Study on Processing Technology for Aconiti Kusnezoffii Radix by Bean Curd

[Objectives] The aim was to explore the best parameters for processing Aconiti Kusnezoffii Radix by bean curd. [Methods] Orthogonal test( L_(16)(4~3)) was designed to investigate the optimal soaking time,decocting time and bean curd proportion for processing Aconiti Kusnezoffii Radix by bean curd. The contents of monoester alkaloids and diester-alkaloids were measured as the evaluation indexes. [Results]The contents of monoester alkaloids were 0. 11%,0. 07%,0. 062% and 0. 048% respectively under the four levels of soaking time,were0. 081%,0. 066%,0. 074% and 0. 067% respectively under the four levels of decocting time,and were 0. 070%,0. 072%,0. 080% and0. 073% respectively under the four levels of bean curd proportion. The content of diester-alkaloids was all below 0. 034%. The influence intensity of the three factors on the content of monoester alkaloids ranked as soaking time > decocting time > bean curd proportion. Under any of the above conditions,the content of diester-alkaloids was below the limit of Chinese Pharmacopoeia. The content of diester-alkaloids was reduced obviously with the increased use of bean curd. [Conclusions] The optimum processing conditions for Aconiti Kusnezoffii Radix were A_3B_3C_2,i. e.,soaking time of 6 d,decocting time of 5 h and bean curd proportion of 25%.

Cytotoxicity of Mongolian Medicine <i>Aconitum kusnezoffii</i>

Aconitum kusnezoffii used as an analgesic and anti-inflammatory. It is often used not only in Mongolian medicine but also in traditional Chinese medicine. However, there are few studies on its impact of inflammatory cytokines. This study explored the effects of Aconitum kusnezoffii in vitro used human colon cancer (Caco-2) cells. Cytotoxicity was assessed by measuring effects on expression of IL-1β, IL-6, IL-8, and TNF-α used enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In vitro study demonstrated that incubation of Caco-2 cells with some kinds of Aconitum kusnezoffii at some concentrations inhibit secretion of TNF-α and FAXIU ACONITUM KUSNEZOFFII could inhibit the secretion of IL-1β. While IL-6 and IL-8 levels were unaffected after 24 h of treatment with Aconitum kusnezoffii, qujian Aconitum kusnezoffii, faxiu Aconitum kusnezoffii.

Matrix Solid-phase Dispersion Extraction of Alkaloids from the Roots of Aconitum kusnezoffii Reichb

Matrix solid-phase dispersion(MSPD) was developed for the extraction of four alkaloids, including aconitine, mesaconitine, hypaconitine and deoxyaconitine, from the roots of Aconitum kusnezoffii Reichb. The determination of the analyte was carried out by high performance liquid chromatography with UV detection. The alkaline alumina was used as sorbent. The mixture of acetonitrile and water was used as elution solvent. Several extraction parameters, such as type of sorbent, the ratio of sample to solid support material, type of the elution solvent and the volume of the elution solvent were tested. Mean recoveries ranged from 93.16% to 102.73%, with relative standard deviations from 0.27% to 4.17%. With the extraction efficiency and time expenditure taken into account, MSPD extraction should be a comparatively good method.

Identification of Xunxi Shujin Decoction by TLC

[Objectives]To establish a TLC qualitative method for the determination of Radix Aconiti,Radix Aconiti Kusnezoffii,Caesalpinia sappan L.and Radix zanthoxyli.[Methods]TLC was used to study the quality of Radix Aconiti,Radix Aconiti Kusnezoffii and C.sappan L.in Xunxi Shujin Decoction,and the influencing factors were investigated to optimize the TLC conditions.[Results]In the TLC identification test of Radix Aconiti,Radix Aconiti Kusnezoffii,C.sappan L.and R.zanthoxyli in Xunxi Shujin Decoction,the spots were clear,the resolution was good,the specific value was moderate,the negative control was not disturbed,and the specificity was strong.[Conclusions]The established TLC method was simple,specific and reproducible,and could be used for the quality control of Xunxi Shujin Decoction.

