观察肝组织病理学表现;采用real-time PCR法、Western blot法分别检测肝组织脂质合成和分解代谢相关基因、蛋白表达水平;采用real-time PCR法检测Kupffer细胞M1/M2极化基因表达水平。结果与高脂饮食组相比,维生素D补充组小鼠肝组织脂肪变性减轻,肝组织脂质合成基因固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP1C)、脂肪酸合酶(FASN)和脂质分解基因脂酰辅酶A氧化酶l(ACOX1)、肉碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)mRNA表达水平均明显降低,肝组织脂质合成蛋白SREBP1C、FASN和脂质分解蛋白ACOX1、CPT1A表达水平均明显降低,Kupffer细胞M1极化基因诱生型一氧化氮合酶2(iNOS2)、TNF-α和IL-6及M2极化基因IL-10 mRNA表达水平均明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论补充维生素D可改善NAFLD小鼠肝脏脂肪变性,其机制可能与抑制Kupffer细胞M1型极化进而影响肝脏脂质代谢水平有关。

羊毛固醇合成酶抑制剂RO对KCs细胞增殖的影响

目的研究羊毛固醇合成酶抑制剂(RO)单独或联合胆固醇(CH)使用对皮肤角质形成细胞(KCs)细胞增殖及细胞周期的影响。方法 RO不同剂量作用KCs一定时间,采用MTS比色法检测KCs细胞增殖的变化;使用一定浓度的RO单独或联合CH作用KCs不同时间,使用MTS比色法和流式细胞仪检测记录KCs细胞增殖和细胞周期的变化;单独使用相同浓度RO或联合CH经过不同时间刺激KCs后通过蛋白质免疫印迹法对细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinE表达水平进行分析。结果 RO抑制KCs细胞增殖,并呈浓度和时间依赖性;联合使用CH降低RO对KCs的增殖抑制作用;RO可时间依赖性增加KCs细胞周期在G1期比例,联合使用CH缓慢增加KCs周期在G1期比例;RO可时间依赖性降低细胞周期调控蛋白CyclinB1、CyclinE的表达,联合使用CH部分拮抗RO下调CyclinE,并具有时间效应,而CyclinB1的表达没有受到明显的影响。结论 RO可能通过影响CyclinB1、CyclinE的表达使KCs细胞周期G1期阻滞进而抑制KCs增殖。

肝脏微环境细胞对结肠直肠癌肝转移的作用

肝脏是结肠直肠癌最常见的转移部位。肝脏微环境包含了复杂的细胞群体,每种细胞都具备独特的生物学特性和功能,辅以细胞之间的交互作用,共同调节肿瘤微环境,对结肠直肠癌肝转移的发生和发展起到关键作用。深入探索结肠直肠肝转移相关的分子机制,对于理解肿瘤进展、预测转移风险以及开发新的治疗策略至关重要。本文重点从肝脏肿瘤微环境的细胞组成角度出发,探讨了不同细胞类型在肠癌肝转移过程中的作用和影响,旨在为结肠直肠癌肝转移的诊疗提供新的视角和思路。

当归多糖对大鼠Kupffer细胞免疫功能的激活作用

目的 观察当归多糖 (ASP)对大鼠Kupffer细胞免疫功能的影响。方法 ASP体外作用于正常Kupffer细胞 ,以吞噬中性红A540 、分泌NO和TNF α量评价其免疫功能 ;以LDH漏出量 ,评价ASP对细胞的直接损害情况。大鼠igASP后 ,检测Kupffer细胞上述指标及胞内酸性磷酸酶 (ACP)活性 ;以sALT和sGST为肝毒性指标。结果 ASP增强Kupffer细胞对中性红吞噬作用、增加ACP活性及NO和TNF α的产生。ASP在体外不增加肝实质细胞LDH漏出 ,而体内使sGST升高。结论 适当剂量ASP可激活Kupffer细胞免疫功能。大剂量ASP出现的轻度肝功能改变可能与NO和TNF α等免疫因子过度分泌间接有关。

