干姜吴茱萸水煎液对大鼠结肠平滑肌细胞L型Ca^(2+)通道的影响

目的:探讨干姜吴茱萸水煎液对大鼠结肠平滑肌收缩及平滑肌细胞L型Ca^(2+)通道的影响机制。方法:采用0、0.01、0.1、1、10 g/L干姜吴茱萸(1∶1)水煎液依次作用于正常结肠平滑肌,10 g/L水煎液及L型Ca^(2+)通道激动剂BAY-K-8644依次作用于氯化乙酰胆碱(Ach)诱导后的正常平滑肌,检测平滑肌收缩张力、频率和振幅;全细胞膜片钳记录L型钙电流;Western blot检测各组细胞中L-型电压依赖钙离子通道α1C亚基(α1c)和钙调蛋白(CaM)蛋白表达情况。结果:1、10 g/L水煎液组能显著降低离体结肠平滑肌的收缩张力(P<0.05),对频率及振幅并无显著影响(P>0.05);与0 g/L水煎液组相比,Ach促进平滑肌收缩张力、频率和振幅显著增加(P<0.05);与Ach组相比,10 g/L水煎液显著降低平滑肌的收缩张力、频率和振幅(P<0.05);与10 g/L水煎液组相比,BAY-K-8644显著增加平滑肌的收缩张力、频率和振幅(P<0.05);与0 g/L水煎液组相比,Ach可显著增加ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与Ach组相比,10 g/L水煎液显著降低ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与10 g/L水煎液组相比,BAY-K-8644可显著增加ICa-L峰值电流密度(P<0.05);与对照组相比,Ach组结肠平滑肌细胞Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c、CaM表达显著增加(P<0.05);Ach组相比,10 g/L组Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c和CaM表达水平显著降低(P<0.05);与10 g/L组相比,BAYK-8644组Ca^(2+)相对荧光强度峰值、α1c、CaM表达显著增加(P<0.05)。结论:干姜吴茱萸水煎液可抑制大鼠结肠平滑肌收缩,并阻滞L型Ca^(2+)通道。

三氧化二砷诱导豚鼠QT间期延长及其对L型Ca^(2+)通道蛋白mRNA表达的影响

目的观察三氧化二砷(As2O3)对豚鼠心脏QT间期的影响,并初步探讨其对L型通道蛋白mRNA表达的影响。方法将豚鼠随机分为4组,分别为正常对照组、As2O3大、中、小剂量组。实验组豚鼠静脉给予不同剂量的As2O3(大剂量组1.6mg/kg、中剂量组0.8mg/kg和小剂量组0.4mg/kg),分别测量不同时间点的心电图,观察QTc(校正的QT间期)的变化。提取心肌组织总RNA,用RT-PCR方法观察As2O3对豚鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响。结果在2h的观察时间内,0.8mg/kg和1.6mg/kg As2O3分别使QTc从对照组的(324±20)ms延长到(368±29)ms(P<0.01)和(388±31)ms(P<0.01)。RT-PCR结果显示1.6mg/kg As2O3可以使豚鼠心肌L型钙通道mRNA表达增强(与对照组相比,P<0.01)。结论As2O3可引起豚鼠心脏QT间期延长,其机制可能与增强L型钙通道蛋白mRNA表达有关。

