L型钙离子通道α1C亚基基因多态性与精神分裂症的Meta分析

目的：用Meta分析的方法综合评价L型钙离子通道α1C亚基基因（calcium channel,voltage-dependent,L type,alpha1C subunit gene,CACNA1C）多态性位点与精神分裂症（schizophrenia,SCZ）的关系,为SCZ的遗传背景提供询证医学证据。方法：通过计算机对PubMed、中国生物医学文献光盘数据库（CBMdisc）数据库进行检索（2000年1月至2013年11月）。根据纳入标准收集CACNA1C多态性位点与SCZ病例对照研究的国内外全文文献。应用RevMan 5.1软件对符合条件的研究结果进行Meta分析,包括异质性检验,OR值以及评估发表偏倚。结果：共5篇外文文献符合条件并纳入分析,累计精SCZ组3 555例,健康对照组19 566例。数据合并结果显示,CACNA1C多态性位点rs1006737A型基因与SCZ有关联。按种族分为高加索亚组和亚洲亚组进行分析,组内无显著异质性,G/A＋A/A vs.G/G基因型合并OR=1.16（95%CI=1.03~1.31）和1.29（95%CI=1.10~1.52）,总效应测定结果 Z=2.39、3.09（均P〈0.05）。结论：CACNA1C多态性位点rs1006737 A型基因与SCZ有明显关联,且与高加索人和亚洲人群SCZ易感性相关,携带A型基因可能增加SCZ的患病风险。

MicroRNA-1在心肌肥大中对L-型钙通道β_2亚基的负性调控作用

目的:研究微小RNA-1(microRNA-1,miR-1)在心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)的负性调控作用及机制。方法:应用异丙肾上腺素(ISO)诱导心肌细胞肥大;采用HJ2000通用图像分析系统测定心肌细胞表面积;应用数据库microCosm预测miR-1的靶基因;构建含Cavβ23’UTR报告基因质粒和miR-1瞬时共转染HEK293细胞,验证Cavβ2为miR-1靶基因;应用qRT-PCR或Western blot方法检测心房钠尿肽(ANP)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、miR-1和Cavβ2mRNA和蛋白表达水平;转染miR-1模拟物上调miR-1或应用Cavβ2RNAi干扰Cavβ2蛋白的表达,观察对心肌细胞肥大的影响。结果:①在ISO诱导的心肌细胞肥大中,miR-1表达显著下降;应用miR-1 mimic转染心肌细胞使miR-1表达上调,心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达均显著低于ISO组(P<0.05)。②网络数据库预测显示Cavβ2为miR-1的潜在靶点;将miR-1和含Cavβ23’UTR报告基因质粒共转染HEK293细胞,其萤光值显著降低(P<0.01)。转染miR-1 mimic使心肌细胞miR-1表达上调,可以明显抑制Cavβ2蛋白的表达。③在ISO诱导心肌细胞肥大中Cavβ2表达较对照组显著增加;应用RNAi技术下调Cavβ2表达可明显抑制心肌细胞表面积、ANP和β-MHC mRNA表达的增加。结论:预测并验证L-型钙通道β2亚基为miR-1的靶基因。miR-1可能通过抑制其靶基因Cavβ2蛋白的表达,降低细胞内钙离子浓度,抑制心肌细胞肥大。

L型钙通道_α1C亚单位在成年大鼠心脏中的表达

目的研究L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏中的空间表达情况。方法制备成年大鼠心脏冰冻切片,结合大体位置和HE染色结果快速辨认出窦房结、房室结和结后延伸。采用免疫荧光和免疫印迹技术检测L型钙通道α1C亚单位在大鼠窦房结、房室结、结后延伸、右房、右室的表达,用共聚焦显微镜观察其表达部位,通过凝胶成像及图像分析系统对实验结果进行分析。结果荧光呈现点状、斑状或不规则的短线状,主要分布于细胞膜及细胞内的膜性结构,其荧光强度由弱到强依次为窦房结、房室结、结后延伸、右心房、右心室,房室结和结后延伸之间无显著性差异(P>0.05),其余两两相比均有显著差异(P<0.05),其中右心房、右心室明显强于窦房结、房室结和结后延伸(P<0.01)。各部位在相对分子质量200000左右可见一特异性蛋白条带。对蛋白条带进行灰度值分析,结果与免疫荧光相一致。结论L型钙通道α1C亚单位在成年大鼠心脏分布广泛,在不同部位表达量不同,在工作肌组织的表达量明显高于传导组织,提示钙电流在心脏不同部位有不同的分子基础。

