L型氨基酸转运体1和血管内皮生长因子在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨L型氨基酸转运体1(LAT1)和血管内皮生长因子(VEGF)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测68例PTC和相应癌旁组织中LAT1蛋白及VEGF蛋白的表达,并分析LAT1与PTC临床病理参数的关系及LAT1和VEGF的相关性。结果 LAT1蛋白在PTC组织和相应癌旁组织中的阳性表达率分别为83.8%和8.8%,VEGF蛋白在PTC组织和相应癌旁组织中的阳性表达率分别为88.2%和7.4%,LAT1蛋白和VEGF蛋白在PTC组织中的阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05);LAT1蛋白在PTC组织中的阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、性别和肿瘤大小无关(P>0.05);PTC组织中LAT1蛋白和VEGF蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 LAT1可能通过调控VEGF表达而促进PTC的发生与演进,并可能成为PTC治疗的一个新的分子靶点。

从血脑屏障药物转运机制探究平痫冲剂的抗痫作用

目的观察平痫冲剂的抗痫作用,并探讨其作用机制。方法将62只3周龄Wistar大鼠随机分为空白组12只,造模组50只,采用戊四唑(pentetrazol,PTZ)腹腔注射制备癫痫模型;模型制备成功后,随机分成模型组、西药组及平痫冲剂组,每组各12只,西药组给予丙戊酸钠灌胃,平痫冲剂组给予平痫冲剂灌胃。干预7 d后,观察癫痫大鼠运动皮质区的组织形态结构;免疫组化、RT-qPCR以及Western blot检测大脑运动皮质区组织L型氨基酸转运体(L-type amino acid transporter,LAT)1、P糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)的表达情况。结果与空白组比较,模型组大鼠大脑运动皮质区神经元数量减少(P<0.01),LAT1蛋白及mRNA表达下降(P<0.05),P-gp、BCRP及其mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组比较,平痫冲剂组大鼠大脑运动皮质区神经元数量增多(P<0.05),神经元病理形态有所改善,LAT1及其mRNA表达升高(P<0.01),P-gp、BCRP及其mRNA表达下降(P<0.01)。结论平痫冲剂可能通过调控血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)药物转运体P-gp、BCRP、LAT1的表达,从而发挥抗痫作用。

氮氧自由基与酪氨酸偶联物的设计合成与抗缺氧活性研究

为了提高氮氧自由基HPN的靶向性和抗缺氧活性,本研究基于大中型氨基酸转运体(LAT-1)在脑组织高表达的特点,将HPN同酪氨酸通过不同长度烷基链相连,设计合成了2个脑靶向HPN衍生物。化合物7、8产率均在60%以上,产物结构经红外光谱(IR)、电子顺磁共振(EPR)、高分辨质谱(HRMS)分析确认。抗缺氧活性实验结果表明:两个化合物可以延长常压密闭缺氧小鼠的生存时间,降低急性减压缺氧小鼠的死亡率,并且在仅为HPN给药剂量一半的情况下表现出与HPN相似的抗缺氧活性。

胶质瘤干细胞新标志物CD98轻链蛋白LAT1筛选鉴定的实验研究

目的筛选鉴定胶质瘤干细胞新标志物CD98轻链蛋白L型氨基酸转运体1(LAT1).方法采用流式单色标记法检测U87及U251胶质瘤细胞中CD98重链蛋白CD98hc、CD98轻链蛋白LAT1以及CD133的表达,以选取胶质瘤细胞中可能的、潜在的干细胞标志物.采用流式细胞学技术分选LAT1阳性(LAT1^(+))和LAT1阴性(LAT1^(-))胶质瘤细胞,采用细胞免疫荧光检测、成球实验、体外极限稀释实验鉴定细胞干性.诱导分化培养胶质瘤干细胞,采用蛋白质免疫印迹法检测LAT1、分化细胞标志物β-tubulinⅢ和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达.通过构建裸鼠皮下荷瘤模型,观察LAT1^(+)和LAT1^(-)胶质瘤细胞在裸鼠皮下的成瘤情况(分别为LAT1^(+)组、LAT1^(-)组).结果流式细胞学结果显示,U87细胞LAT1(SLC7A5)阳性表达率为(1.99±0.18)%,CD133阳性表达率为(2.18±0.29)%;U251细胞LAT1(SLC7A5)阳性表达率为(6.24±0.69)%,CD133阳性表达率为(4.79±0.64)%.免疫荧光检测结果显示,LAT1^(+)-U251和LAT1^(+)-U87细胞的Sox2、Olig2和CD133阳性表达率均较高;LAT1^(-)-U251和LAT1^(-)-U87细胞的Sox2、Olig2和CD133阳性表达率均较低.成球实验和极限稀释实验显示,LAT1^(+)-U251细胞成球率优于LAT1^(+)-U87细胞(P=0.005);LAT1^(-)-U251和LAT1^(-)-U87细胞均未成球.蛋白质免疫印迹检测结果显示,LAT1^(-)-U251细胞未分化和诱导分化培养时,均较低表达β-tubulinⅢ、GFAP;LAT1^(+)-U251细胞分化前低表达β-tubulinⅢ、GFAP,而诱导分化后β-tubulinⅢ、GFAP表达显著增加(均P<0.05),LAT1表达显著降低(P=0.007).裸鼠成瘤模型结果显示,21 d和28 d LAT1^(+)组肿瘤体积均大于LAT1^(-)组,差异均具有统计学意义(均P<0.05);28 d时,LAT1^(+)组肿瘤重量大于LAT1^(-)组肿瘤重量,差异具有统计学意义(P=0.007).结论CD98轻链蛋白LAT1是潜在的胶质瘤干细胞标志物.