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宫颈癌HPV16型L1基因的克隆和序列分析
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作者 陈蕤 张菊 +1 位作者 刘友生 阎小君 《现代肿瘤医学》 CAS 2003年第2期104-106,共3页
目的 获取人乳头瘤病毒 16 (HPV16 )晚期表达基因L1,为HPV感染的检测和诊断奠定基础。方法 收集宫颈癌组织标本 ,设计一对L1基因特异引物 ,用PCR方法从宫颈癌组织中获得L1基因片段 ,构建入克隆载体 pGEM -T ,双向测定插入片段序列并... 目的 获取人乳头瘤病毒 16 (HPV16 )晚期表达基因L1,为HPV感染的检测和诊断奠定基础。方法 收集宫颈癌组织标本 ,设计一对L1基因特异引物 ,用PCR方法从宫颈癌组织中获得L1基因片段 ,构建入克隆载体 pGEM -T ,双向测定插入片段序列并进行序列分析。 结果 这一株HPV16型L1蛋白序列 ,与既往报道的L1序列高度同源 . 展开更多
关键词 宫颈癌 HPVl6l1基因 克隆 序列分析 人乳头瘤病毒 基因表达
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L型钙离子通道α1C亚基基因多态性与精神分裂症的Meta分析 被引量:3
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作者 杨柳 周婵娟 +2 位作者 房亮 王明菊 谢鹏 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期858-863,共6页
目的:用Meta分析的方法综合评价L型钙离子通道α1C亚基基因(calcium channel,voltage-dependent,L type,alpha1C subunit gene,CACNA1C)多态性位点与精神分裂症(schizophrenia,SCZ)的关系,为SCZ的遗传背景提供询证医学证据。方法... 目的:用Meta分析的方法综合评价L型钙离子通道α1C亚基基因(calcium channel,voltage-dependent,L type,alpha1C subunit gene,CACNA1C)多态性位点与精神分裂症(schizophrenia,SCZ)的关系,为SCZ的遗传背景提供询证医学证据。方法:通过计算机对PubMed、中国生物医学文献光盘数据库(CBMdisc)数据库进行检索(2000年1月至2013年11月)。根据纳入标准收集CACNA1C多态性位点与SCZ病例对照研究的国内外全文文献。应用RevMan 5.1软件对符合条件的研究结果进行Meta分析,包括异质性检验,OR值以及评估发表偏倚。结果:共5篇外文文献符合条件并纳入分析,累计精SCZ组3 555例,健康对照组19 566例。数据合并结果显示,CACNA1C多态性位点rs1006737A型基因与SCZ有关联。按种族分为高加索亚组和亚洲亚组进行分析,组内无显著异质性,G/A+A/A vs.G/G基因型合并OR=1.16(95%CI=1.03~1.31)和1.29(95%CI=1.10~1.52),总效应测定结果 Z=2.39、3.09(均P〈0.05)。结论:CACNA1C多态性位点rs1006737 A型基因与SCZ有明显关联,且与高加索人和亚洲人群SCZ易感性相关,携带A型基因可能增加SCZ的患病风险。 展开更多
关键词 l钙离子通道α1C亚基基因 多态性位点rs1006737 精神分裂症 META分析
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骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基基因多态性与甲状腺功能亢进性低钾周期性瘫痪的相关性 被引量:2
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作者 汪茂荣 李蓉 +4 位作者 张素华 任伟 汪志红 龚莉琳 郑瑞芝 《上海医学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期645-648,F0003,共5页
目的研究骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基(CACNA1S)基因11外显子1551位点T/C和1564位点C/T多态性与中国西南地区汉族男性甲状腺功能亢进(甲亢)性低钾周期性瘫痪(THPP)的相关性。方法选取中国西南地区男性THPP患者90例(THPP组)... 目的研究骨骼肌二氢吡啶敏感的L型钙离子通道α1亚基(CACNA1S)基因11外显子1551位点T/C和1564位点C/T多态性与中国西南地区汉族男性甲状腺功能亢进(甲亢)性低钾周期性瘫痪(THPP)的相关性。方法选取中国西南地区男性THPP患者90例(THPP组),甲亢不伴周期性瘫痪者98例(GD组),正常对照95名(CN组),采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,对CACNA1S基因第11外显子区1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点进行基因分型。结果①在CACNA1S基因1551位点,THPP组TT、TC、CC基因型频率分别为56.7%、34.4%、8.9%,GD组分别为71.4%、25.5%、3.1%,CN组分别为74.7%、23.2%、2.1%,THPP组TC+CC基因型和C等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05);②在CACNA1S基因1564位点, THPP组CC、CT、TT基因型频率分别为70.0%、26.7%、3.3%,GD组分别为84.7%、14.3%、1.0%,CN组分别为86.3%、12.6%、1.1%,THPP组CT+TT基因型和T等位基因频率显著高于GD组和CN组(P值均<0.05),GD组与CN组的差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论CACNA1S基因11外显子1551T/C多态性位点和1564C/T多态性位点可能与中国西南地区汉族男性THPP的发生有关。 展开更多