内毒素介导Kupffer细胞脂多糖受体CD14的表达

目的 观察内毒素刺激下肝Kupffer细胞 (KCs)膜上脂多糖 (LPS)受体CD14的表达及其在细胞因子分泌中的作用。方法 从Wistar大鼠肝组织中分离出KCs ,培养 12h并调整细胞浓度为 1× 10 6/ml/孔 ,将细胞分为 2组。①LPS组 :每孔加入不同浓度LPS(0、10 0ng/ml ,1、10 0 μg/ml) ;②PI PLC组 :每孔先加入 1U磷脂酰肌醇特异性磷脂酶C(PI PLC)后再加入不同浓度LPS。用兔抗鼠CD14抗体和异硫氢酸荧光素 (FITC)标记的羊抗兔IgG对KCs进行免疫染色 ,流式细胞仪 (FCM)测定FITC阳性KCs数及其荧光强度(FI) ,并用酶联免疫法或放免法测定培养液中TNFα和IL 6的含量变化。结果 随着LPS浓度增加 ,LPS组FITC阳性细胞数显著增多 ,其FI逐渐增强 ,培养液中TNFα和IL 6的含量也逐渐增高 (P <0 .0 1) ;PI PLC组FITC阳性细胞数及FI较LPS组明显减少和减弱 ,培养液中TNFα和IL 6的含量在低浓度LPS刺激时差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,在高浓度LPS时刺激时才明显增加 (P <0 .0 5 )。结论 LPS能上调KCsCD14表达 ,同时伴有多种细胞因子分泌 ;PI

HBV慢性感染免疫耐受期患者肝组织内NK细胞及Kupffer细胞的研究

目的为了解HBV慢性感染免疫耐受期患者肝内NK细胞及Kupffer细胞的变化特点,探讨肝内NK细胞及Kupffer细胞与HBV慢性感染免疫耐受的关系。方法采用免疫组织化学方法检测16例HBV感染免疫耐受期患者肝组织内NK细胞及Kupffer细胞在肝内分布情况,以及HBsAg、HBcAg在肝细胞内表达状况,并与6例正常肝组织、17例免疫活动期患者进行比较。结果免疫耐受期患者肝内浸润Kupffer细胞明显多于正常肝组织(P<0.01),但明显少于免疫活动期患者(P<0.01);免疫耐受期患者肝内NK细胞数与免疫活动期及正常肝组织比较均差异无显著性(P>0.05);免疫耐受期患者肝细胞内HBcAg阳性表达明显高于免疫活动期患者(P<0.01)。结论肝组织内Kupffer细胞在慢性乙型肝炎的肝组织炎症损伤及肝内HBV清除中起重要作用,而慢性HBV感染者肝组织内NK细胞的作用很有限。

内毒素刺激的Kupffer细胞对肝星状细胞增殖的影响

目的 探讨内毒素 (LPS)及其刺激的Kupffer细胞对大鼠肝星状细胞 (HSC)增殖的影响。方法 用链酶蛋白酶和胶原酶原位灌流 ,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠肝脏HSC和Kupffer细胞 ,制备LPS刺激的Kupffer细胞培养上清液 (KCCM ) ,并以MTT法观察LPS及KCCM对HSC增殖的效应。结果 无LPS刺激和浓度为 1μg/ml的LPS刺激所得的KCCM对HSC有显著增殖作用 (P <0 0 1) ,且两组之间有差异 (P <0 0 5 ) ;浓度为 10 μg/ml的LPS刺激所得的KCCM对HSC无影响 (P >0 0 5 ) ;加入兔抗人转化生长因子 β1(TGF β1)可抑制低浓度LPS刺激的KCCM对HSC的增殖作用 (P <0 0 1) ;LPS浓度为 1μg/ml和 10 μg/ml对HSC直接作用均无增殖效应 (P >0 0 5 )。 结论 内毒素刺激的KCCM可促进HSC增殖 。

大鼠酒精性肝病Kupffer细胞Toll样受体4和细胞因子的变化

目的 观察酒精性肝病大鼠Kupffer细胞 (KCs)Toll样受体 (TLR) 4基因表达和细胞因子的变化。 方法 2 8只Wis tar大鼠随机分为乙醇喂养组 (E组 )和葡萄糖喂养组 (C组 )。E组大鼠饮水中加入乙醇 (剂量 5～ 12g.kg-1.d-1)喂养 ,C组饮水中加入等量的葡萄糖。两组大鼠分别于 4周和 8周活杀分离KCs,用逆转录多聚酶联反应 (RT PCR)测定KCs中TLR4mRNA的表达 ;用酶联免疫法 (ELISA)测定血浆中TNF α和IL 6浓度变化。结果 RT PCR显示E组TLR4mRNA的表达也显著高于C组(P <0 .0 1)。E组 4周和 8周的TNF α浓度分别为 (32 6± 4 2 )ng/L和 (40 2± 5 1)ng/L ,明显高于对照组的 (86± 12 )ng/L和 (97±13)ng/L (P <0 .0 1) ;IL 6浓度为 (387± 4 6 )ng/L和 (413± 5 1)ng/L ,也显著高于C组的 (73± 10 )ng/L和 (78± 11)ng/L (P <0 .0 1)。结论 乙醇能诱导大鼠肝脏KCs表达TLR4基因 ,TLR4和细胞因子在大鼠酒精性肝脏损害中可能起作用。