L型钙离子通道α_1亚基D亚型在发育小鼠磨牙牙胚成牙本质细胞中的表达

目的 :研究成牙本质细胞分化不同阶段L型钙离子通道α1亚基D亚型的分布情况。方法 :采用兔抗小鼠L型钙离子通道α1D亚基多克隆抗体进行牙胚免疫组织化学染色。结果 :在前成牙本质细胞胞体、功能性成牙本质细胞的近矿化端以及成熟成牙本质细胞的胞体和突起上均发现有L型钙离子通道α1亚基D亚型分布。结论

miR-1和miR-133a对大鼠肥大心肌细胞L-型钙通道Cavβ_2和α1C亚基的调控作用

目的研究miR-1和miR-133a在大鼠心肌细胞肥大中对L-型钙通道β2亚基(Cavβ2)和α1C亚基的调控作用。方法异丙肾上腺素(ISO)诱导大鼠心肌细胞肥大;在线数据库micro Cosm和Targetscan预测miR-1和miR-133a的靶基因;分别构建含有Cavβ23'UTR或α1C 3'UTR的重组质粒,与miR-1或miR-133a共转染HEK293细胞,验证Cavβ2亚基是miR-1的靶基因,α1C亚基是miR-133a的靶基因;用Western blot法检测心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达;用siRNA干扰Cavβ2和α1C表达,明确Cavβ2和α1C在心肌细胞肥大中的作用。结果 1)Cavβ2为miR-1的潜在靶基因,α1C为miR-133a的潜在靶基因。2)分别将miR-1和Cavβ23'UTR,miR-133a和α1C 3'UTR共转染HEK293细胞,荧光素酶荧光值均显著降低(P<0.05,P<0.01)。3)分别转染miR-1 mimic、miR-133a mimic上调miR-1、miR-133a的表达后,心肌细胞内Cavβ2和α1C蛋白表达均明显下降(P<0.01,P<0.05)。4)用RNAi下调Cavβ2和α1C表达可明显抑制心肌细胞表面积(P<0.01),ANP和β-MHC mRNA表达增加(P<0.05)。结论Cavβ2亚基是miR-1的靶基因,α1C亚基是miR-133a的靶基因。miR-1和miR-133a可能通过负性调控L-型钙通道Cavβ2和α1C蛋白表达,抑制心肌细胞肥大。

人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的克隆

目的:克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因。方法:采用RT-PCR方法,从人成牙本质样细胞系中克隆人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基的特异性基因片段,将其亚克隆入pUC18载体进行序列测定。结果:从人成牙本质样细胞系中获得900bp的特异性片段。序列分析表明,与Gen-Bank登陆的人L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列完全一致。结论:成功地从人成牙本质样细胞系中克隆到人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型的特异性基因序列。

人成牙本质细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒的构建和鉴定

目的:构建人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒。方法:采用RT-PCR技术从人成牙本质样细胞系中获得cDNA,将该基因插入原核表达载体pProEXHTb中,通过电穿孔技术转化E.coli表达菌DH5α,随机挑选阳性克隆并提取质粒酶切鉴定,同时对阳性克隆进行测序鉴定。结果:获得的人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性cDNA序列,与GenBank登录的cDNA序列一致。结论:成功地构建了人成牙本质细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因原核表达质粒。

电针水沟穴对脑梗死模型大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基mRNA表达的影响

目的观察电针水沟穴对脑梗死模型大鼠脑血管平滑肌中细胞膜电压依赖性钙通道(VDCC)L型钙通道α1C亚基及受体门控钙通道(ROCC)瞬时受体电位通道6(TRPC6)亚基m RNA表达的影响。方法将130只SPF级雄性Wistar大鼠采用随机数字表法分为空白组(10只)、假手术组(40只)、模型组(40只)、电针组(40只)4组,除空白组外,其余3组又随机分为术后3 h、6 h、12 h、24 h 4个时相,每个时相10只。以线栓法复制大脑中动脉闭塞(MCAO)大鼠模型。电针组在造模后即刻针刺水沟穴,以韩氏电针仪刺激20 min。各组大鼠分别于相应时间处死,在外科显微镜下分别分离、剪取梗死侧的大脑前动脉、中动脉、后动脉各8 mm,通过实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测各组不同时相大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基m RNA的相对表达量。结果与空白组和假手术组比较,模型组各时相大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基m RNA相对表达量均明显上调,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,电针组各时相大鼠脑血管平滑肌中L型钙通道α1C亚基及TRPC6亚基m RNA相对表达量均明显下调,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论电针干预能显著抑制MCAO模型大鼠脑血管平滑肌中VDCC L型钙通道α1C亚基及ROCC TRPC6亚基m RNA表达的上调,从而抑制缺血后血管平滑肌痉挛,增加脑梗死区周围血流灌注。