延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞膜L型Ca^(2+)通道动力学的影响

【目的】观察延胡索碱预处理对缺血再灌注心肌细胞膜L型Ca2+通道动力学的影响,并探讨其防治再灌注损伤的作用机制。【方法】将清洁级成年SD大鼠48只随机分为6组:延胡索碱高、中、低剂量预处理组(剂量分别为1.0、0.5、0.2 g.kg-1.d-1),缺血预处理组,模型组和假手术组,结扎左冠状动脉前降支近段30 min后再灌注60 min,之后断头放血取心脏。采用酶解技术分离大鼠心室肌细胞,应用膜片钳细胞吸附式单通道电流记录与分析方法,观察记录心肌细胞膜L型Ca2+通道平均开放概率、平均开放时间及平均电流幅值。【结果】与模型组比较,缺血预处理组和延胡索碱预处理各组心肌细胞L型Ca2+通道平均开放概率显著降低(均P<0.01),但平均开放时间比较差异无显著性意义(均P>0.05);与缺血预处理组比较,延胡索碱预处理中、低剂量组可降低L型Ca2+通道电流幅值(P<0.05)。【结论】延胡索碱预处理防治再灌注损伤的可能作用机制与其能减少心肌细胞膜上L型Ca2+通道的开放概率,降低钙内向电流,避免细胞内钙超载,从而保护心肌细胞有关。

铅对小鼠海马[Ca^(2+)]的影响及L型钙通道的作用

目的 探讨铅对分离的小鼠海马细胞内游离钙的影响及其及L型钙通道的作用。方法 采用低浓度胰蛋白酶消化法分离小鼠海马细胞 ,并以莹光指标剂 (Fura 2 )作Ca2 + 荧光探针 ,用双波长荧光法测定海马细胞 [Ca2 + ] i。结果 铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 + ] i 升高 [由静息时的 (2 0 3 4± 10 86)nmol L升至 (4 2 3 3± 19 2 6)nmol L] ,而不论胞外是否有钙 ;铅可抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 + ] i 升高 ,尼莫地平可加强这种抑制作用 ,而BayK864 4则可部分消除这种抑制作用。结论 铅可致分离的小鼠海马细胞 [Ca2 + ] i 升高作用与胞内钙库释放有关 ;铅的抑制钾诱发海马细胞 [Ca2 + ] i 升高作用与其抑制L型钙通道有关。

大明胶囊对糖尿病大鼠心肌L型Ca^(2+)通道蛋白mRNA表达的影响

目的探讨大明胶囊对2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响。方法建立2型糖尿病大鼠模型,筛选空腹血糖值大于16.7mmol·L-1的大鼠随机分组:大明胶囊大(200mg·kg-1·d-1)、中(100mg·kg-1·d-1)、小(50mg·kg-1·d-1)剂量组、糖尿病模型组、苯乙双胍(75mg·kg-1·d-1)组,连续用药14d,用快速血糖仪测空腹血糖值。提取心肌总RNA,采用逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)的方法,观察大明胶囊治疗后2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA水平的变化。结果2型糖尿病组大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达高于正常组大鼠(P<0.01),经大明胶囊治疗后的心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA表达降低(P<0.05),空腹血糖也明显下降。结论大明胶囊对2型糖尿病大鼠有明显的降糖作用,并且可以降低2型糖尿病大鼠心肌L型Ca2+通道蛋白mRNA的表达。

肌浆网Ca^(2+)-ATP酶和L型-Ca^(2+)通道功能变化对肥厚心室肌电重构的影响

为探讨肌浆网Ca2 + ATP酶和L型 Ca2 +通道功能变化在左室肥厚 (LVH)心室肌电重构发生中的作用。将 60只日本大耳白兔随机分为 6组 :单纯实验组、实验组 +维拉帕米、实验组 +Thapsigargin、单纯对照组、对照组 +维拉帕米和对照组 +Thapsigargin。实验组行腹主动脉部分结扎术 ,喂养 1 0周制作LVH模型。对照组在游离出腹主动脉后 ,不予结扎。均采用以Langendorff离体灌流方法。对单纯实验组和单纯对照组 ,在心外膜左室心尖部部位以 2 31ms为基础周长 (BCL)测定心室有效不应期 (VERP)后 ,于右房行电刺激 ,刺激频率为 2 60次 /分 ,持续 30min ,保持 1 1房室传导。刺激结束后 ,重复测定VERP值。对其余 4组 ,先测定未加药物时各组的VERP值 ,随后改用加入药物的灌流液后再次测定VERP值 ,最后进行右房刺激及VERP的测定 (同前 )。结果 :单纯实验组在快速刺激后 ,VERP显著延长 ,其延长程度显著大于单纯对照组 ;而在加用维拉帕米的实验组和对照组中 ,快速刺激后无VERP延长的表现 ;相反 ,Thapsigargin则可增强快速刺激后VERP延长的表现。结论 :L 型Ca2 +通道的激活可能是LVH心室肌电重构发生的重要原因。其中 ,心室肌细胞肌浆网Ca2 + ATP酶的功能降低参与了此过程 ,并可能导致了LVH与正常心室肌的频率相关性电重构?

