甘草次酸对大鼠心室肌细胞L型钙离子电流的影响

目的观察甘草次酸(glycyrrheticacid,Gta)对大鼠单一心室肌细胞L型钙离子电流(ICa-L)的影响。方法以Langendoff匀速灌流体外大鼠心脏,Ⅰ型胶原酶酶解分离单一大鼠心室肌细胞,将心室肌细胞悬液放入容积为0.2~0.3mL的浴槽内,间隔相同时间分别向浴槽内加入0.1,1.0,10.0μmol·L-1Gta,应用全细胞膜片钳技术记录不同浓度Gta对单一大鼠心室肌细胞ICa-L的影响;保持电位为-30mV、指令电位为-40^+60mV、步阶脉冲为10mV、时程为300ms、刺激频率为0.5Hz的条件下,引出钙离子电流,取指令电位与相对应的钙离子通道电流作用结果制作不同浓度Gta下L型钙离子通道的电流-电压(I-V)关系曲线。结果Gta浓度分别为0.1,1.0,10.0μmo1·L-1时可剂量依赖性地降低ICa-L,分别使ICa-L从加入Gta前的(2.30±0.29)nA降至(1.96±0.34),(1.37±0.24),(0.66±0.20)nA(与加入Gta前比较,均P<0.01);Gta0.1,1.0,10.0μmo1·L-1也可抑制L型钙离子I-V曲线,使I-V曲线上移,但峰值电流不变。结论Gta通过阻滞L型钙通道抑制L型钙离子内流,这种机制可能与Gta抗心律失常作用有关。

钙调神经磷酸酶对肥大乳鼠心室肌细胞L型钙离子通道电流的调控作用

目的探讨钙调神经磷酸酶(CaN)对乳鼠肥大心室肌细胞L型钙离子通道电流(ICa-L)的调控作用。方法1d龄SD大鼠乳鼠心室肌细胞,培养24h后换无血清培养基,分组干预48h:Null组为空腺病毒载体干预,Null+PE组为空腺病毒载体联合苯肾上腺素(PE)干预,Ad-CnAβshRNA(A1)组给予重组腺病毒shRNA干扰载体介导沉默编码CaN之A亚基β亚型(CnAβ)基因干预,最后为A1+PE组。免疫印迹检测CnAβ蛋白表达;全细胞膜片钳技术记录ICa-L离子通道电流。结果 PE刺激使心室肌细胞肥大、CnAβ蛋白表达上调、ICa-L离子通道电流密度增加。而沉默CnAβ基因能明显抑制PE刺激的上述效应。结论 CaN参与了肥大乳鼠心室肌细胞ICa-L的调控。

微管解聚对大鼠心肌细胞自主搏动和动作电位的影响及其机制

目的观察微管解聚对大鼠心肌细胞自主搏动频率、动作电位（AP）、耗氧量的影响并探究其机制。方法将180只SD大鼠乳鼠分12批处理进行实验，每批取15只大鼠乳鼠处死，剪取心脏组织分离培养心肌细胞，分别接种至1个铺有6块圆形盖玻片的12孔板、1个铺有6块方形盖玻片的12孔板、2个细胞培养瓶、2个细胞培养皿。将培养3d的各容器中细胞按随机数字表法分为正常对照组（加入3mL37℃复温的DMEM／F12培养液，常规培养3h）和微管解聚组（加入3mL37℃复温的含终浓度为8μmoL／L秋水仙碱的DMEM／F12培养液，常规培养3h），每组分别3孔、1瓶、1皿。免疫荧光染色后激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞微管形态变化，蛋白质印迹法检测细胞游离态及聚合态α微管蛋白的含量变化。倒置显微镜下观察并计算细胞自主搏动频率。氧微电极监测系统测定含有心肌细胞的DMEM／F12培养液加入秋水仙碱前后的溶解氧浓度，另测定单纯培养液和秋水仙碱＋培养液溶解氧浓度。采用全细胞膜片钳记录模式记录细胞AP、延迟整流型钾离子通道电流（Ik）和L型钙离子通道电流（Lca-L）变化，绘制电流密度-电压（I-V）曲线。对数据行独立或配对样本t检验。结果（1）正常对照组细胞微管结构完整，围绕核周呈放射状分布，线性管状结构清晰。微管解聚组细胞微管结构破坏，呈现弥散性分布，线性管状结构粗糙而不光滑。（2）微管解聚组细胞游离态d微管蛋白含量为0．61±0．03，明显高于正常对照组的0．46±0．03，t=6．99，P〈0．05；聚合态a微管蛋白含量为0．57±0．04，明显低于正常对照组的0．88±0．04，t=9．09，P〈0．05。（3）微管解聚组细胞自主搏动频率为（59±8）次／min，较正常对照组的（41±7）次／min明显增加（t=5．62，P〈0．01）。（4）含心肌细胞的培养液溶解氧浓度为（138．4±2．5）μLmol／L，秋水仙碱处理后下降为（121．7±3．6）μmol／L，差异明显（t=26．31，P〈0．05）。单纯培养液和秋水仙碱＋培养液溶解氧浓度无明显差异（t=0．72，P〉0．05）。（5）与正常对照组比较，微管解聚组细胞AP形态发生明显变化，复极化平台期不明显，动作电位时程（APD）明显缩短。微管解聚组细胞的APD20、APD50、APD90分别为（36．2±3．8）、（73．7±5．7）、（115．1±8．0）ms，较正常对照组的（40．2±2．3）、（121．4±7．0）、（169．4±5．6）mS明显缩短（t值分别为2．61、15．88、16．75，P值均小于0．05）。（6）微管解聚组细胞I。的I．V曲线较正常对照组上移，激活后各测试电压（0—40mV）下微管解聚组I。电流密度均高于正常对照组（t值为2．70-3．76，P值均小于0．05）。（7）2组细胞IC-a-L的I-V曲线基本重叠，激活后各测试电压（-30-50mV）下ICa-L。电流密度相近（t值为-1．57—1．66，P值均大于0．05）。结论微管解聚后Ik增强，IC-L变化不明显，使得AP复极化增快，进而缩短APD，加快大鼠心肌细胞自主搏动频率，增加其耗氧量。