草乌致大鼠肝肾亚急性毒性的代谢组学研究

目的基于代谢组学技术分析和探讨草乌致大鼠肝肾亚急性毒性的生物标志物和可能的作用机制。方法以草乌为示例药物,以大鼠为研究对象,除正常组外,给药组灌胃相应溶液,连续给予28 d。通过代谢组学技术对采集的大鼠血清、肝、肾样本进行检测,用主成分分析结合偏最小二乘判别分析筛选肝肾亚急性毒性敏感标志物及代谢通路。结果代谢组学分析显示,与正常组比较,草乌组血清、肝、肾样本中分别鉴定得到34、23和30个差异代谢物,主要富集于ABC转运蛋白、精氨酸和脯氨酸代谢、癌症的中心碳代谢、烟酸和烟酰胺代谢等通路。结论初步认为草乌通过影响ABC转运蛋白、精氨酸和脯氨酸代谢、癌症的中心碳代谢等对肝肾造成损伤,亚精胺、羟脯氨酸、葡萄糖、L-亮氨酸和尿素可作为潜在的肝肾毒性敏感生物标志物。

草乌的研究进展及质量标志物预测

草乌药用价值极高,在中医、蒙医等领域具有悠久的用药历史,但因其中毒剂量和治疗剂量较为接近,治疗窗狭窄,其临床应用受到一定限制,因此全方位建立草乌的质量标准评价体系是十分必要的。从基源考证、化学成分和药理作用等几个方面对草乌的研究现状进行综述。基于中药质量标志物(Q-marker)理论,针对草乌活性毒性的药物特性,结合其化学成分、现代药理毒理活性研究等方面,推测乌头碱型二萜生物碱类和挥发油可作为其Q-marker,为草乌的质量评价研究提供科学依据。

诃子在藏药炮制中的应用

通过查阅近年来国内外文献,归纳、分析了诃子在藏药炮制中的应用以及诃子炮制一些矿物药和有毒植物药过程的研究进展,根据诃子化学成分推测诃子炮制铁粉、草乌的原理及减毒机制,为进一步深入探讨藏药诃子炮制矿物药、有毒植物药的机制提供参考。

草乌炮制研究概况

乌头类中药草乌是我国广泛使用的毒性药材,性热有大毒,归心、肝、脾、肾经,具有祛风散寒、温经止痛等功效。草乌毒性主要表现为可引发心律失常的心肌毒性,伴有心脏血管系统异常等问题,中毒严重时可导致死亡。因其毒性剧烈,乌头类药材生品不入药使用,需经炮制后入药。草乌炮制方法并无统一标准,差异表现在药材前期处理、蒸煮工艺、辅料选择等方面。本文对草乌毒性研究进展及炮制方法沿革进行归纳,为今后草乌的炮制方法等研究提供参考。

草乌化学成分、药理作用、毒性及蒙医学毒性控制方法概述

草乌所含的特征性成分二萜类生物碱是其主要毒性成分也是有效成分,具有抗炎、镇痛、抑菌、抗病毒、强心、抗肿瘤、局部麻醉等药理活性的同时也存在各种毒性作用。故传统医药通常通过炮制或配伍,降低其毒性,保障临床用药安全。作为中医药的重要组成部分蒙医药在这方面优势更为突出。

Rapid Differentiation of Aconiti Kusnezoffii Radix from Different Geographic Origins Using Ultra-Performance Liquid Chromatography Coupled with Time-of-Flight Mass Spectrometry

Objective:There are different geographic origins of Aconiti Kusnezoffii Radixs(AKRs)sold in the market with different quality.This study aims to establish a rapid analysis method to distinguish the different geographic origins of AKRs and to realize the rapid evaluation of their quality.Methods:An ultra-performance liquid chromatography coupled with time-of-flight mass spectrometry(UPLC-Q-TOF MS)method was utilized to acquire the constituents'information of AKRs from different geographic origins.MSE data and Progenesis QI software were employed to identify the chemical constitutes.Principal component analysis(PCA)was applied to comparing MS data to find the chemical markers of AKRs from different geographic origins.Results:Twenty-three components were detected and 17 out of them were identified,including diester-diterpenoid alkaloids,monoester-diterpenoid alkaloids,and amine-diterpenoid alkaloids.Three pairs of isomers were detected and two of them were distinguished by the retention time of standard samples.Thirteen chemical markers were screened out through PCA and orthogonal partial least square discriminant analysis.Through detecting Napelline or isomer of Napelline(m/z 360.2530)and Aconifine(m/z 662.3170),AKRs from inner Mongolia autonomous could be screened.According to the existence of benzoylaconine(m/z 604.3108)and Indaconitine(m/z 630.3159),it could be confirmed that the AKRs are from Xinjiang Uygur autonomous.AKRs that cannot detect compounds above-mentioned could be from Liaoning or Shanxi Province.Conclusions:The chemical profile could be used not only to distinguish the AKRs from different geographic origins but also to identify the true and false of AKRs.This study lays a foundation for the study of efficacy and toxic of AKRs.