关键词 低钾周期性瘫痪 甲状腺功能亢进症 骨骼肌二氢吡啶敏感的l钙离子通道α1亚基基因 多态性
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L型钙离子通道α1C基因多态性与氨氯地平降压疗效相关性分析 被引量:1
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作者 党立群 何庆荣 +2 位作者 朱飞飞 李素梅 伏冬梅 《中国药业》 CAS 2016年第12期32-35,共4页
目的探讨L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)多态性与氨氯地平降压疗效的相关性,为指导临床合理用药提供理论依据。方法选取医院2014年1月至2015年1月收治的原发性高血压患者92例,经过2周洗脱期后均给予苯磺酸氨氯地平片2.5 mg/d的降压方... 目的探讨L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)多态性与氨氯地平降压疗效的相关性,为指导临床合理用药提供理论依据。方法选取医院2014年1月至2015年1月收治的原发性高血压患者92例,经过2周洗脱期后均给予苯磺酸氨氯地平片2.5 mg/d的降压方案,疗程为4周。4周后根据血压下降幅度将患者分为氨氯地平高效组[收缩压下降幅度(ΔSBP)≥20 mmHg]、中效组(10 mmHg≤ΔSBP〈20 mmHg)和低效组(ΔSBP〈10 mmHg),记录3组患者性别、年龄、体重指数(BMI)等一般资料,并采用聚合酶链式反应(PCR)-直接测序法对患者CACNA1C基因rs2238032、rs2239128及rs1051375等位点进行分型,经单因素χ^2检验和Logistic多因素回归方法分析影响氨氯地平降压疗效的因素。结果 3组患者的收缩压(SBP)和舒张压(DBP)的基线水平比较,差异有统计学意义(P〈0.05),其中高效组、中效组的SBP和DBP的基线水平均明显高于低效组(P〈0.05);3组患者的BMI比较,差异有统计学意义(P〈0.05),其中高效组和中效组BMI明显低于低效组(P〈0.05);rs2238032位点不同型别的降压幅度由高到低依次为TT型(突变型纯合子)、GT型(野生型杂合子)和GG型(野生型纯合子),两两比较,差异均有统计学意义(P〈0.05)。经Logistic多因素回归分析,患者BMI、血压基线水平和rs2238032基因型是影响氨氯地平降压疗效的相关因素。结论原发性高血压患者的BMI、血压基线水平及rs2238032基因型与氨氯地平疗效明显相关,临床应参考相关因素制订合理的用药方案。 展开更多
关键词 高血压 氨氯地平 l钙离子通道α1C基因 基因多态性
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我国部分地区鸡滑液囊支原体分离株vlhA基因遗传进化和同源性分析 被引量:2
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作者 刘麒 戎畅 +4 位作者 要纬玉 房思远 刘莹 史万玉 郑朝朝 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第11期85-90,共6页
为了探究鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)在我国的遗传变异情况,试验采集北京市、河南省、辽宁省、河北省、天津市、山东省、安徽省、江苏省、湖北省、江西省10个地区疑似感染MS的发病鸡上颚裂黏液,进行MS分离、纯培养及鉴定,采... 为了探究鸡滑液囊支原体(Mycoplasma synoviae,MS)在我国的遗传变异情况,试验采集北京市、河南省、辽宁省、河北省、天津市、山东省、安徽省、江苏省、湖北省、江西省10个地区疑似感染MS的发病鸡上颚裂黏液,进行MS分离、纯培养及鉴定,采用PCR方法扩增阳性分离株vlhA基因片段并对其进行测序分析,利用MEGA 7.0软件构建分离株与GenBank中28株参考株的系统发育树并分析遗传进化关系,再利用MegAlign软件分析分离株和参考株vlhA基因的同源性。结果表明:共得到17株MS分离株,其中16株的基因型为K型,1株为L型。分离株与国外不同地区的参考株vlhA基因同源性较低,在71.8%~91.8%之间;与国内不同地区的参考株vlhA基因同源性较高,在82.3%~95.9%之间。说明目前在我国流行的MS分离株的优势基因型是K型,并存在一定变异。 展开更多
关键词 鸡滑液囊支原体 vlhA基因 K基因 l基因型 相似性分析
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黄芪多糖对2型糖尿病大鼠心肌细胞钙通道基因表达的影响研究 被引量:6
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作者 刘洪凤 王桂云 +1 位作者 张杰 韩智学 《中国食物与营养》 2012年第5期61-62,共2页
