Kv1.3通道在哮喘患者外周血T淋巴细胞中的表达及对Th2细胞因子的影响

目的:检测Kv1.3钾通道在哮喘患者外周血T淋巴细胞中的表达水平,研究Kv1.3钾通道阻滞剂对哮喘患者外周血T淋巴细胞增殖及产生Th2细胞因子的影响,从而探讨Kv1.3钾通道阻滞剂应用于治疗哮喘患者慢性气道炎症的可能。方法:分离哮喘患者及健康对照者的外周血T淋巴细胞,检测T细胞中Kv1.3钾通道的mRNA及蛋白水平,并检测Kv1.3钾通道抑制剂ShK对T细胞增殖及产生Th2细胞因子的作用。结果:哮喘患者外周血T淋巴细胞的Kv1.3水平较健康对照者明显增高,Kv1.3钾通道抑制剂ShK能明显抑制T淋巴细胞的增殖及产生Th2细胞因子的能力。结论:Kv1.3可能是哮喘患者T细胞参与气道炎症的形成及发展的重要蛋白。选择性阻断Kv1.3钾通道可能成为哮喘未来治疗的方向之一。

Kv1.3通道阻滞剂与T、B淋巴细胞介导的自身免疫疾病

T、B淋巴细胞在免疫调节过程中扮演重要作用。当免疫系统调控出现紊乱时则会导致自身免疫等疾病的发生,已证实Kv1.3通道在T、B淋巴细胞亚型中表达数量的变化与此类疾病的发生一定的联系。特异性的Kv1.3通道阻滞剂是以Kv1.3通道为靶点并与Kv1.3通道结合,调节在淋巴细胞增殖中的细胞因子及相关的信号通路来遏制自身免疫疾病的发展。与传统的治疗此类疾病的方法相比有着其独特的优势,如较强特异性,较少的副作用等。这些发现对于深入研究自身免疫疾病的病理机制、早期诊断及新型药物的发现具有深远的意义。

抑制Kv1.3表达能够降低人牙周膜成纤维细胞增殖和分化成骨能力

目的探讨Kv1.3在人牙周膜成纤维细胞(h PDLFs)增殖和分化成骨能力中的作用。方法通过体外分离并培养健康人和牙周炎患者牙周膜成纤维细胞,应用细胞免疫荧光法、Q-PCR和Western blot检测Kv1.3在牙周炎h PDLFs中表达变化;并通过si RNA沉默抑制Kv1.3表达,使用MTT和流式细胞仪观察对h PDLFs的增殖和分化成骨能力的作用。结果细胞免疫荧光结果显示与健康组比较,牙周炎组h PDLFs中Kv1.3显著低表达(P<0.05);Western blot结果显示Kv1.3-si RNA能够明显抑制细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)和C-myc蛋白表达(P<0.05);流式细胞仪检测显示Kv1.3-si RNA能够显著抑制细胞G2/M期;同时,Western blot结果显示Kv1.3-si RNA明显降低碱性磷脂酶(ALP)和骨钙素(OCN)蛋白表达。结论抑制Kv1.3表达能够明显抑制h PDLFs的增殖和分化成骨能力。

力竭运动应激对小鼠T淋巴细胞钾离子通道Kv1.3的调节作用

为了观察力竭运动应激后对小鼠外周血T淋巴细胞钾离子通道表达以及对细胞调节性容积减少(regulatory volume decrease,RVD)的影响,探讨力竭运动应激导致的免疫抑制的可能机制。复制小鼠力竭模型后从外周血中分离出T淋巴细胞,测定其淋巴细胞转化功能,采用RT-PCR、Western blot分别从基因和蛋白质水平揭示力竭运动应激对小鼠外周血T细胞Kv1.3表达的调节作用,采用细胞成像系统测定T淋巴细胞在低渗透压时细胞容积的变化。结果显示力竭运动应激小鼠T淋巴细胞功能受抑制(P<0.05),小鼠外周血T淋巴细胞Kv1.3 mRNA和蛋白质表达水平明显下调(P<0.05),力竭运动应激会影响RVD的调节能力。结果说明,力竭运动应激导致小鼠外周血T淋巴细胞Kv1.3 mRNA和蛋白质表达水平明显下调,RVD调节能力下降,提示力竭运动应激条件下免疫功能的抑制可能与钾通道有关。