基于药效团和分子对接探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1介导的减毒机制

目的:本研究利用药效团、分子对接及实时反转录PCR(RT-PCR)方法探究诃子制草乌通过瞬时受体电位香草酸1(TRPV1)介导的减毒机制。方法:采用Discovery Studio 4.0软件构建基于TRPV1激动剂分子共同特征的TRPV1激活药效团,虚拟筛选出草乌中的潜在活性成分;对草乌成分及诃子制草乌中引入的诃子成分进行Autodock vina分子对接研究;根据结果选出代表性成分,采用实时反转录PCR验证是否可促进心肌细胞中TRPV1 mRNA表达。结果:药效团共筛选出草乌中包括毒性较大的双酯型生物碱乌头碱、新乌头碱及次乌头碱在内的13个成分,分子对接结果表明这13个成分及诃子制草乌引入的诃子成分均有潜力与TRPV1结合。RT-PCR实验中没食子酸和新乌头碱在浓度≥25μmol/L时,均可明显促进大鼠H9c2心肌细胞中TRPV1 mRNA表达的增加,随着给药浓度的增大表达量增加,新乌头碱促进TRPV1 mRNA表达的作用更强。药效团、分子对接结果表明诃子和草乌中均含有多种具备TRPV1激活潜力的成分。结论:实验证明新乌头碱、没食子酸均可在一定程度上激活TRPV1通道,可作为TRPV1的激动剂。根据结果推测,诃子可能会通过拮抗草乌中的活性成分与TRPV1的结合,从而降低草乌通过TRPV1介导的毒性;也可能是诃子制草乌在引入没食子酸等诃子成分后,可在安全剂量范围内使TRPV1通道快速脱敏从而实现减毒。

SCX-SPE结合UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS分析草乌中的四类二萜生物碱

目的对草乌中的二萜生物碱进行表征分析。方法以强酸性阳离子交换树脂固相萃取(SCX-SPE)分离纯化草乌中的二萜生物碱,并结合超高效液相色谱串联四极杆静电场轨道阱质谱(UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS)进行结构鉴定。结果结合精确分子质量、多级质谱裂解规律、对照品对比、Clog P值及文献报道,共从草乌中鉴定了99个二萜生物碱类成分,包括双酯型二萜生物碱(DDA)27个,单酯型二萜生物碱(MDA)29个,酰胺型二萜生物碱(ADA)40个,多酯型二萜生物碱(PDA)2个,以及长链型二萜生物碱(LDA)1个。结论本文所建立的SCX-SPE结合UHPLC-Q-Exactive Orbitrap MS方法能快速地鉴定草乌中的二萜生物碱类成分,可为草乌的药效物质基础及质量控制研究提供科学依据。

草乌传粉过程中的广告效应与回报物质研究

虫媒传粉植物与其传粉者之间的相互作用被认为是被子植物花多样性的一个重要选择压力。这种相互作用体现在植物对传粉者的吸引以及传粉者行为对花粉的转运两个方面。本项研究通过去除不同的花部器官研究了草乌(Aconitum kusnezoffii)对其传粉者的吸引,并结合传粉者的访问行为和草乌花的生物学特性探讨了传粉过程与交配系统的适应。红光熊蜂(Bombus ignites)是草乌的有效传粉者。去除花萼片显著降低了红光熊蜂的访问频率,但去除特化成蜜腺叶的花瓣并没有显著改变红光熊蜂的访问频率,这表明草乌吸引红光熊蜂的主要结构是由5枚萼片组成的花部外观形态,而非花瓣。花蜜是草乌提供给红光熊蜂的回报物质,糖浓度为39.23%,组氨酸浓度为0.25μg/μL。草乌花较大、单花花期长、雌雄异熟、花粉寿命长,是一个自交亲和但需传粉者传粉完成繁殖过程的异交物种。草乌花序是无限花序,当上部的花处于雄性阶段时,下部的花正好处于雌性阶段。而红光熊蜂在草乌花序上的访问顺序通常自下而上,带来异交花粉为下部的花进行异花授精,同时又带走上部花的花粉,这就很好地促进了草乌的异交。草乌雄蕊自外向内逐渐成熟,是一种有效的限制传粉者单次访问浪费大量花粉的花粉装配策略,能提高植物通过花粉散布获得的雄性适合度。

考马斯亮蓝G-250染色法测定草乌中可溶性蛋白质含量

采用考马斯亮蓝G-250染色法对草乌药材中可溶性蛋白质含量进行了测定,建立了快速、灵敏的测定蛋白质的方法.结果表明,考马斯亮蓝G-250染色法简单、迅速,且相对较为准确,是测定低浓度蛋白质含量的有效方法.