目的:研究黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对2型糖尿病(2-DM)大鼠心肌细胞L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响,探讨APS对2-DM的治疗作用。方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、APS治疗组。治疗8周后采用RT-PCR检测3组大... 目的:研究黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)对2型糖尿病(2-DM)大鼠心肌细胞L型Ca2+通道蛋白mRNA表达的影响,探讨APS对2-DM的治疗作用。方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、APS治疗组。治疗8周后采用RT-PCR检测3组大鼠心肌细胞L型Ca2+通道蛋白mRNA表达量。结果:糖尿病组、治疗组大鼠心肌组织L型Ca2+通道蛋白mRNA表达量均显著高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:APS可以降低2-DM大鼠心肌细胞L型Ca2+通道蛋白mRNA的表达,对2-DM有一定的治疗作用。 展开更多
关键词 黄芪多糖 2糖尿病 l钙通道基因
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Nell-1基因修饰骨髓基质细胞复合β-磷酸三钙提升兔上颌窦底的实验研究 被引量:1
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作者 徐袁瑾 夏伦果 +2 位作者 张秀丽 蒋欣泉 张志愿 《中国口腔颌面外科杂志》 CAS 2010年第5期450-455,共6页
目的:评价Nel样I型分子(Nell-1)基因修饰骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,bMSCs)复合β-磷酸三钙提升兔上颌窦底的效果。方法:抽取兔骨髓进行bMSCs培养,体外采用腺病毒载体携带Nell-1基因(AdNell-1)及绿色荧光蛋白EGFP基因(AdEG... 目的:评价Nel样I型分子(Nell-1)基因修饰骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,bMSCs)复合β-磷酸三钙提升兔上颌窦底的效果。方法:抽取兔骨髓进行bMSCs培养,体外采用腺病毒载体携带Nell-1基因(AdNell-1)及绿色荧光蛋白EGFP基因(AdEGFP)转染bMSCs,GFP表达检测转染效率、Nell-1免疫细胞化学检测目的基因的表达。碱性磷酸酶(ALP)染色、半定量检测及钙结节茜素红染色检测细胞成骨分化。将基因修饰bMSCs与β-磷酸三钙颗粒复合用于兔上颌窦底提升,分别在术后2周和8周取材,HE染色,测量成骨面积,并采用SPSS11.0软件包对2组间数据进行t检验。结果:AdEGFP基因修饰组GFP表达效率可达60%~80%,Nell-1细胞化学染色显示,AdNell-1基因修饰组呈阳性表达。AdNell-1基因修饰组ALP染色及钙结节茜素红染色均高于AdEGFP基因修饰组,ALP半定量检测具有统计学差异(P<0.05)。体内实验研究中,AdNell-1基因修饰组新骨形成面积在8周时显著高于AdEGFP基因修饰组(P<0.05)。结论:采用AdNell-1基因转染兔bMSCs可促进其成骨分化,体内可促进上颌窦底提升的效果。 展开更多
关键词 骨髓基质细胞 Nell分子基因 上颌窦底提升
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TCF7L2基因多态性与妊娠期糖尿病相关性及影响因素的研究
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作者 吴玲 曾秋霞 +2 位作者 冯银仲 邓绮娜 黎箐 《糖尿病新世界》 2023年第13期27-31,36,共6页
目的 分析妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)发病的相关影响因素,着重研究GDM患者的基因型分布和等位基因频率,以探讨两者相关性。方法 本研究选取2021年3月-2022年5月江门市妇幼保健院接收的378例孕妇作为研究对象,其... 目的 分析妊娠期糖尿病(gestational diabetes mellitus, GDM)发病的相关影响因素,着重研究GDM患者的基因型分布和等位基因频率,以探讨两者相关性。方法 本研究选取2021年3月-2022年5月江门市妇幼保健院接收的378例孕妇作为研究对象,其中GDM孕妇90例,产检健康孕妇288例。CDKAL1 rs7754840、IGF2BP2 rs1470579、MTNR1B rs10830962和TCF7L2 rs7903146采用已建立的Agena MassARRAY系统方法进行基因分型。结果 患有GDM的女性明显年龄较大(OR=1.067,95%CI=1.012~1.126,P=0.017),有明显较高的体质指数(OR=1.108,95%CI=1.042~1.180,P=0.001),初产妇(OR=2.059,95%CI=1.151~3.778,P=0.018),并且有糖尿病家族史的孕妇(OR=2.689,95%CI=1.107~6.369,P=0.025),TCF7L2rs7903146(OR=7.071,95%CI=1.925~27.571,P=0.003)多态性与GDM风险相关。然而,其他变异CDKAL1 rs7754840、IGF2BP2 rs1470579或MTNR1B rs10830962都与发生GDM的可能性无关。结论 本研究结果表明伴有妊娠史、较高的体质指数和高龄以及糖尿病家族史的妊娠期妇女患GDM患病风险更高,并证实TCF7L2 rs7903146 CT基因型是GDM的风险因素。 展开更多