依普利酮基于阻断Kv1.3通道对抗Treg细胞体外促成纤维细胞增殖作用

目的 SD乳鼠心肌成纤维细胞(CFs)和成年SD大鼠脾脏调节性T细胞(Tregs)体外共培养,探讨二者相互作用,并观察依普利酮(EPL)对其的影响。方法免疫磁珠法分选大鼠Tregs,差速贴壁法分选大鼠CFs,分为CFs、CFs+Tregs、CFs+Tregs+EPL(30μmol·L^(-1))、Tregs组。孵育后,CCK-8法检测CFs的增殖情况;ELISA法检测CFs分泌Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和基质金属蛋白酶2(MMP-2)的蛋白相对表达水平;RT-q PCR检测Tregs的Kv1.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平;In-Cell Western blot法检测Tregs的Kv1.3通道蛋白质的表达水平。结果共培养48 h后,CFs增殖趋稳,共培养组CFs增殖明显(P<0.01),EPL可明显抑制其增殖(P<0.01);CFs分泌的Ⅰ型、Ⅲ型胶原和MMP-2的相对表达水平均明显增加(P<0.01),EPL可明显抑制其增加(P<0.01);Tregs的Kv1.3、KCa3.1、CRAC通道mRNA的相对表达水平分别增加6.95、1.99、1.53倍(CFs+Tregs vs Tregs,P<0.01),EPL明显抑制Kv1.3、KCa3.1 mRNA的表达(CFs+Tregs+EPL vs CFs+Tregs,P<0.01),其中Kv1.3通道的抑制最为明显;Tregs的Kv1.3通道蛋白增加了67.9%(CFs+Tregs vs Tregs,P<0.01),EPL可明显抑制其表达(P<0.01)。结论体外Treg与CFs共培养48h后,Tregs能明显促进CFs的增殖,EPL可以通过下调Tregs细胞膜上Kv1.3通道的表达,抑制Tregs的活化/增殖,间接抑制心肌纤维化。

龙血竭总黄酮对Kv1.3通道的调节作用

目的:探究龙血竭阻断Kv1.3通道的主要活性组分.方法:龙血竭总黄酮经优化工艺提取后,采用全细胞膜片钳实验检测其对内源性和外源性表达的Kv1.3通道调节作用.结果:龙血竭总黄酮对内源性和外源性表达的Kv1.3通道均具有较强的抑制作用,呈浓度依赖性和通道选择性.结论:总黄酮介导了龙血竭阻断Kv1.3通道,为进一步发现龙血竭中Kv1.3通道阻断剂提供了重要线索.

急性STEMI患者血同型半胱氨酸与Kv1.3通道、肌钙蛋白关系的研究

目的探讨急性ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者血浆同型半胱氨酸(Hcy)水平与淋巴细胞电压门控性钾通道(Kv1.3通道)、Kv1.3通道与心肌肌钙蛋白I(c Tn I)水平的相关性。方法 80例STEMI患者根据血浆Hcy水平分为STEMI合并高同型半胱氨酸血症(Hhcy)组(STEMI+Hhcy组,Hcy>15μmol/L,n=41)和对照组(STEMI组,Hcy≤15μmol/L,n=39)。抽取血标本后全自动生化仪测定Hcy、c Tn I及血脂等指标,密度梯度离心法提取淋巴细胞,实时荧光定量PCR检测Kv1.3 m RNA表达,Western blot检测Kv1.3蛋白表达。结果 STEMI+Hhcy组c Tn I水平高于STEMI组(μg/L:22.997±5.880 vs.12.881±6.343;P<0.01)。多元线性回归分析显示年龄、性别、高血压病、糖尿病、吸烟史、家族史、三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)对Hcy无明显影响(P>0.05)。STEMI+Hhcy组Kv1.3通道m RNA和蛋白相对表达量(1.35±0.14和0.85±0.12)较STEMI组升高(1.00±0.07和0.64±0.05,P<0.05)。Hcy水平与Kv1.3通道m RNA和蛋白表达水平呈正相关(r分别为0.299、0.542,P<0.05);Kv1.3通道蛋白表达水平与c Tn I水平呈正相关(r=0.644,P<0.05)。结论 Hcy可能对淋巴细胞Kv1.3通道表达起着一定的作用,导致血浆c Tn I水平升高。

