士的宁对Kv4.3钾通道的影响

目的 探究士的宁对Kv4.3钾通道的影响。方法 于2019年6—10月在大连理工大学以HEK293T细胞为载体,瞬时转染Kv4.3钾通道,形成Kv4.3-HEK293T细胞,一共选取24个Kv4.3-HEK293T细胞,采用全细胞膜片钳技术,加药前记录的数据为对照组,1μmol/L士的宁处理后的数据为观察组,研究士的宁对Kv4.3电流和动力学参数的影响。结果 与对照组相比,1μmol/L士的宁能抑制Kv4.3电流;1μmol/L士的宁能使半数激活电压由(15.41±2.87)mV降到(-2.10±2.08)mV,差异有统计学意义(t=12.101,P<0.001);1μmol/L士的宁能使半数失活电压降低,但差异无统计学意义(P>0.05);1μmol/L士的宁能使失活后恢复时间τ由(38.64±2.10)ms增加到(48.52±2.79)ms,差异有统计学意义(t=6.930,P<0.001)。结论 士的宁作为中枢兴奋药,其作用机制是可以通过影响Kv4.3钾通道的激活和失活后恢复过程来抑制Kv4.3钾电流。

睡眠剥夺致大鼠心律失常的KV4.3钾离子通道机制研究

目的观察睡眠剥夺后大鼠的心电图改变及其心室肌组织KV4.3钾离子通道mRNA和蛋白表达情况,探讨睡眠剥夺致心律失常的发生机制。方法 48只清洁级健康成年雄性SD大鼠随机分6组(每组8只):正常对照(CC)组,大平台实验(TC)组及睡眠剥夺(SD)13、5、7、d组。睡眠剥夺(SD)组以改良多平台睡眠剥夺法(MMPM)建立睡眠剥夺模型,观察13、5、、7d睡眠剥夺后大鼠心电图的变化,并通过RT-PCR及Western blotting方法检测大鼠心肌组织KV4.3钾离子通道基因的mRNA和蛋白表达水平。结果睡眠剥夺后大鼠心电图改变以心律失常为主:与CC组大鼠比较,TC组大鼠心电图表现为窦性心动过速;SD1d组出现频发房性早搏;SD3d组出现室性心律失常(表现为频发的多形性室性早搏及短阵室速);SD5d组呈不完全性右束支传导阻滞波形;SD7d组房性心律与室性心律分离,呈三度房室传导阻滞波形,伴室性逸搏、窦性停搏,ST段明显抬高并与高尖的T波融合。随着睡眠剥夺时间的延长,心肌组织KV4.3钾离子通道mRNA及蛋白表达水平均呈逐渐下调趋势,至睡眠剥夺7d时,mRNA及蛋白表达量分别仅为正常大鼠的1/9和1/4。结论睡眠剥夺可致大鼠心律失常,并随剥夺时间的延长而加重;心肌组织KV4.3钾离子通道基因表达下调可能是睡眠剥夺致心律失常的机制之一。

普罗帕酮对钾通道亚型Kv4.2和Kv4.3电流的影响

目的 研究普罗帕酮对钾通道亚型Kv4 2和Kv4 3电流的影响。方法 采用全细胞膜片钳技术记录稳定表达Kv4 2和Kv4 3电流的人胚胎肾细胞株 (HEK2 93细胞 )电流的变化。结果 ①普罗帕酮明显抑制Kv4 2和Kv4 3电流 ,呈浓度依赖性 ,IC50 分别为 1 0 3 μmol·L- 1 和 71 μmol·L- 1 ;②普罗帕酮明显加速Kv4 2和Kv4 3电流失活 ,1 0μmol·L- 1 的普罗帕酮可使Kv4 2电流衰减时间常数τ由(38 9± 2 1 )ms变为 (9 9± 1 8)ms ,半数最大失活膜电位V1 /2 由 (- 66 6± 0 8)mV左移至 (- 70 9± 1 1 )mV ;1 0 0μmol·L- 1 的普罗帕酮可使Kv4 3电流衰减时间常数τ(1 4 4 8± 2 0 8)ms变为 (1 8 5± 2 8)ms,半数最大失活膜电位V1 /2 由 (- 4 5 6± 1 9)mV左移至 (- 52 3± 2 1 )mV ;③普罗帕酮明显左移Kv4 2和Kv4 3电流的激活曲线 ,1 0μmol·L- 1 的普罗帕酮可使Kv4 2电流半数最大激活膜电位V1 /2 由 (- 4 1± 0 5)mV左移至 (- 1 6 1± 2 4)mV ;1 0 0μmol·L- 1 的普罗帕酮可使Kv4 3半数最大激活膜电位V1 /2由 (- 6 0± 1 1 )mV左移至 (- 1 6 5± 3 0 )mV。结论 普罗帕酮明显抑制Kv4 2 ,Kv4 3电流 ,该作用可能是其治疗心律失常的机制之一。

兔心房组织Kv4.3钾通道基因表达的增龄性变化研究

目的观察不同年龄组兔心房Kv4.3钾通道mRNA表达的增龄性变化。方法选择家兔24只,分为幼年组(14~21d)、成年组(8~10个月)、老年组(30~35个月),每组8只,实时荧光定量PCR检测兔心房Kv4.3钾通道mRNA表达情况。结果 3组Kv4.3钾通道mRNA表达水平比较,差异有统计学意义(P<0.05)。老年组与幼年组比较表达水平明显增高(P<0.05);成年组与老年组表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论增龄引起Kv4.3钾通道转录水平的增高,可能是参与心房颤动电重构的一个。

心房颤动患者瞬间外向钾电流重构的分子基础

目的 研究心房颤动 (AF)患者瞬间外向钾电流 (Ito1)重构的分子基础。方法 应用RT PCR、免疫组化和免疫电镜方法检测持续窦性心律 (SR)、阵发性AF (PAF)、慢性AF小于或等于 6个月 (AF≤ 6M )和大于 6个月 (AF >6M )组患者右心耳组织电压依赖kv4 3钾通道α亚基(VDkv4 3α)基因和蛋白表达 ,并以图像分析系统对组化抗原表达进行半定量分析。结果 PAF、AF≤ 6M和 >6M组kv4 3αmRNA的表达明显低于SR组。kv4 3αmRNA表达与AF分数、左心房内径及平均心房率成明显负相关 ,经ANOVA剔除左心房内径的影响 ,各组mRNA表达较SR组仍显著下降 (P <0 0 5 )。离子通道阳性表达为棕褐色的细颗粒状 ,主要分布在细胞膜和胞浆内的T管系统 ;免疫电镜检测 ,VDkv4 3α特异的阳性表达为电子密度高的黑色圆形胶体金颗粒 ,在细胞膜呈现不连续的点状分布 ,在胞浆T管内呈点状散在分布。组化结果半定量分析表明 ,PAF、AF≤ 6M和AF >6M组中kv4 3α蛋白表达较SR组均明显下降 ,kv4 3α蛋白的表达与临床资料进行直线回归分析 ,发现kv4 3α的蛋白表达仅与AF分数呈明显负相关 ;并且 5例风湿性心脏病患者左、右心耳VDkv4 3α蛋白表达差别不明显。结论 VDkv4 3钾通道除分布在细胞膜外 ,广泛分布在胞浆的T管系统。