几种杀虫植物对蚜虫的生物活性及与化学杀虫剂混用的联合毒力

通过杀虫植物的筛选测定发现,马齿苋(Portulacaoleracea)、北乌头(Aconitumkusnezoffii)、大籽蒿(Artemisiasieversiana)3种植物的丙酮提取液对禾谷缢管蚜(Rhopalosiphumpadi)、绣线菊蚜(Aphispomi)和菜缢管蚜(Rhopalosiphumpseudobrassicae)具有较高的生物活性。以不同溶液进行提取,马齿苋的水浸液和丙酮浸液活性较高,北乌头的丙酮浸液活性最高。与化学农药混用,3种植物提取液对吡虫啉和氧化乐果均表现明显增效,而与抗蚜威混用则无明显的增效作用。

中国乌头属植物药用亲缘学研究

毛茛科Ranunculaceae乌头属AconitumL.植物作为有毒植物及药用植物一直受到广泛的关注。本属全世界约有300余种,其中超过半数分布在中国。本文在总结乌头属二萜生物碱的化学分类及其分布、特征性二萜生物碱及其分类价值以及二萜生物碱的生源关系及其分类学意义的基础上,结合其毒性和疗效讨论了国产乌头属植物亲缘关系、化学成分和疗效及毒性之间的相关性,亦即药用亲缘学的初步研究。发现牛扁亚属subgen.Lycoctonum是以牛扁碱和C18-二萜生物碱为主的类群,由于其毒性中等,因而是寻找镇痛、抗炎等新药的一个对象。从二萜生物碱化学成分来看,露蕊乌头亚属subgen.Gymnaconitum并不显得最为进化,对其分类位置尚难作出最后的结论。乌头亚属subgen.Aconitum亚属下系之间的化学分类表现出如下特征:(1)唐古特乌头系ser.Tangutica和圆叶乌头系ser.Rotundifolia是以内酯型二萜生物碱为主的类群,毒性较小,是新药寻找的重点研究类群。保山乌头系ser.Bullatifolia以C20-二萜生物碱如光翠雀碱和宋果灵以及C19-二萜生物碱如乌头碱、滇乌碱和尼奥灵等为主。短柄乌头系ser.Brachypoda显示以3-乙酰乌头碱、乌头碱、伏乌碱等高度进化的乌头碱型二萜生物碱为主,胺醇类如尼奥灵次之,有时共存其他纳哌啉型C20-二萜生物碱的特征。准噶尔乌头系ser.Grandituberosa的化学特征是以高度进化的乌头碱型如乌头碱等和比较原始的胺醇如塔拉萨敏、尼奥灵等以及C20-二萜生物碱为主,均有较大毒性。褐紫乌头系ser.Brunnea则以C20-二萜生物碱如光翠雀碱和宋果灵为主,杂有高度进化的乌头碱型二萜生物碱如乌头碱等成分。化学分类上不支持其独立成为一个分支。以上各系组成乌头亚属的原始和中间过渡类群。其中唐古特乌头系和圆叶乌头系最为相近,褐紫乌头系可能是连接保山乌头系和短柄乌头系的“桥梁”,而准噶尔乌头系更靠近保山乌头系。(2)显柱乌头系ser.Stylosa是以含大茴香酸酯基的乌头碱型二萜生物碱以及塔拉萨敏和查斯曼宁胺醇类为主的类群,是块根较大的“大乌头”的主要来源,具有很大的毒性。兴安乌头系ser.Ambigua以含大茴香酸酯基的乌头碱型和原始胺醇类如塔拉萨敏、尼奥灵等二萜生物碱为主。蔓乌头系ser.Volubilia是以含大茴香酸酯基/苯甲酸酯基的乌头碱型和塔拉萨敏胺醇类以及高度进化的乌头碱型二萜生物碱为主的中间过渡类群。乌头系ser.Inflata以含15-羟基的单酯、双酯或多酯以及胺醇类乌头碱型二萜生物碱为主,且酯基中无大茴香酸酯基,此系是草乌的主要植物来源,具有很大的毒性,应十分慎用。这些系可能代表乌头亚属进化的类群。其中显柱乌头系与兴安乌头系可能较近缘。蔓乌头系可能是连接显柱乌头系/兴安乌头系与乌头系的中间类群。另外,保山乌头系、短柄乌头系和准噶尔乌头系可能是直接向显柱乌头系、蔓乌头系和乌头系过渡的较为原始的类群。(3)岩乌头系ser.Racemulosa从化学分类角度来看是一个特殊的类群,支持其独立成一个分支。其化学特征以牛扁碱型和乌头碱型的胺醇二萜生物碱如牛扁碱、异塔拉萨亭定和C20-二萜生物碱为主。如果单纯从化学成分来看,它与牛扁亚属植物似乎有一定关系。