大鼠动脉粥样硬化斑块中T淋巴细胞亚群及Kv1.3通道蛋白的表达

目的探究Kv1.3通道蛋白与动脉粥样硬化(AS)模型中活化的T淋巴细胞间的关系。方法 Wistar雄性大鼠24只,随机分为对照组(n=10)和AS组(n=14),采用高脂饲料喂养方法建立AS模型。分别于实验开始前,实验第8周,实验第12周观察各组大鼠体重变化。于第12周处死大鼠前取血,检测血清中总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-L)、高密度脂蛋白(HDL-L)和甘油三酯(TG)的水平。通过病理HE染色及免疫组织化学方法观察AS斑块内T淋巴细胞亚群分布和Kv1.3通道蛋白表达的改变。结果 AS组体重、TC、LDL-C较对照组明显升高(P均<0.05);HDL-C和TG两组无差异。AS组主动脉管壁可见明显斑块形成,对照组血管壁各层的组织结构正常。AS组动脉斑块部位内膜下及中膜层可见CD4+与CD8+T淋巴细胞聚集,以CD4+T淋巴细胞聚集为主,在病变部位Kv1.3通道蛋白表达增加。对照组血管内膜、中膜中未见T淋巴细胞聚集及KV1.3通道蛋白的表达。结论 Kv1.3通道可能在调节AS斑块部T淋巴细胞亚群的激活中起着重要作用。

特异性Kv1.3通道阻断剂对大鼠动脉粥样硬化的影响

目的研究特异性Kv1.3通道阻断剂对高脂喂养大鼠主动脉动脉粥样硬化(AS)发生的影响。方法构建AS大鼠模型,Wistar大鼠被随机分为正常对照(Control)组,AS组,AS药物治疗〔AS+Sh K(L5)〕组(n=10)。利用组织病理学方法观察三组大鼠主动脉组织病变;通过实时荧光定量PCR、Western印迹法检测大鼠主动脉组织Kv1.3通道和相关炎症因子表达水平;通过ELISA法检测大鼠外周血炎症因子水平。结果与Control组比较,AS组总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和甘油三酯(TG)水平均显著增高,高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平显著降低,而AS组和AS+Sh K(L5)组之间血脂水平均无差异(P>0.05)。大鼠主动脉组织HE染色显示AS组大鼠主动脉内膜增厚,中层平滑肌排列紊乱,炎症细胞浸润;AS+Sh K(L5)组较AS组主动脉组织病变有所减轻。mRNA水平,AS组Kv1.3道通和炎症因子干扰素(IFN)-γ、白介素(IL)-2、IL-10、IL-4、IL-1β的表达量明显高于Control组,而在AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。蛋白水平中AS组Kv1.3道通和炎症因子(IFN-γ、IL-2和IL-10)的表达量明显高于Control组,而AS+Sh K(L5)组的表达量明显低于AS组。AS组大鼠外周血炎症因子(IL-2、IFN-γ和IL-10)的水平较Control组升高,而AS+Sh K(L5)组较AS组有所降低。结论特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)能有效地抑制免疫细胞的活化,降低炎症因子的表达水平,从而减轻病变血管组织的炎症反应,同时可降低外周血炎症因子的水平,特异性Kv1.3通道阻断剂Sh K(L5)对AS的发生有一定的抑制作用。

Kv1.3钾通道在骨肉瘤中的表达及作用研究

目的探讨特异性短发卡RNA(shRNA)抑制Kv1.3钾通道对骨肉瘤MG-63细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应、Western blotting和免疫组化检测骨肉瘤MG-63细胞中Kv1.3钾通道的表达,并分别采用CCK-8法、裸鼠骨肉瘤异种移植模型和流式细胞仪检测MG-63细胞增殖、生长和凋亡的变化,采用Western blotting检测MG-63细胞中多聚ADP核糖聚合酶(PARP)和caspase-3的表达水平。结果 Kv1.3钾通道在骨肉瘤细胞中异常高表达。沉默Kv1.3钾通道的Ad5-Kv1.3-shRNA能从体内外有效地抑制MG-63细胞增殖并促进其早期凋亡。沉默Kv1.3钾通道可明显诱导细胞凋亡相关蛋白caspase-3和PARP的裂解。结论 Kv1.3钾通道参与骨肉瘤细胞增殖和凋亡的过程,有望成为骨肉瘤治疗及诊断的新靶点基因。