L型电压门控钙通道α_(1C)亚基羧基末端肽段真核表达载体的构建和表达

目的构建增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记的L型电压门控钙通道(L-type voltage-gated calcium channels,L-VGCCs)α1C亚基羧基末端肽段(CT,1587-2169)的真核表达载体,并在COS-7细胞中表达。方法采用RT-PCR方法扩增CT的cDNA,克隆至真核表达载体pcDNA3.1;采用PCR方法扩增标签蛋白EGFP的cDNA,克隆至重组体pcDNA3.1-CT,EGFP位于CT的羧基末端;采用脂质体转染法将重组体pcDNA3.1-CT-EGFP转染COS-7细胞,通过荧光显微镜和免疫印迹等方法检测重组体的表达。结果扩增了CT和EGFP的cDNA;构建的pcDNA3.1-CT-EGFP真核表达载体经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性;荧光显微镜下转染重组质粒的COS-7细胞中观察到绿色荧光,免疫印迹分析显示pcDNA3.1-CT-EGFP转染组有明显条带。结论成功构建pcDNA3.1-CT-EGFP真核表达载体,并且在COS-7细胞中得到表达。

L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体对人牙本质形成的影响研究

目的:采用人牙齿切片体外器官培养的方法研究L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体对牙本质形成的影响。方法:收集年轻人健康前磨牙,用慢速切锯制备2 mm厚的牙齿横切片,将在L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体中浸泡过的琼脂糖微球与在PBS液中浸泡过的琼脂糖微球对称放置在牙片上,将切片用含琼脂糖的半固体培养基包被后采用Trowel器官培养方法培养1周,观察其对牙本质形成和矿化的影响。结果:L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体组四环素线状荧光带较对照组变细,von Kossa染色前期牙本质处球状矿化也较对照组减少,I型胶原免疫组化染色显示实验组与对照组无明显区别。结论:L型钙离子通道α1亚基D亚型多克隆抗体能够影响牙本质的矿化,但对牙本质基质的合成和分泌无明显影响。该结果提示成牙本质细胞膜上的L型钙离子通道α1亚基D亚型对牙本质矿化过程中的钙离子转运有重要作用。

骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基基因多态性与甲状腺功能亢进性低钾周期性瘫痪的相关性

目的研究骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基(CACNA1S)基因11外显子1551位点T/C和1564位点C/T多态性与中国西南地区汉族男性甲状腺功能亢进(甲亢)性低钾周期性瘫痪(THPP)的相关性。方法选取中国西南地区男性THPP患者90例(THPP组),甲亢不伴周期性瘫痪者98例(GD组),正常对照95名(CN组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,对CACNA1S基因第11外显子区1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点进行基因分型。结果①在CACNA1S基因1551位点,THPP组TT、TC、CC基因型频率分别为56.7%、34.4%、8.9%,GD组分别为71.4%、25.5%、3.1%,CN组分别为74.7%、23.2%、2.1%,THPP组TC+CC基因型和C等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05);②在CACNA1S基因1564位点, THPP组CC、CT、TT基因型频率分别为70.0%、26.7%、3.3%,GD组分别为84.7%、14.3%、1.0%,CN组分别为86.3%、12.6%、1.1%,THPP组CT+TT基因型和T等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论CACNA1S基因11外显子1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点可能与中国西南地区汉族男性THPP的发生有关。

内源性雌激素调控脓毒症小鼠心肌L型钙离子通道α1C亚基的表达

目的探讨内源性雌激素对脓毒症小鼠心肌钙离子通道α1C亚基(CACNA1C)的影响。方法雌性昆明小鼠行双侧卵巢摘除术,术后30 d利用盲肠结扎穿刺术(CLP)建立脓毒症小鼠模型,分为5组:脓毒症组(S组),去卵巢+脓毒症组(QS组),假手术组(C组),去卵巢+假手术组(QC组),去卵巢+苯甲酸雌二醇(QE组)。荧光定量PCR和Western blot检测造模后3 h,6 h,12 h,24 h左心室CACNA1C表达水平,免疫组化检测造模后12 h左心室CACNA1C表达及分布情况。结果(1)QC组CACNA1C的表达水平显著高于C组,QE组CACNA1C的表达水平显著低于QC组。(2)CLP后3 h,S组CACNA1C表达显著高于对照组和其它时间点。(3)CLP后3 h、6 h、12 h和24 h,QS组CACNA1C表达均显著低于对照组,且各时间点之间无差异。结论(1)双侧卵巢摘除后CACNA1C表达显著升高,双侧卵巢摘除后补给苯甲酸雌二醇可以逆转CACNA1C的升高。(2)正常小鼠CLP后3 h CACNA1C的表达出现短暂的升高,而双侧卵巢摘除的小鼠CLP后各时间点CACNA1C的表达均显著低于对照组。