关键词 妊娠期糖尿病 影响因素 TCF7l2基因多态性 TCF7l2 rs7903146 CT基因
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浅析3100型基因分析仪的应用
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作者 蔡永刚 裴黎 《刑事技术》 2003年第2期41-42,共2页
关键词 3l00基因分析仪 工作条件 保养 Identifiler试剂盒
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The Inheritance of Early Heading in the Rice Variety USSR5 被引量:1
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作者 江玲 徐俊锋 +4 位作者 魏祥进 王松凤 唐九友 翟虎渠 万建民 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2007年第1期46-55,共10页
USSR5, a japonica rice variety from the former Soviet Union, is an extremely early maturing rice variety. To elucidate the genetic basis for its early heading, genetic analysis was carried out by crossing it with a se... USSR5, a japonica rice variety from the former Soviet Union, is an extremely early maturing rice variety. To elucidate the genetic basis for its early heading, genetic analysis was carried out by crossing it with a set of major gene nearly isogenic lines (NIL) and QTL-isogenic lines. The early heading of USSR5 was attributed to the presence of photoperiod-insensitive alleles at E1 and Se-1 gene, the photoperiod-sensitive inhibitor gene i-Se-1, and the dominant earliness gene Ef-1. Analysis of a backcrossed population (BCIF1) derived from the cross USSR5 x N22 indicated that two quantitative trait loci (QTL) for early heading were located on chromosomes 7 and 8, accounting for 27.4% and 11.2% of the phenotypic variance, respectively, with both early alleles originating from USSRS. From an F2 population of the same cross, early heading QTLs were detected on chromosomes 1, 2, 7, 9, and 10, with individual QTL accounting for between 4.1% and 15.4% of the phenotypic variance. Early heading alleles at four of these five QTLs originated from USSRS. A comparison of chromosomal locations suggests that one of these QTLs may be identical with the known gene Hd4 (E1). The relationship between the other QTLs and known genes for heading date are not clear. USSR5 is a promising source for propagating earliness for the development of improved early heading rice varieties. 展开更多
关键词 rice (Oryza sativa l.) heading date nearly isogenic line genotype analysis QTl mapping
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pQE32-HPV18 L1重组质粒的构建及鉴定
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作者 李迪 谷鸿喜 +2 位作者 张凤民 钟照华 程志 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2002年第2期102-104,共3页