依普利酮对慢性心力衰竭患者CD4^+T淋巴细胞Kv1.3等通道mRNA及蛋白表达的抑制作用

目的:探讨依普利酮(EPL)对慢性心力衰竭(CHF)患者CD4^+T淋巴细胞Kv1.3等通道的mRNA及蛋白质表达的影响。方法:收集慢性心衰Ⅱ、Ⅲ期的患者及正常人全血样本(30例vs 20例)。免疫磁珠分选外周血CD4^+T淋巴细胞,利用流式细胞仪检测其纯度,CCK-8法检测不同浓度的EPL对CD4^+T淋巴细胞增殖的影响。共分为3组,Control组、CHF组及CHF+EPL组。RTq PCR检测各组培养体系中的Kv1.3、KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达;In-cell Western blot技术检测CD4^+T淋巴细胞膜上Kv1.3通道蛋白质的表达。结果:EPL的最佳抑制浓度为30μmol/L;CHF组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别是Control组的10.74倍和1.20倍(P<0.01),CHF+EPL组Kv1.3通道的mRNA和蛋白质的表达分别比CHF组降低了64.80%和39.62%(P<0.01);CHF组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达分别是Control组的4.73倍和3.77倍(P<0.01),CHF+EPL组KCa3.1和CRAC通道mRNA的表达比CHF组分别降低了19.30%和37.14%(P<0.01)。结论:CD4^+T淋巴细胞的三种离子通道的mRNA和/或蛋白质在慢性心力衰竭情况下均有高表达,依普利酮均能明显下调三种离子通道的mRNA和/或蛋白质,其中Kv1.3通道的变化尤为突出,推测醛固酮受体拮抗剂可能通过抑制CD4^+T淋巴细胞膜上的Kv1.3通道的激活,减少T淋巴细胞的活化/增殖,最终抑制CHF过程中炎症作用的发生发展而对心衰有利。

Kv1.3钾通道调节人脐静脉内皮细胞LOX-1受体摄取oxLDL

目的观察Kv1.3钾通道在LOX-1摄取oxLDL中的作用,并探讨其机制。方法分别以慢病毒载体shRNA-Kv1.3-LV3-pGLV-h1-GFP-puro和Kv1.3-LV5-EF1a-GFP-Puro转染人脐静脉内皮细胞(HUVECs),以获得HUVECs细胞中下调和上调表达Kv1.3蛋白。利用全细胞膜片钳技术记录Kv1.3蛋白过表达和下调的HUVECs Kv1.3 I/V曲线。以oxLDL与HUVECs共孵育后,分别应用免疫比色法和Fluo-3/AM荧光标记法测定细胞内胆固醇和钙离子相对含量。经Western blot法测定Kv1.3、LOX-1、p38、p38磷酸化水平。结果shRNA950转染组HUVECs Kv1.3 mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著降低(P<0.05),过表达转染组Kv1.3 mRNA和蛋白表达量较空白对照组显著升高(P<0.05)。Kv1.3表达上调后,I/V曲线上移,该效应可被奎尼丁抑制;Kv1.3表达下调后,I/V曲线下移。Kv1.3过表达组胆固醇相对水平明显高于对照组(P<0.05),shRNA950+oxLDL组胆固醇的相对含量低于oxLDL组(P<0.05)。Western blot法检测显示,Kv1.3过表达组的LOX-1蛋白表达量较对照组升高(P<0.05),Kv1.3敲低组的LOX-1蛋白水平较对照组减低(P<0.05);Kv1.3过表达组磷酸化p38与p38蛋白水平的比值高于对照组二者的比值(P<0.05),Kv1.3敲低组磷酸化p38与p38蛋白表达量的比值低于对照组两者的比值(P<0.05)。结论Kv1.3钾通道经p38信号通路参与调节HUVECs LOX-1受体摄取oxLDL。该研究为阐明LOX-1结合oxLDL的电荷依赖性机制增添了新的实验依据。