扶正化瘀方对大鼠CCl_4损伤肝Kupffer细胞功能的影响

目的:探讨扶正化瘀方对大鼠急性CCl_4损伤肝Kupffer细胞功能的影响。方法:体外分离培养大鼠息性CCl_4损伤肝Kupffer细胞,制备扶正化瘀方药物血清对其进行干预,观察药物对其PDGF和TGFβ活性以及对Kupffer细胞线拉体呼吸功能的影响。结果:药物组PDGF和TGFβ活性均显著降低(P<0.05);药物组线粒体呼吸功能明显降低(P<0.05)。结论:扶正化疼方对大鼠急性CCl_4损伤肝Kupffer细胞活化有抑制作用,可能抑制肝星状细胞旁分泌激活,是该方抗肝纤维化的作用机理之一。

Kupffer细胞NF-κB激活对胆道梗阻合并肝部分切除鼠肝细胞再生的影响

目的 探讨Kupffer细胞 (KCs)NF κB激活在鼠非肝硬变性胆道梗阻肝部分切除后肝细胞再生过程中的作用。方法 Wistar大鼠随机分为正常大鼠 70 %肝部分切除组 (N PH)、胆总管梗阻 1周 70 %肝部分切除组 (BDO PH)、BDO PHIL 1 0或生理盐水治疗组。EMSA法检测KCsNF κB激活、RT PCR法检测肝内HGF、IL 6、TGF β1及IL 1 βmRNA表达 ,ELISA法检测肝内TNF α水平 ,免疫组化法检测肝细胞BrdU标记。结果 BDO PH后 0～ 72h肝内IL 6mRNA、TGF β1mRNA、IL 1 βmRNA及TNF α表达增高而HGFmRNA表达减少 ,肝细胞BrdU标记减少。而IL 1 0能下调BDO PH后KCsNF κB活性、上调肝内HGFmRNA与下调肝内IL 6mRNA、TGF β1mRNA、IL 1 βmRNA及TNF α表达 ,从而促进肝细胞BrdU标记。结论 KCsNF κB过度激活可能抑制非肝硬变性胆道梗阻肝部分切除后肝细胞再生 ,适当调节KCsNF κB活性可能促进肝细胞再生。

Kupffer细胞起源及其免疫学功能的研究进展

Kupffer细胞(Kupffer cells,KCs)主要存在肝血窦中,是机体单核巨噬细胞系统的重要组成部分。传统观点认为肝脏的KCs来是由单核巨噬细胞系统分化而来,但是新近研究发现具有分化潜能的造血干细胞能被诱导分化为具有KCs功能的巨噬细胞。KCs通过模式识别受体(pattern recognition receptors,PRR)识别外源和内源的危险信号,激活后分化为M1型和M2型。在体内,硅化合物、脂质体封装混合物以及氯化钆类可以特异性消除KCs和(或)阻断KCs的功能。KCs的基本功能包括:吞噬清除病原;抗原递呈,启动适应性免疫;促进肝细胞再生等。

活化的Kupffer细胞对肝硬变肝脏细胞再生功能的影响

目的：通过对肝硬变大鼠行肝部分切除术基础上，体外活化Kupffer细胞（KC），观察其对肝细胞再生过程的影响。方法：分为肝硬变大鼠部分肝切除术组（C－PH）、正常大鼠部分肝切除术组（N－PH）和假手术组（SO）。皮下注射四氯化碳油溶液加口服乙醇制作大鼠肝硬变模型，切除大鼠肝脏的左叶和中叶。观察时相为大鼠术后6h，行3H－TDR掺合法，3H-亮氨酸的测定，用LPS体外活化KC，观察其对肝再生过程的影响。结果：用小剂量LPS可活化KC，其联合培养的肝细胞DNA合成功能和蛋白质的合成功能均有明显提高，表明活化的KC能促进肝细胞再生。相反。未经活化的KC和肝细胞联合培养（C－PH组），其DNA合成功能和蛋白质合成功能均较单纯的肝细胞培养时的功能有明显降低、能使肝细胞DNA合成达到最大值的LPS浓度为10μg／ml，随着LPS浓度的增高，其肝细胞DNA合成功能反而下降。结论：KC具有促进和抑制肝细胞再生的能力。因此适当地调节KC功能，对促进肝细胞再生具有重要意义。