Bay K8644及nifedipine对大鼠下丘脑神经元L-型Ca^(2+)通道特性的影响

采用神经元急性分离和膜片箝技术以及细胞贴附式方式记录通道活动 ,探讨DHP类Ca2 +通道激动剂BayK8644及拮抗剂nifedipine对下丘脑神经元L 型Ca2 +通道的影响。结果显示 ,在BayK8644作用下 ,通道开放形式发生变化 ,明显可见多级开放 ;通道平均开放时间、平均开放概率显著增加 ,但单通道电导无明显变化。nifedipine的作用与BayK8644相反。结果提示 ,BayK8644对下丘脑神经元L 型Ca2 +通道有明显激动作用 ,nifedip

肥大和衰竭心肌L型Ca^(2+)通道研究进展

心肌细胞 L 型钙电流 ( IC a· L)触发了 Ca2 +诱导的 Ca2 +释放 ( CICR) ,调节着细胞内瞬时 Ca2 +动力学 ,从而在兴奋—收缩耦联过程中起关键性作用。ICa· L密度和通道功能的改变参与了心力衰竭的发生。作者综述了 :1L型 Ca2 +通道的结构和生理作用 ;2肥大和衰竭的心肌 ICa· L变化及其频率依赖性调节机制 ;3 Ca2 + 通道和心力衰竭的治疗关系 ;4L型 Ca2

次声作用后大鼠心肌细胞内钙离子变化与L型钙通道、Ca^(2+)-ATP酶及Na^+-K^+-ATP酶变化的关系

目的:观察不同时间次声作用后大鼠心肌细胞钙离子变化与L型钙通道、Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶变化的关系。方法:实验于2005-04/2006-08在解放军第四军医大学西京医院次声实验室完成。①实验分组:选择健康雄性SD大鼠32只,按随机数字表法分为4组,每组8只。次声暴露1,7,14d组(大鼠置于5Hz/130dB次声舱中,次声作用2h/次,1次/d),正常对照组(不予次声暴露)。②实验评估:测定大鼠心肌细胞内钙离子荧光强度,作为反映钙离子浓度的指标;测定L型钙通道mRNA的表达;测定Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶活性。结果:①随着次声作用时间延长,大鼠心肌细胞钙离子浓度和L型钙通道mRNA的表达明显高于正常对照组(P<0.01)。②次声暴露1d组大鼠心肌细胞Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性显著高于正常对照组(P<0.01),次声暴露7d与14d组大鼠心肌细胞Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性显著低于正常对照组(P<0.01)。结论:5Hz/130dB次声引起大鼠心肌钙离子浓度的时间依赖性变化,这种变化可能与L型钙通道、Ca2+-ATP酶及Na+-K+-ATP酶的活性变化有关。

环维黄杨星D对分离大鼠心室肌细胞内Ca^(2+)和L型钙电流的影响

目的 研究环维黄杨星D(CD)对大鼠心室肌细胞内Ca2 + 动员和L型钙电流 (ICa L)的影响。方法 采用全细胞膜片钳和激光扫描共聚焦显微术研究CD对心肌细胞ICa L以及氯化钾、咖啡因诱发心肌细胞内Ca2 + 动员的影响。结果 CD浓度依赖性抑制ICa L。指令电压为 10mV时 ,1和 10 μmol·L- 1 CD分别使ICa L 电流密度从 (- 9 9±1 8)pA pF降至 (- 6 4± 1 4 )pA pF和 (- 4 2± 0 6 )pA pF。共聚焦实验显示 1和 10 μmol·L- 1 CD不影响静息心肌细胞 [Ca2 + ]i,对氯化钾诱发 [Ca2 + ]i升高水平无明显抑制作用 ;咖啡因引起的细胞内Ca2 + 动员可被CD进一步增强。结论 CD浓度依赖性抑制大鼠心室肌细胞ICa L,并有促进咖啡因诱发心肌细胞内Ca2 +