慢性多重应激大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位表达变化研究

目的研究慢性多重应激大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位表达变化及L-型钙通道阻滞剂维拉帕米的拮抗作用。方法建立大鼠慢性多重应激心律失常模型,以维拉帕米作为干预,试验结束后取心房组织,用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time PCR)方法测定L-型钙通道α1c亚单位mRNA的表达水平,以Western blot方法检测L-型钙通道α1c亚单位蛋白的表达水平。结果应激大鼠出现了房性心律失常,应激+维拉帕米组房性心律失常出现时间和发生次数低于应激组(P<0.01);应激组和应激+维拉帕米组大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P<0.01);应激组大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位蛋白表达水平低于应激+维拉帕米组(P<0.01)。结论慢性多重应激导致大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位mRNA和蛋白表达水平下调。维拉帕米对慢性多重应激诱导的大鼠心房肌L-型钙通道α1c亚单位表达下调有拮抗作用,可抑制慢性多重应激诱导的房性心律紊乱。

L型钙离子通道α_1亚单位的分子生物学研究进展

钙离子被人们称作生物信使，与其密切相关的钙离子通道的重要性则不言而喻，因此众多的生命科学工作者投入了大量的精力研究钙离子通道，并且已经从细胞水平的研究深入到分子水平。遗憾的是，到目前为止仍没有完全搞清楚它的功能和作用机制，甚至没有形成统一的理论观点。...

P/Q型钙通道α1亚基基因CACNA1A突变与偏头痛

偏头痛是一种常见的反复发作性疾病,有明显家族聚集性,发病机制未明。对家族性偏瘫型偏头痛(FHM)家系CACNA1A基因的鉴定,掀起了偏头痛分子遗传学研究的热潮。该基因定位于19p13,为脑特异性P/Q型钙通道α1A亚单位基因CACNA1A。业已鉴定出该基因的15种突变型。突变型与表现型之间存在一定的关系。但是,CACNA1A基因与普通型偏头痛是否相关的研究却得出了不同的结论。

L型钙离子通道α1C基因多态性与氨氯地平降压疗效相关性分析

目的探讨L型钙离子通道α1C基因（CACNA1C）多态性与氨氯地平降压疗效的相关性,为指导临床合理用药提供理论依据。方法选取医院2014年1月至2015年1月收治的原发性高血压患者92例,经过2周洗脱期后均给予苯磺酸氨氯地平片2.5 mg/d的降压方案,疗程为4周。4周后根据血压下降幅度将患者分为氨氯地平高效组[收缩压下降幅度（ΔSBP）≥20 mmHg]、中效组（10 mmHg≤ΔSBP〈20 mmHg）和低效组（ΔSBP〈10 mmHg）,记录3组患者性别、年龄、体重指数（BMI）等一般资料,并采用聚合酶链式反应（PCR）-直接测序法对患者CACNA1C基因rs2238032、rs2239128及rs1051375等位点进行分型,经单因素χ^2检验和Logistic多因素回归方法分析影响氨氯地平降压疗效的因素。结果 3组患者的收缩压（SBP）和舒张压（DBP）的基线水平比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,其中高效组、中效组的SBP和DBP的基线水平均明显高于低效组（P〈0.05）;3组患者的BMI比较,差异有统计学意义（P〈0.05）,其中高效组和中效组BMI明显低于低效组（P〈0.05）;rs2238032位点不同型别的降压幅度由高到低依次为TT型（突变型纯合子）、GT型（野生型杂合子）和GG型（野生型纯合子）,两两比较,差异均有统计学意义（P〈0.05）。经Logistic多因素回归分析,患者BMI、血压基线水平和rs2238032基因型是影响氨氯地平降压疗效的相关因素。结论原发性高血压患者的BMI、血压基线水平及rs2238032基因型与氨氯地平疗效明显相关,临床应参考相关因素制订合理的用药方案。