目的 构建重组原核表达质粒获得HPV1 8L1活性蛋白 ,为进一步研制HPV1 8基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒pBR32 2 HPV1 8为模板 ,利用PCR方法扩增HPV1 8L1DNA片段 ,将HPV1 8L1DNA与pUC1 9质粒重组构建pUC1 9 HPV1 8L1重组质粒... 目的 构建重组原核表达质粒获得HPV1 8L1活性蛋白 ,为进一步研制HPV1 8基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒pBR32 2 HPV1 8为模板 ,利用PCR方法扩增HPV1 8L1DNA片段 ,将HPV1 8L1DNA与pUC1 9质粒重组构建pUC1 9 HPV1 8L1重组质粒。用酶切电泳验证重组结果的正确性 ;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用pQE32质粒做表达载体构建pQE32 HPV1 8L1重组质粒 ,并用酶切电泳验证。结果 PCR扩增DNA片段约为 1 .7Kb ,与预期结果相同。pUC1 9 HPV1 8L1克隆重组质粒酶切后显示 4 .39Kb ,酶切图谱与预期相同。测序验证插入片段全序列无改变。pQE32 HPV1 8L1表达重组质粒酶切后显示其大小约 5 .1 6Kb ,酶切图谱亦与预p期相同。结论 pQE32 HPV1 展开更多
关键词 pQE32-HPV18 l1 重组质粒 构建 鉴定 人乳头瘤病毒18l1基因 pQ32质粒 基因重组
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CACNA1C基因多态性与中国新疆维吾尔族精神分裂症患者的相关性研究 被引量:1
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作者 罗晓 安治国 +2 位作者 马琦 张丽丽 伊琦忠 《临床精神医学杂志》 CAS 2023年第1期37-40,共4页
目的:探究L型钙离子通道α1C亚基(CACNA1C)多态性与新疆维吾尔族精神分裂症患者的相关性。方法:选取2010年5月至2016年5月在我区治疗的新疆维吾尔族精神分裂症患者985例为病例组,并以2016年1月至5月健康体检者1123例为对照组。采用Taqma... 目的:探究L型钙离子通道α1C亚基(CACNA1C)多态性与新疆维吾尔族精神分裂症患者的相关性。方法:选取2010年5月至2016年5月在我区治疗的新疆维吾尔族精神分裂症患者985例为病例组,并以2016年1月至5月健康体检者1123例为对照组。采用Taqman探针分型对CACNA1C基因rs1006737、rs2239015位点进行基因分型,观察等位基因及基因型与精神分裂症发病风险的关系;比较两组CACNA1C基因rs1006737、rs2239015位点基因型与等位基因频率;比较两组阳性与阴性症状量表(PANSS)评分;分析CACNA1C基因rs1006737位点(A/G)、rs2239015位点(C/T)多态性与精神分裂症及PANSS评分的相关性。结果:病例组rs1006737位点A等位基因频率低于对照组(P<0.05);经多元Logistic回归分析,精神分裂症家族史、CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)与精神分裂症患病因素呈正相关(P<0.05)。结论:新疆维吾尔族精神分裂症患者CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)基因检出率较高,并且CACNA1C基因rs1006737位点(GG型)、rs2239015位点(TT型)与患者PANSS量表评分呈正相关,可能是精神分裂症的危险因素。 展开更多
关键词 精神分裂症 l钙离子通道α1C亚基基因 基因多态性 新疆维族 相关性
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人乳头瘤病毒18型主要衣壳蛋白原核表达系统的构建及鉴定 被引量:5
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作者 程险峰 穆锦江 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期845-848,共4页
目的构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒18型(HPV18)主要衣壳蛋白,为进一步研制HPV18基因工程疫苗打下基础。方法以重组质粒pBR322-HPV18为模板,利用PCR方法扩增HPV18L1 DNA片段,将HPV18L1 DNA与pUC 19质粒重组构建pUC19-HPV18L1重... 目的构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒18型(HPV18)主要衣壳蛋白,为进一步研制HPV18基因工程疫苗打下基础。方法以重组质粒pBR322-HPV18为模板,利用PCR方法扩增HPV18L1 DNA片段,将HPV18L1 DNA与pUC 19质粒重组构建pUC19-HPV18L1重组质粒;用酶切电泳验证重组结果的正确性;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化;再利用pQE32质粒做表达载体构建重组质粒pQE32-HPV18L1,并用酶切电泳验证;利用SDS-PAGE检测HPV18L1目的蛋白;利用Western杂交鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果PCR扩增DNA片段约为1.7kb,与预期结果相同;克隆重组质粒pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同,而且测序验证插入片段全序列无改变;表达重组质粒pQE32-HPV18L1酶切图谱亦与预期相同;SDS-PAGE显示,约63×103处可见目的蛋白带,与预期结果一致;Western杂交鉴定,在Mr约63×103处可见目的条带,与预期结果一致。结论成功构建原核表达重组质粒pQE32-HPV18L1并能表达HPV18主要衣核蛋白。 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒18l1基因 基因重组 蛋白表达 鉴定