补髓生血颗粒对慢性髓劳病患者Kv1.3通道蛋白表达的影响

目的:探讨补髓生血颗粒对慢性髓劳病患者骨髓单个核细胞Kv1.3通道蛋白表达的影响。方法:32例慢性髓劳病患者温水冲服补髓生血颗粒,每次1袋,每日3次,连续服用6个月后收集患者及健康人群(n=10)骨髓液4 mL,应用Western blot方法检测慢性髓劳病患者治疗前后及健康人群骨髓单个核细胞Kv1.3通道蛋白。结果:慢性髓劳病患者治疗前Kv1.3通道蛋白表达低于健康人群(P<0.05),治疗后Kv1.3通道蛋白表达较治疗前升高,但仍低于健康人群(P<0.05)。结论:补髓生血颗粒可能通过提高慢性髓劳病患者骨髓单个核细胞Kv1.3通道蛋白表达水平,修复因整合素β1介导的细胞迁移及黏附异常损伤的造血微环境,从而促进骨髓造血干细胞增殖。

人Kv1.3通道基因转染人胚胎肾细胞的研究

目的:建立表达人Kv1.3通道的细胞模型,为临床研究提供帮助。方法:Lipofactamine2000脂质体将人Kv1.3通道基因转染人胚胎肾细胞(HEK293),通过荧光显微镜和全细胞膜片钳技术观测人Kv1.3通道基因的表达。结果:pcDNAHKv1.3真核表达载体转染HEK293细胞2 d后,荧光显微镜可观察到人Kv1.3通道表达;3 d后全细胞膜片钳技术记录到人Kv1.3通道基因编码的通道电流。结论:pcDNAHKv1.3真核表达载体转染HEK293细胞为人Kv1.3通道的研究提供良好的真核细胞表达系统和细胞模型,有利于指导治疗自身免疫性疾病新药的开发。

蝎毒肽作为Kv1.3离子通道阻滞剂研究进展

由于毒性低、疗效好、易获得等优点,天然产物已成为治疗一些疾病的重要药物来源。来源自蝎子的蝎毒肽已用于治疗自身免疫等多种疾病,其主要机制是通过抑制离子通道而产生治疗作用,Kv1.3通道是其主要作用靶点。本文总结了蝎毒肽作为阻滞剂作用于Kv1.3离子通道治疗自身免疫性疾病、肿瘤、炎症、凝血等方面的研究进展,并阐述了其作用机制,以期为蝎毒肽的进一步的开发利用提供依据。

特异性Kv1.3阻滞剂调节巨噬细胞自噬在抗结肠炎中的作用

目的 探讨特异性Kv1.3阻滞剂PAP-1抗DSS结肠炎小鼠的作用机制。方法 将C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、PAP-1对照组、DSS模型组、DSS+PAP-1组。5% DSS制备结肠炎模型,PAP-1(3 μg·g -1 ,每天3次,连续7 d)腹腔注射给药。进行DAI评分;实验结束行结肠HE染色评分,结肠组织匀浆检测MPO活性及炎症因子水平;免疫荧光显微镜观察结肠巨噬细胞改变;透射电镜观察巨噬细胞自噬结构;qPCR、Western blot检测小鼠结肠和巨噬细胞iNOS、IL-1β及自噬相关标志物表达。结果 PAP-1减少DSS结肠炎小鼠体质量的下降,降低DAI及结肠HI评分( P <0.05);PAP-1降低结肠MPO活性及促炎因子水平( P <0.05)。PAP-1降低结肠F4/80表达,使腹腔巨噬细胞及脾巨噬细胞内自噬泡增多;同时,PAP-1降低结肠、腹腔巨噬细胞和脾巨噬细胞iNOS、IL-1β及p62表达,升高LC3-Ⅱ及Beclin-1表达( P <0.05)。结论 PAP-1可能通过减少结肠炎小鼠巨噬细胞自噬受损,降低炎症因子水平,减轻结肠炎症损害。