Kupffer细胞在肝癌发生发展中的双向作用

随着肿瘤相关巨噬细胞概念的提出,巨噬细胞在肿瘤发生发展中的双向作用已为人们所重视.巨噬细胞除了抗肿瘤作用外,还可通过血管形成、基质重构等机制促进肿瘤的发生发展.作为一类特殊的巨噬细胞,Kupffer细胞在肝癌发生发展中同样起着双向作用.深入研究巨噬细胞特别是Kupffer细胞促进肿瘤发生发展的机制,必将为肿瘤的治疗提供新的靶点.

基于NF-κB通路探讨疏肝健脾含药血清对LPS刺激下大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤保护作用机制研究

目的基于核转录因子kappa B（nuclear transcription factor-kappa B,NF-κB）信号通路探讨脂多糖（lipopolysaccharides,LPS）刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞炎症损伤以及疏肝健脾含药血清的保护作用。方法通过体外培养以及免疫荧光鉴定SD大鼠肝细胞及Kupffer细胞,利用LPS刺激大鼠肝细胞及Kupffer细胞产生炎症反应,酶联免疫法检测肝细胞及Kupffer细胞培养上清液中白介素-1（interleukin-1,IL-1）、人血清淀粉样蛋白（serum amyloid A,SSA）的表达,Western blot法检测大鼠肝细胞及Kupffer细胞NF-κB通路相关蛋白的表达。结果每只大鼠通过纯化后获得肝细胞数量1.5×108~2.0×108个,Kupffer细胞数量0.5×107~1.0×107个,Typan blue染色测定肝细胞及Kupffer细胞活力均可达到95%以上。LPS组肝细胞及Kupffer细胞较空白血清组IL-1、SSA水平均有显著升高（P〈0.01）。而与LPS组比较,药物干预组可显著降低（P〈0.01）。肝细胞、Kupffer细胞的蛋白表明,与空白血清组比较,LPS组肝细胞及Kupffer细胞NF-κB、IκB及磷酸化IKKβ蛋白表达均有显著升高（P〈0.01）;与LPS组比较,疏肝健脾方药含药血清能显著下调肝细胞IκB及p-IKKβ蛋白的蛋白表达水平（P〈0.01）,但NF-κB蛋白表达水平无显著差异（P〉0.05）,疏肝健脾含药血清能下调Kupffer细胞NF-κB、IκB及p-IKKβ蛋白表达（P〈0.01）。结论疏肝健脾含药血清能够对LPS刺激大鼠肝细胞、Kupffer细胞炎症损伤产生保护作用,其机制可能与NF-κB信号通路相关。

Kupffer细胞Fas配体的表达及其对移植肝内淋巴细胞的杀伤作用

目的观察移植肝脏中Kupffer细胞(KCs)和T淋巴细胞(T lymphocytes,TLCs)中Fas、FasL基因和蛋白的表达,以及KCs对侵入肝脏内的淋巴细胞的细胞毒性作用。方法肝移植后0、48h分离肝移植组、氯化钆(GdCl3)组动物肝脏的KCs和TLCs,并对TLCs进一步分类;用RT-PCR法测定KCs和TLCs中Fas、FasL基因表达,用免疫组化、激光扫描共聚焦显微镜和Western blot蛋白印迹等方法测定KCs和TLCs中Fas、FasL蛋白质表达;观察不同培养条件下淋巴细胞凋亡与KCs的相互作用。结果GdCl3组分离出的KCs显著少于肝移植组,淋巴细胞数量及CD8+T细胞显著多于肝移植组(P<0.05),免疫组化和激光共聚焦显微镜显示GdCl3组FasL阳性KCs显著少于肝移植组(P<0.05),2组Fas阳性淋巴细胞无显著差异(P>0.05);RT-PCR和Western blot显示KCs中FasL mRNA及蛋白表达GdCl3组较弱(P<0.05),2组淋巴细胞中Fas、FasLmRNA无显著差异(P>0.05)。GdCl3组中分离出的KCs对TLCs杀伤率明显低于肝移植组(P<0.05),抗FasL抗体对KCs杀伤力有抑制作用。结论KCs能表达FasL蛋白,并通过Fas、FasL途径杀伤移植肝脏中的淋巴细胞,诱导移植肝脏产生免疫耐受。GdCl3能阻止KCs中FasL基因和蛋白表达,抑制肝移植中免疫耐受的产生。

