重组L-天冬酰胺酶Ⅱ的中试工艺及其性质的研究

目的 :通过重组L 天冬酰胺酶Ⅱ中试工艺及其性质的研究 ,旨在获得大量的高纯度产品。方法 :采用 5 0 0L发酵罐发酵 ,对所获得菌体进一步提取纯化 ,产品用还原SDS PAGE(十二烷基硫酸钠 聚丙酰胺凝胶电泳法 ) ,HPLC测定纯度 ,质谱和等电聚焦电泳分别测相对分子质量、等电点 ,并进行了紫外扫描。结果 :发酵液产酶活力达到 2 0 0U·mg-1,提取回收率为80 % ,纯化总回收率为 5 7% ,产品比活为 2 2 0U·ml-1,电泳 30 μg上样量显示一条带 ,HPLC测纯度大于 95 %。该酶Mr为13835 6 ,pI为 4.85 ,紫外最大吸收值在 2 78nm处。 结论 :本研究对实现重组L 天冬酰胺酶Ⅱ的工业化生产有重要意义。

聚乙二醇化学修饰的重组L-门冬酰胺酶对小鼠白血病细胞P_(388)的抑制作用

目的 :考察聚乙二醇 (polyethyleneglycol,PEG)化学修饰的重组L 门冬酰胺酶 (recombinantL asparaginase ,rL ASP)的抗肿瘤活性。方法 :PEG化学修饰rL ASP ,获得的化学修饰酶 (polyethylenegly colmodifiedrecombinantL asparaginase ,rL ASP PEG)利用十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰胺凝胶电泳法 (sodi umdodecylsulfatepolyacrylamidegelelectrophoresis ,SDS PAGE)观察其分子大小变化 ,四甲基偶氮唑盐(3 (4 ,4 dimcthylthioazol 2 yl) 2 ,5 diphenyl tetrazoliumbromide ,MTT)法和流式细胞仪 (flowcytometer,FCM )检测rL ASP PEG对体外培养的小鼠白血病细胞P3 3 8增殖作用的抑制作用 ,腹腔给药考察rL ASP PEG对小鼠移植性实体瘤P3 3 8抑瘤效果 ,透射电镜(transmissionelectronmicroscopy ,TEM )观察rL ASP PEG引起的肿瘤组织超微病理变化。结果 :SDS PAGE显示 ,rL ASP PEG的分子量大于rL ASP ;MTT实验表明 ,rL ASP PEG能抑制体外培养的小鼠P3 88白血病细胞的增殖 ,半数有效浓度 (inhibitoryconcen tration 5 0 % ,IC50 )为 2 .0 5 6IU·ml-1。FCM结果表明 ,rL ASP PEG主要将肿瘤细胞P3 88抑制在G0 +G1期 ,S期细胞减少。DBA 2荷瘤小鼠的抑瘤实验表明rL ASP PEG对移植性实体瘤P3 3 8有显著抑制作用 。