氟桂利嗪对小鼠生精细胞T型Ca^(2+)通道的作用

目的:研究二苯烷基氨类衍生物氟桂利嗪(F lu)对小鼠生精细胞T型钙电流(ICaT)的影响。方法:采用急性机械分离的小鼠生精细胞,应用膜片钳全细胞记录技术,观察F lu对ICaT的影响。结果:钳制电位为-90 mV、刺激电压为-30 mV时,F lu(0.1、1、10、100μmol/L)可抑制小鼠生精细胞Ca2+电流,抑制率分别为(23.34±2.76)%、(46.04±3.52)%、(62.52±3.70)%、(73.52±3.12)%(P<0.05);F lu对T型Ca2+通道的半数最大抑制浓度为0.29μmol/L。结论:F lu对生精细胞T型Ca2+通道有阻断作用,呈浓度依赖性;Cav3.2是生精细胞T型Ca2+电流的主要贡献者。

梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞内Ca^(2+)及N型Ca^(2+)通道的变化及意义

目的对Ca2+和N型Ca2+通道在兔不全梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞中的变化进行研究。方法成年同龄雄性新西兰白兔30只,随机分两组,15只中膀胱出口不全梗阻8w尿流动力学证实为不稳定膀胱者为实验组,15只为对照组(成年雄性新西兰白兔仅仅手术游离兔膀胱颈而不做结扎梗阻为对照组)。采用急性酶法分离及传代培养的方法获得单个膀胱逼尿肌细胞,采用激光共聚焦显微镜观察模型膀胱逼尿肌细胞静态Ca2+浓度;运用共聚焦显微镜及免疫组织化学方法观察N型Ca2+通道在梗阻性不稳定膀胱逼尿肌细胞中的变化。结果静息状态下不全梗阻性不稳定膀胱组逼尿肌细胞内游离钙离子浓度明显增高(Ca2+超负荷);共聚焦显微镜及免疫组化均证实不稳定膀胱逼尿肌细胞膜之N钙离子通道数量明显增多。结论膀胱逼尿肌细胞Ca2+及其N型Ca2+通道病理性改变是出现不稳定膀胱的重要因素。

正常与不稳定大鼠膀胱逼尿肌T型Ca^(2+)通道亚型对比研究

目的探讨正常与不稳定大鼠逼尿肌T型Ca2+通道亚型基因的表达和T型Ca2+电流密度差异。方法RT-PCR法与膜片钳检测逼尿肌细胞T型Ca2+亚型通道基因表达和电流密度。结果①在T型Ca2+通道亚型α1I、α1G、α1H中,正常逼尿肌表达α1I,DI逼尿肌表达α1I与α1G,二者均无α1H表达;②正常与DI逼尿肌均存在T型Ca2+电流;③DI组峰值电流(peakI)幅度和密度均大于正常组。结论DI逼尿肌胞外钙离子通过T型Ca2+通道的内流增加,这种变化可能与DI逼尿肌T型Ca2+亚型通道基因的异常表达有关。

T型Ca^(2+)通道在心脏中的表达

电生理学研究表明心脏组织细胞主要存在L型和T型两种不同的Ca2+通道,其中T型Ca2+通道主要存在于正常成熟心脏的浦肯野纤维和起搏点细胞以及胚胎心室肌细胞,而正常成熟心肌细胞中存在很少,但在心脏肥大和心衰等心脏疾病的心肌细胞中表达明显增加,提示T型Ca2+通道与心脏正常节律的形成和心脏发育以及一些心脏疾病的发生与发展密切相关。