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非洛地平导致的外周性水肿与中国人群中CACNA1C基因多态性的相关性分析 被引量:1
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作者 薛世荣 黄景文 +4 位作者 罗韶金 杨玲 杨泽福 潘伟 邹军 《长治医学院学报》 2016年第5期358-360,共3页
目的:探索中国人群中CACNA1C基因单核苷酸多态性(SNPs)与非洛地平导致的外周性水肿是否存在相关关系。方法:纳入190例服用非洛地平片的高血压病患者,分为非水肿组和水肿组2组。用PCR直接测序法检测CACNA1C基因单核苷酸多态性(SNPs),并对... 目的:探索中国人群中CACNA1C基因单核苷酸多态性(SNPs)与非洛地平导致的外周性水肿是否存在相关关系。方法:纳入190例服用非洛地平片的高血压病患者,分为非水肿组和水肿组2组。用PCR直接测序法检测CACNA1C基因单核苷酸多态性(SNPs),并对rs1051375、rs2238032、rs2239050和rs2239128等位点进行基因分型。用χ2检验方法分析SNPs位点各基因型在2组中的差异。结果:2组中rs1051375、rs2238032、rs2239050的各基因型的频率分布无统计学意义(P>0.05),而rs2239128TT基因型在水肿组分布明显高于非水肿组(P<0.05)。结论:CACNA1C基因的rs2239128TT基因型与非洛地平导致的外周性水肿有明显的相关关系。 展开更多
关键词 l钙离子通道αlC基因CACNAlC 钙离子通道阻滞剂 外周性水肿 非洛地平
全文增补中
尖锐湿疣组织中人乳头瘤病毒6和11型的感染率及其L1基因的表达 被引量:4
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作者 孙爱华 徐莹 +1 位作者 冯燕 严杰 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期150-153,共4页
目的了解尖锐湿疣组织标本中人乳头瘤病毒6型(HPV-6)和11型(HPV-11)感染率的差异,构建HPV-6型主要衣壳蛋白L1基因原核表达系统,建立ELISA方法检测标本中L1基因表达情况.方法采用基于HPV-6型和HPV-11型11基因的双重PCR,检测尖锐湿疣... 目的了解尖锐湿疣组织标本中人乳头瘤病毒6型(HPV-6)和11型(HPV-11)感染率的差异,构建HPV-6型主要衣壳蛋白L1基因原核表达系统,建立ELISA方法检测标本中L1基因表达情况.方法采用基于HPV-6型和HPV-11型11基因的双重PCR,检测尖锐湿疣组织标本中HPV-6型和HPV-11型的感染率;采用PCR扩增HPV-6型全长L1基因,T-A克隆后测序,构建原核表达系统pET32a-L1-E.coli BL21(DE3),采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rL1的表达.制备rL1兔抗血清,用免疫双扩散试验检测抗血清的效价;建立ELISA方法检测标本中L1基因的表达情况.结果116例患者尖锐湿疣组织标本中,92.2%(107/116)检出HPV-6型和/或HPV-11型.其中单一HPV-6型阳性者占70.1%(75/107),单一HPV-11型阳性者占23.4%(25/107),HPV-6型和HPV-11型混合感染者占6.5%(7/107).与报道的相应序列比较,所克隆的HPV-6型L1基因核苷酸和氨基酸序列同源性分别为99.20%~99.93%和99.80%~100%.IPTG能诱导rL1表达,rL1兔抗血清免疫双扩散效价为1:4.尖锐湿疣组织标本88.8%(103/116)检出L1蛋白.结论成功地构建了HPV-6型L1基因原核表达系统,并建立了HPV-6型和HPV-11型L1基因分型的双重PCR和L1蛋白ELISA检测方法.浙江省尖锐湿疣患者主要感染HPV-6型,病灶中HPV高频率表达病毒主要衣壳蛋白L1. 展开更多
关键词 尖锐湿疣 人乳头瘤病毒6/11 l1基因
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体质量指数和L型钙离子通道α1C基因多态性对小剂量氨氯地平降压疗效的交互作用 被引量:10
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作者 景林德 刘玉清 +5 位作者 贾友宏 刘红 王文 马丽媛 黄建凤 李一石 《中华高血压杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期61-66,共6页