氟烷性肝炎免疫应答中Kupffer细胞的抗原递呈作用和MHC限制

目的 :探讨豚鼠氟烷性肝炎免疫应答中 Kupffer细胞的抗原递呈作用。 方法 :雄性 Hartley豚鼠 16只 ,随机分为 2组 ,每组 8只。实验组 :每隔 4 2 d在 4 0 % O2 下吸入 1%氟烷 4 h,共 3次。对照组 :每隔 4 2 d吸入 4 0 % O2 4 h,共 3次。两组在最后一次吸入后 2 1d分离淋巴细胞和肝 Kupffer细胞 ,两种细胞按一定比例混合培养 3d。终止培养前 18h加入氚标记胸腺嘧啶核苷 (3H- Td R) ,通过淋巴细胞转化试验 (L TT)分析机体吸入氟烷后诱导免疫应答过程中 Kupffer细胞的抗原递呈作用。结果 :氟烷诱导豚鼠 Kupffer细胞对自体淋巴细胞有显著的促增殖作用 (P<0 .0 1) ,对同种异体淋巴细胞无促增殖作用 ,而未吸氟烷豚鼠 Kupffer细胞对自体 /同种异体淋巴细胞均无促增殖作用。 Kupffer细胞数目与淋巴细胞增殖有显著相关性(r=0 .995 0 )。用 TFA抗原致敏的 Kupffer细胞对淋巴细胞的促增殖能力作用更强 ,脾脏巨噬细胞不能增加 TFA- GSA抗原促进自体淋巴细胞增殖的作用。 结论 :Kupffer细胞是氟烷性肝炎免疫机制中重要的抗原递呈细胞 ,能明显促进机体免疫应答 ,其抗原递呈作用受 MHC限制。

一种改良大鼠肝脏Kupffer细胞分离方法

目的观察改良大鼠肝脏Kupffer细胞(KCs)分离方法获取KCs的效果。方法参照Akira提供的方法进行以下改进:①前灌注液在体灌注,Ⅳ型胶原酶离体灌注消化;②Percoll分离液不连续密度梯度离心;③台盼蓝染色检测分离细胞的活度;④选择性贴壁法纯化获取的细胞;⑤吞墨实验、DAB染色及CD163细胞免疫荧光法鉴定所分选细胞。结果肝脏KCs的获得量为(3±1.5)×105/g鼠肝,细胞活度>92%;光镜下细胞呈圆形,培养24 h后呈梭形或多角形;具有较强的吞噬能力,DAB染色呈"煎蛋"样,荧光显微镜下>99%为KCs。结论改良的大鼠肝脏KCs分离方法较Akira法能够获取更高纯度的KCs,简捷经济,值得推广。

Kupffer细胞表达的Fas配体在急性胰腺炎并发肝损伤中的作用

目的探讨Kupffer细胞表达的Fas配体(FasL)对急性胰腺炎(AP)肝损伤的介导作用以及Kupffer细胞抑制剂氯化钆(GdCl3)对肝损伤的保护作用。方法ICR小鼠54只,采用随机数字法将其分为对照组(6只)、AP组(24只)和GdCl3预处理+AP组(24只),后两组再分为4个时间点(每个时间点6只)。用雨蛙素诱导制作小鼠AP模型;用自动生化仪检测血清ALT、AST、LDH和淀粉酶(AMY)水平;用ELISA试剂盒检测血清FasL水平,用Western blotting法检测肝脏FasL蛋白的表达情况。结果AP时血清AST、ALT、LDH、AMY水平及肝脏FasL蛋白表达明显升高,AP组4、8、16和24h时血清FasL浓度(505.94±36.21,496.60±33.65,476.64±22.66,450.75±38.21)显著高于对照组(83.60±7.75,P<0.01);用GdCl3预处理后,在AP发生后升高的血清AST、ALT、LDH、AMY水平明显降低,肝脏FasL蛋白表达显著下调。GdCl3预处理组4、8、16h和24h时血清FasL浓度(211.37±24.86,190.41±20.36,200.49±32.03,178.60±7.93)显著低于AP组相应时点的浓度(P<0.01)。结论AP通过上调Kupffer细胞表达的FasL介导肝损伤,GdCl3通过抑制FasL的表达对AP肝损伤发挥保护作用。