小鼠粗线期精母细胞T型Ca^(2+)通道电流特性及氰戊菊酯对它的影响

[目的 ]建立小鼠粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道电流膜片箝记录方法 ,并观察拟除虫菊酯类杀虫剂氰戊菊酯的作用。[方法 ]应用膜片箝技术 ,全细胞方式下记录小鼠粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道电流 ,并用各种特异的通道阻断剂和激动剂确定电流特性 ,与体细胞T型Ca2 + 通道电流比较 ;通过胞外给药 ,观察氰戊菊酯对T型Ca2 + 通道电流影响。 [结果 ]当以Cs+ 、TEA+ 阻断K+ 电流 ,记录到一 -6 0mV激活 ,-2 0～ -30mV达到最大值的内向电流 ,该电流呈快速激活快速失活。加入Na+通道阻断剂TTX ,对记录的内向电流无影响 ,表明该内向电流不含有Na+ 电流成分 ,是由Ca2 + 通道开放产生。另该电流对L型Ca2 + 通道激动剂BayK 86 44不敏感 ,但对Cd2 + 、Nifedipine两种Ca2 + 通道阻断剂较敏感 ,提示其为T型Ca2 + 通道电流。与体细胞典型T型Ca2 + 通道比较 ,粗线期精母细胞T型Ca2 + 通道有自身特点。研究氰戊菊酯对记录的T型Ca2 + 通道电流的作用显示 :5 0 μM·L-1氰戊菊酯在加入后 3～ 5min开始抑制T型Ca2 + 通道电流 ,于 9～ 10min达到最大抑制作用 ,并有明显的剂量 反应关系。 [结论 ]小鼠粗线期精母细胞主要存在T型Ca2 + 通道 ,而不含有L型Ca2 + 通道 ,但与典型T型Ca2 + 通道电流比较 ,精母细胞的T型Ca2 + 通道电流又?

Q及N型Ca^(2+)通道在兔不全梗阻性不稳定膀胱中功能的初探

目的:对Q及N型Ca2+通道在兔不全梗阻性不稳定膀胱中的功能进行研究。方法:成年同龄雄性新西兰白兔30只,其中15只为对照组(仅仅手术游离兔膀胱颈而不做结扎梗阻为对照组),15只为膀胱出口不全梗阻8周尿流动力学证实为不稳定膀胱者为实验组。模型成熟后,采用急性酶法分离及传代培养的方法获得单个膀胱平滑肌细胞。运用膀胱平滑肌M受体激动剂和Q及N型Ca2+通道阻滞剂,进行共聚焦显微镜检测其Ca2+浓度变化;了解膀胱平滑肌细胞是否存在Q及N型Ca2+通道;运用免疫组织化学方法进一步证实膀胱平滑肌细胞上是否存在Q及N型Ca2+通道及其变化。结果:共聚焦显微镜及免疫组化均证实膀胱平滑肌细胞膜存在Q及N型Ca2+通道,且不稳定膀胱平滑肌细胞膜之Q及N型Ca2+通道数量明显增多。结论:膀胱平滑肌细胞Ca2+及其通道病理性改变是出现不稳定膀胱的重要因素之一。