目的研究体质量指数(BMI)和L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)单核苷酸多态性(SNP)对小剂量氨氯地平降压疗效的交互作用。方法采用PCR直接测序法对服用以氨氯地平为主要降压药物的原发性高血压患者181例的CACNA1C基因SNPrs1051375、rs2238... 目的研究体质量指数(BMI)和L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)单核苷酸多态性(SNP)对小剂量氨氯地平降压疗效的交互作用。方法采用PCR直接测序法对服用以氨氯地平为主要降压药物的原发性高血压患者181例的CACNA1C基因SNPrs1051375、rs2238032、rs2239050、rs2239128等位点进行基因分型。采用多因素方差分析和有序Logistic回归方法分析BMI和SNP对降压疗效的交互作用。结果经多元线性回归方法调整基线血压、年龄、性别、尿酸、三酰甘油、药物等因素后,BMI和rs2238032G/T位点与用药后收缩压降幅均相关(B=-0.612,P=0.044;B=11.818,P=0.037),rs2238032G/T位点与用药后舒张压降幅亦相关(B=12.450,P=0.001)。多因素方差分析显示rs2238032G/T位点基因型与BMI存在交互作用(P<0.05),携带rs2238032G/T位点TT基因型和BMI正常(<25kg/m2)患者对氨氯地平的降压疗效高于携带GT和GG基因型的超重患者。有序Logistic回归分析亦显示出rs2238032G/T位点GT基因型与BMI存在交互作用的趋势(B=0.212,P=0.066)。结论 BMI和CACNA1C基因rs2238032G/T位点基因型对小剂量氨氯地平的降压疗效可能存在交互作用。 展开更多
关键词 体质量指数 l钙离子通道α1C基因 高血压 氨氯地平 交互作用
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L型钙离子通道α1C亚基基因多态性与钙通道阻滞药降压疗效的关系 被引量:2
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作者 周君 陈菊 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期202-205,共4页
目的观察终末期肾病(ESRD)患者L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)多态性和二氢吡啶类钙通道阻滞药降压疗效的关系。方法入选215例ESRD患者,用聚合酶链式反应(PCR)-直接测序法检测CACNA1C基因多态性,同时多元线性回归分析基因型与钙通道阻... 目的观察终末期肾病(ESRD)患者L型钙离子通道α1C基因(CACNA1C)多态性和二氢吡啶类钙通道阻滞药降压疗效的关系。方法入选215例ESRD患者,用聚合酶链式反应(PCR)-直接测序法检测CACNA1C基因多态性,同时多元线性回归分析基因型与钙通道阻滞药降压疗效间的关系。结果 CACNA1C基因频率分布符合Hardy-Weinberg平衡分布。rs2238032 GT型携带者与TT型比较,血红蛋白(Hb)水平显著增加(117.53±20.89)vs(99.52±20.59)g·L^(-1)(P<0.01)。rs1051375高血压未控制组中AA型与GA、GG型比较,血肌酸酐显著降低(656.79±288.74)vs(937.8±295.15)vs(1113.2±433.44)μmol·L^(-1)(P<0.01)。rs2239128 CT型携带者与TT型和CC型比较,治疗有效者明显增加(P<0.01),CT型舒张压降幅(ΔDBP)表现出增加的趋势(P<0.05)。rs2238032基因型与血压的降幅相关(P<0.001),TT型收缩压降幅(ΔSBP)和ΔDBP明显高于GT型(P<0.01)。结论 CACNA1C基因多态性与钙通道阻滞药的降压疗效相关。 展开更多
关键词 l钙离子通道α1C基因 终末期肾脏病 钙通道阻滞药 基因多态性 临床药理
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lncRNA KCNQ1OT1调控miR-384/CACNA1C轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响
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作者 于海亮 张洋 +4 位作者 刘成华 伦英峰 杨帆 王本峰 张俊然 《徐州医科大学学报》 CAS 2023年第8期590-597,共8页
目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控miR-384/L型钙离子通道α1C亚基基因(CACNA1C)轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测正常培养的大鼠心... 目的探讨长链非编码RNA钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1(lncRNA KCNQ1OT1)调控miR-384/L型钙离子通道α1C亚基基因(CACNA1C)轴对心肌细胞增殖、凋亡的影响。方法实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western blot分别检测正常培养的大鼠心肌H9c2、CP-R073细胞及缺氧/复氧(H/R)诱导的H9c2、CP-R073细胞中的KCNQ1OT1、miR-384、CACNA1C蛋白表达。将H9c2细胞分为Ct组、Model组、si-NC组、si-KCNQ1OT1组、mimic NC组、miR-384 mimic组、si-KCNQ1OT1+inhibitor NC组、si-KCNQ1OT1+miR-384 inhibitor组。除Ct组外,其他组H9c2细胞均需转染对应物质后构建H/R损伤模型。