慢性心衰大鼠CD4^+ CD25^+ Treg细胞Kv1.3钾通道电流变化

目的观察慢性心衰大鼠脾脏CD4^+CD25^+调节T细胞(Treg)电压依赖性Kv1.3钾通道电流变化,为心衰发生、发展的免疫学机制提供证据。方法将25只健康雄性SD大鼠随机分为冠脉结扎的慢性心衰组(CHF组,n=18)和不结扎冠脉的对照组(Control组,n=7),手术结扎冠脉前降支建立心衰模型,通过超声心动图、血流动力学、血浆脑尿钠肽(BNP)及心肌Masson染色的检测确定心衰模型,应用免疫磁珠分离两组大鼠脾脏CD4^+CD25^+Treg细胞,采用全细胞膜片钳技术分别记录CHF组与Control组CD4^+CD25^+Treg细胞Kv1.3通道电流变化。结果CHF组左室射血分数(LVEF)为(39.3±10.0)%,较Control组[(84.5±3.7)%]明显降低(P<0.01);左室舒张末压(LVEDP)为(4.4±0.3)mmHg,较Control组[(11.6±1.4)mmHg]显著降低(P<0.01);血浆BNP水平为(562.0±22.0)μg/L,较Control组[(366.2±21.9)μg/L]显著升高(P<0.01)。Masson染色中,Control组红染的心肌细胞较多,细胞条纹清晰,CHF组大量蓝染的胶原纤维取代心肌纤维成条索状。CHF组大鼠CD4^+CD25^+Treg细胞Kv1.3钾通道峰值电流密度为(272.7±27.7)p A/p F,较Control组的(65.6±6.4)p A/p F明显增大(P<0.01)。两组大鼠CD4^+CD25^+Treg细胞膜电容分别为(1.67±0.14)p F和(2.07±0.18)p F,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 CHF组CD4^+CD25^+Treg细胞Kv1.3通道峰值电流密度增大,提示其可能参与慢性心衰的发生和发展。

Kv1.3在持续不卧床腹膜透析相关性腹膜炎腹腔巨噬细胞中的表达及低钾对巨噬细胞功能的影响

目的探讨Kv1.3在持续不卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)相关性腹膜炎患者腹腔巨噬细胞中的表达及低钾对巨噬细胞功能的影响。方法以2009年10月至2010年8月在江西省人民医院住院的CAPD相关性腹膜炎患者30例作为实验组,以2009年10月至2010年8月在江西省人民医院住院的CAPD无腹膜炎患者30例作为对照组。流式细胞仪检测腹腔巨噬细胞Kv1.3表达;按不同K+浓度分为4组:5.4mmol.L-1 K+组(正常浓度对照组)、2.0mmol.L-1 K+组、4.0mmol.L-1 K+组和10.0mmol.L-1 K+组。将Raw 264.7巨噬细胞与不同K+浓度组置于RPMI1640培养基中共同培养。经LDH、中性红吞噬、大肠杆菌(E.coli)菌落形成单位(colony forming unit,CFU)测定等,观察其对巨噬细胞活性、吞噬能力、杀菌能力的影响。结果与对照组比较,实验组患者透出液中巨噬细胞Kv1.3表达下降,但差异无统计学意义[平均荧光强度:(8.78±2.30)%vs(9.54±3.61)%,P>0.05]。2.0、4.0、10.0mmol.L-1 K+组Raw264.7细胞培养4、8、12、24hLDH水平与5.4mmol.L-1 K+组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),2.0、4.0、10.0mmol.L-1 K+组Raw264.7细胞培养8、12、24hLDH水平与细胞培养4h比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。与5.4mmol.L-1 K+组比较,2.0mmol.L-1 K+组吞噬中性红显著下降(0.21±0.02vs 0.15±0.01,P<0.01),4.0、10.0mmol.L-1 K+组吞噬中性红均无明显变化(0.21±0.02vs 0.19±0.03,0.22±0.05,均P>0.05);与4.0mmol.L-1 K+组比较,2.0mmol.L-1 K+组吞噬中性红显著下降(0.19±0.03vs 0.15±0.01,P<0.01);与10.0mmol.L-1 K+组比较,2.0、4.0mmol.L-1 K+组吞噬中性红显著下降(0.22±0.05vs 0.15±0.01,0.19±0.03,P<0.01)。与5.4mmol.L-1 K+组比较,2.0mmol.L-1 K+组吞噬细菌数及杀菌数显著下降(P<0.05);与10.0mmol.L-1K+组比较,2.0、4.0mmol.L-1 K+组吞噬细菌数及杀菌数均显著下降(均P<0.01)。结论 CAPD相关性腹膜炎巨噬细胞Kv1.3表达无显著的改变,但低钾能显著地降低巨噬细胞吞噬和杀菌的功能。