细胞外Ba^(2+)对大鼠心肌细胞L型钙通道的影响

目的:观察细胞外Ba^(2+)对记录大鼠心肌细胞L型钙通道的影响。方法:采用急性酶解分离法获得大鼠的单个心肌细胞,使用全细胞膜片钳技术记录L型钙通道电流。采用Ba^(2+)替换台式液中的Ca^(2+)和直接向台式液中加入Ba^(2+)(0~8 mmol/L),观察峰值电流15 min内的变化,数据采用5个以上细胞进行重复。结果:(1)台式液中的Ca^(2+)被Ba^(2+)替换后,L型钙通道电流的失活速率明显减慢(P<0.01);在台式液中加入少量Ba^(2+)(0.2,0.4mmol/L)时L型钙通道电流的失活速率无明显改变(P>0.05),加入0.8 mmol/L Ba^(2+)时失活速率明显减慢(P<0.05)。(2)与正常台式液比较,在细胞外液中加入Ba^(2+)(0.2,0.4 mmol/L)峰值电流衰减减弱,其中10 min和15 min两个时间点衰减差异明显(P<0.01)。(3)在细胞外液中加入Ba^(2+)可下移电流电压曲线,改变翻转电位,减弱丹酚酸A对钙电流的抑制强度,使量效关系曲线右移。结论:在细胞外液中加入一定浓度的Ba^(2+),能够减弱全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞L型钙通道时出现的峰值电流衰减,改变通道的电压依赖特性,影响药物量效关系。

渗透压对大鼠心室肌细胞L型Ca^(2+)电流的影响

目的 :观察细胞胞外渗透压的改变对大鼠心室肌 L型 Ca2 +(ICa,L)电流的影响。方法 :采用全细胞膜片钳技术记录大鼠心室肌细胞 ICa,L。结果 :细胞外的渗透压由 3 10 m Osm / kg H2 O降低至 2 2 0 m Osm/ kg H2 O可使 ICa,L的 rundown明显变慢 ,电流大小无统计学意义上的差异 ;而当其中细胞外的渗透压由 3 10 m Osm/ kg H2 O升高至 410m Osm/ kg H2 O时可使 ICa,L减小 (5 1.4± 7.9) % (n=4,P<0 .0 1)。结论 :细胞外渗透压变化对大鼠心室肌基础 ICa。

17β-雌二醇对小鼠生精细胞T型Ca^2＋通道的作用

目的:研究17β-雌二醇(E2)对小鼠生精细胞T型钙电流(ICaT)的影响。方法:采用膜片钳全细胞记录技术观察E2对急性机械分离的小鼠生精细胞ICaT的影响。结果:E2(1、10、100μmol/L)呈浓度、电压依赖性抑制小鼠生精细胞钙电流,抑制率分别为(13.48±1.86)%、(28.98±2.70)%和(52.93±3.42)%(n=6,P<0.05)。E2对T型钙通道的半数最大抑制浓度(K50)为8.89μmol/L。100μmol/LE2显著改变T型钙通道的激活和失活特性:半数激活电压(Va1/2)和激活斜率因子(κa)分别从(-48.94±0.22)mV、(5.19±0.19)mV变为(-54.34±1.02)mV和(6.02±0.84)mV(n=5,P<0.05);而半数失活电压(Vi1/2)和失活斜率因子(κi)分别从(-56.51±0.13)mV、(3.36±0.11)mV变为(-61.78±0.50)mV、(4.25±0.37)mV(n=5,P<0.05)。结论:E2对生精细胞T型钙通道有抑制作用,呈浓度依赖性。

调脉饮及其拆方对快速性心律失常大鼠模型心肌L型钙通道β_2亚基表达的影响

目的观察调脉饮及拆方对快速性心律失常大鼠模型心肌L型钙通道β_2亚基(LTCC β_2)表达的影响。方法将60只Wistar大鼠随机分为模型组、调脉饮全方组(全方组)、凉血清热主要功效组(凉血组)、益气养心辅药功效组(益气组)、行气通脉辅药功效组(行气组)、胺碘酮组(西药组)。给予相应药物灌胃7 d后予乌头碱,观察各组心律失常出现的时间;取左心室心肌做逆转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹。结果全方组、西药组出现室性早搏(VPB)时间较模型组明显延长,全方组、凉血组、西药组出现室性心动过速(VT)、室颤(VF)、死亡(CA)时间均延长;全方组、凉血组、西药组心肌L型钙通道β_2亚基mRNA及蛋白表达显著降低。结论调脉饮全方组及凉血组可减少快速性心律失常的发生时间,降低心肌LTCC β_2表达。