TGF-β_1抗体和PDGF抗体对肝星状细胞L型钙通道的影响

目的研究转化生长因子-β1(TGF-β1)抗体和血小板生长因子(PDGF)抗体防治肝纤维化和门脉高压的分子机制,并探讨二者的关系。方法分别用于TGF-β1抗体和PDGF抗体处理大鼠肝星状细胞24h后,应用膜片钳全细胞技术观察细胞L型钙通道。利用正交设计方法研究不同浓度TGF-β1抗体、PDGF抗体及其作用的先后顺序和二者作用的时间间隔对肝星状细胞L型钙通道的影响。结果不同浓度TGF-β1抗体、PDGF抗体及其作用的前后顺序对细胞L型钙电流的影响有显著性(P<0.05),两因素作用的时间间隔对结果影响无显著性(P>0.05)。结论TGF-β1抗体和PDGF抗体均具有防治肝纤维化和门脉高压作用,其机理可能与其调节肝星状细胞L型钙通道有关。

Obestatin抑制胰岛β细胞株INS-1细胞L型钙通道电流

目的观察obestatin对胰岛β细胞株INS-1细胞L型钙通道电流的影响。方法应用穿孔全细胞膜片钳技术研究obestatin对培养的胰岛β细胞株INS-1细胞膜L型电压敏感钙通道电流(L-type calcium ion channel current,ICa,L)的影响。结果胰岛β细胞株INS-1细胞钳制膜电位为-20 mV时,分别给予胰岛β细胞株INS-1细胞0nM(对照组)和1、10、100nM obestatin灌流5min后,ICa,L峰值呈浓度依赖性降低,各组为给药前的(97±8)%、(91±7)%、(60±9)%和(45±6)%。其中,10nM和100nM obestatin灌流5 min后ICa,L峰值与对照组相比显著减小(P<0.01,n=5)。胰岛β细胞株INS-1细胞钳制膜电位分别为-30、-20、-10和0mV时,给予10nM obestatin之前,其ICa,L峰值分别为(-5.48±0.69)、(-5.70±0.68)、(-5.58±0.61)和(-3.90±0.44)pA/pF,灌流10nM obestatin 5 min后,ICa,L峰值分别下降至(-3.11±0.68)、(-3.60±0.99)、(-3.26±1.03)和(-2.28±0.71)pA/pF,均明显低于obestatin给药前(P<0.01,n=5)。结论 obestatin可抑制胰岛β细胞株INS-1细胞L型钙通道电流。

雌二醇增加脓毒症小鼠心肌电压门控钙通道α1C亚基(CACNA1C)水平

目的探讨雌二醇对脓毒症小鼠心肌电压门控钙通道α1C亚基(CACNA1C)的影响。方法雄性昆明小鼠皮下注射苯甲酸雌二醇,在此基础上利用盲肠结扎穿刺法制作脓毒症模型。小鼠分为雌二醇处理的脓毒症组、脓毒症组、假手术组、雌二醇处理的假手术组。造模后3、6、12、24 h,实时荧光定量PCR检测左心室CACNA1C的mRNA水平,Western blot法检测CACNA1C的蛋白水平;造模后12 h,免疫组织化学染色法检测左心室CACNA1C的表达及分布情况。结果术后6 h,脓毒症组CACNA1C表达显著降低,在12 h和24 h一直处于较低水平。雌二醇处理的脓毒症组小鼠术后3 h、6 h和12 h CACNA1C的水平未见明显变化,24 h其水平显著增加。结论外源性雌二醇可提高脓毒症小鼠左心室CACNA1C水平。

自噬对HIV-1gp120V3环介导的海马神经元L型钙离子通道电流的影响

目的:观察哺乳动物雷帕雷素靶蛋白(m TOR)依赖性自噬信号转导通路对HIV-1 gp120V3环介导的海马神经元L-型钙离子通道电流的影响。方法:取出生1 d内的乳鼠海马神经元原代培养7 d后用于实验。实验分为2个平行实验组,即空白对照组、gp120V3组、自噬阻断剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)组和gp120V3+3-MA组;空白对照组、gp120V3组、自噬激动剂雷帕雷素(rapamycin)组和gp120V3+rapamycin组。以膜片钳技术记录海马神经元的L型钙离子通道电流。结果:gp120V3组及3-MA组与空白对照组比较,L型钙离子通道电流密度增大(P<0.05);gp120V3+3-MA组与gp120V3组比较,L-型钙离子通道电流密度增大(P<0.05);rapamycin组与空白对照组比较,L型钙离子通道电流密度减小(P<0.05);gp120V3+rapamycin组与gp120V3组比较,L型钙离子通道电流密度减小(P<0.05)。结论:从电生理角度证明,自噬可能参与了HIV-1gp120V3环介导的海马神经元L型钙离子通道电流的改变。