草乌叶及其煎煮液中生物碱类药效组分的电喷雾串联质谱研究

目的:对草乌叶及其煎煮液中的乌头碱类药效组分进行定性分析,说明煎煮前后化学成分发生的变化。方法:电喷雾串联质谱分析法。结果:煎煮后草乌叶中的双酯型生物碱和三酯型生物碱均发生了水解。前者水解产物为苯甲酰乌头原碱和乌头原碱类生物碱;后者水解产物为3-乙酰乌头原碱类生物碱。结论:该法简便、快速、灵敏、特异性强,为草乌叶及复方制剂煎煮液中的生物碱类药效组分的分析提供了新方法。

高效液相色谱法测定草乌类药用植物活性成分含量

目的采用高效液相色谱测定草乌类药用植物中中乌头碱、乌头碱、次乌头碱的含量,对草乌类植物进行质量与资源评价。方法建立高效液相色谱方法,采用Phenomenex ODS色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,以乙腈-醋酸铵缓冲溶液（pH10.5）（54∶46）为流动相,流速为1.0mL·min^-1;检测波长为240nm。结果中乌头碱在0.28-2.80μg内呈良好的线性关系（r=0.9991）,平均回收率为98.9%（n=5）,RSD=0.93%;乌头碱在0.136-1.36μg内呈良好的线性关系（r=0.9992）,平均回收率为97.4%（n=5）,RSD=1.18%;次乌头碱在0.248-2.48μg内呈良好的线性关系（r=0.9991）,平均回收率为98.4%（n=5）,RSD=1.11%。北乌头、乌头与小白掌含有中乌头碱、乌头碱、次乌头碱3种生物碱;多根乌头含有中乌头碱、乌头碱2种生物碱;其他的样品含微量或几乎没有。多根乌头的3种生物碱总量最高。结论本方法分离效果好,分析速度快,方法稳定,结果准确。

草乌药材HPLC指纹图谱研究

目的:采用HPLC建立草乌药材的指纹图谱。方法:Kromasil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);乙腈-醋酸铵缓冲溶液(2.5‰冰醋酸-浓氨水,pH 10.5)(60∶40)为流动相;流速1.0 mL.min-1;检测波长240 nm;柱温30℃。结果:精密度和重复性试验中各共有峰相对峰面积的RSD均小于2%,所得的色谱图各色谱峰分离较好,基线平整,符合指纹图谱有关规定。结论:本方法快速、简便、准确、重复性好,结果可靠,可为草乌药材的质量评价提供有效手段。

蒙药草乌炮制前后二维红外相关光谱的分析研究

采用二维相关红外技术,并借助于变温过程所跟踪的动态光谱对蒙药生草乌进行了分析研究。蒙药生草乌和制草乌的一维谱图较相似,导数光谱进一步分析,1 745,1 468,1 337 cm-1处吸收峰在经过酸奶炮制之后向底波数位移,1 657 cm-1处吸收峰在经过炮制之后向高波数位移,而二维红外相关谱则差别较大,在1 300～800 cm-1波数范围内,生品的二维红外光谱存在3个主要的自动峰(1 650,1 560,1 470cm-1),其中以1 560 cm-1峰最强。自动峰和交叉峰形成明显的3×3的对称分布,均为正相关;制草乌在这一范围内的自动峰主要在4个区域,1 220与1 200 cm-1两个吸收峰组成的一个区域,1 140和1 070 cm-1两个尖锐的峰区,以及1 000～900 cm-1区域内宽大重叠的峰,各自动峰均为正相关。凭借二维红外相关谱上的自动峰和交叉峰可以较直观地鉴别生草乌和制草乌,而且还可以揭示两者相应各官能团的变化规律。该法快速、准确,可为鉴别药材加工后结构的变化规律提供一种新的方法和手段。