靶向干扰Kv1.3通道基因表达对大鼠调节性T细胞的影响

目的探究靶向 RNA干扰(RNAi)KCNA3(Kv1 3)基因后,体外给予依普利酮(eplerenone,EPL),分析 Tregs细胞活化增殖的变化。方法将慢病毒载体转染至大鼠调节性T细胞(Tregs)后,qPCR法和全细胞膜片钳法检测敲减效率。ELISA法检测 Tregs组、Tregs+EPL组、RNAi Tregs组、RNAi Tregs+EPL组细胞因子 IL 10、TGF β水平的变化。结果慢病毒成功转染 Tregs细胞,Kv1 3通道 mRNA水平和电流密度抑制率分别为 78%和 71 3%;与 Tregs组相比,RNAi Tregs组内外液 TGF β水平明显降低(P<0 01);Tregs+EPL组内外液 TGF β水平均降低(P<0 05);与 RNAi Tregs组相比,RNAi Tregs+EPL组内外液 TGF β水平无明显变化;而 Tregs组、Tregs+EPL组、RNAi Tregs组和 RNAi Tregs+EPL组内外液 IL 10水平变化不明显。结论 Kv1 3通道介导 Tregs的活化增殖,而 EPL可通过直接抑制 TregsKv1 3通道,减少 Tregs活化增殖,进而抑制 TGF β的分泌水平,说明依普利酮是 Kv1 3通道的特异性阻断剂。

Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细动脉的调节作用

目的研究Kv1.1及Kv1.3通道亚型对小鼠肠系膜微细血管的调节作用。方法以健康6~8周C57BL/6雄性小鼠肠系膜微细动脉作为研究对象,应用丹麦DMT520A离体微血管张力测定系统记录血管张力变化。应用广谱电压依赖性钾通道(Kv)阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1,Kv1.1通道选择性阻断剂TEA分别作用于静息状态,KCl及NE预收缩动脉,记录血管张力变化情况。应用Kv通道阻断剂4-AP,Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1作用于血管,观察Kv及Kv1.3通道在0 mmol/L Ca^(2+)及2 mmol/L Ca^(2+)K-H液中对NE收缩曲线的作用。结果 Kv通道阻断剂4-AP可引起静息状态的血管收缩,并进一步收缩KCl预收缩的血管,但浓度依赖性舒张NE预收缩的动脉,并且与对照组相比,4-AP能明显抑制NE在0 mmol/L Ca^(2+)液中所致的血管收缩[(3.45±0.24)m N vs(0.11±0.02)m N,P<0.01]。Kv1.3通道选择性阻断剂PAP-1未能收缩静息状态的血管,但可使KCl预收缩的血管发生轻微舒张反应,却明显舒张NE预收缩的动脉,而且PAP-1既可抑制NE在0 mmol/L Ca^(2+)K-H液中所致的血管收缩[对照组vs PAP-1组:(4.28±0.53)m N vs(2.75±0.49)m N,P<0.05],又可抑制在2 mmol/L Ca^(2+)液中的收缩张力[对照组vs PAP-1组:(7.08±0.58)m N vs(5.90±0.80)m N,P<0.05]。Kv1.1通道选择性阻断剂TEA可引起静息状态的血管收缩,但在0 mmol/L Ca^(2+)液中该作用消失,同时对KCl或NE预收缩的动脉均无明显作用。结论 Kv通道可调节小鼠肠系膜动脉的舒缩反应。其中Kv1.1通道主要发挥血管收缩调节作用,可能与促进血管平滑肌细胞外钙内流有关,而Kv1.3通道主要发挥血管舒张调节作用,可能同时抑制平滑肌细胞内钙释放和细胞外钙内流。