qRT-PCR检测细胞中KCNQ1OT1、miR-384表达;CCK-8法、EdU染色检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测细胞中肌红蛋白(Mb)、肌钙蛋白-Ⅰ(cTnⅠ)水平;Western blot检测CACNA1C、增殖细胞核抗原(PCNA)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;双荧光素酶报告基因实验验证KCNQ1OT1与miR-384、miR-384与CACNA1C的关系。结果H/R诱导的H9c2、CP-R073细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达升高,miR-384表达降低,且H/R诱导的H9c2细胞中KCNQ1OT1、CACNA1C蛋白表达最高,miR-384表达最低,因此,后续选择H9c2细胞为研究对象。与Ct组比较,Model组细胞中KCNQ1OT1、细胞凋亡率、Mb、cTnⅠ水平、CACNA1C、Caspase-3、Bax蛋白表达升高,miR-384表达、D 450值、EdU阳性率、PCNA蛋白表达降低(P<0.05);沉默KCNQ1OT1或过表达miR-384可促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡;miR-384 inhibitor减弱了沉默KCNQ1OT1对H/R诱导的H9c2细胞增殖的促进作用,以及对细胞凋亡的抑制作用;KCNQ1OT1靶向调控miR-384/CACNA1C轴。结论沉默KCNQ1OT1可能通过上调miR-384来抑制CACNA1C表达,进而促进H/R诱导的H9c2细胞增殖,抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 钾电压门控通道亚家族Q成员1反向转录物1 miR-384 l钙离子通道α1C亚基基因 细胞增殖 急性心肌梗死
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环介导恒温扩增法对嗜麦芽寡养单胞菌L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测 被引量:1
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作者 崔茜 刘威 +3 位作者 杨展 陆思静 袁静 李艳 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期943-946,共4页
目的建立快速检测L2型头孢菌素β内酰胺酶的方法。方法利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loopmediated isothermal amplification of DNA,LAMP)针对L2型头孢菌素β内酰胺酶基因设计的5条特异性引物,通过引物特异性识别特定Bla L2基因上的7... 目的建立快速检测L2型头孢菌素β内酰胺酶的方法。方法利用DNA环介导恒温核酸扩增法(loopmediated isothermal amplification of DNA,LAMP)针对L2型头孢菌素β内酰胺酶基因设计的5条特异性引物,通过引物特异性识别特定Bla L2基因上的7个独立区域实现耐碳青霉烯类嗜麦芽寡养单胞菌的检测。实时浊度仪监测反应结果表明,LAMP反应在65℃恒温条件下50 min内完成;钙黄绿素可视化检测表明阳性结果呈绿色,与阴性结果差异显著。结果 LAMP法最低检出基因的浓度为2.58 pg/μl,其灵敏度为PCR法的100倍,且具有良好的特异性。结论 LAMP法具有过程简单、实验装置简便、结果肉眼可辨别、灵敏度高、特异性强等特点,对非L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的结果呈阴性,适用于临床L2型头孢菌素β内酰胺酶基因的快速检测。 展开更多
关键词 l2头孢菌素β-内酰胺酶基因 环介导恒温扩增技术(lAMP) 快速检测 嗜麦芽寡养单胞菌
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人乳头瘤病毒重组质粒的构建及蛋白表达 被引量:2
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作者 李迪 谷鸿喜 +1 位作者 庄敏 张凤民 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期433-435,共3页
目的 构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒 18型L1片段 (HPV18L1)活性蛋白 ,为进一步研制人乳头瘤病毒 18型 (HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒 (pBR32 2 -HPV18)为模板 ,利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段 ,将HPV18L1DNA... 目的 构建重组原核表达质粒获得人乳头瘤病毒 18型L1片段 (HPV18L1)活性蛋白 ,为进一步研制人乳头瘤病毒 18型 (HPV18)基因工程疫苗打下基础。方法 以重组质粒 (pBR32 2 -HPV18)为模板 ,利用PCR方法扩增HPV18L1DNA片段 ,将HPV18L1DNA与质粒 (pUC19)重组构建重组质粒 (pUC19-HPV18L1)。用酶切电泳验证重组结果的正确性 ;并通过测序检查质粒重组后序列有无变化。再利用质粒 (pQE32 )做表达载体构建重组质粒(pQE32 -HPV18L1) ,并用酶切电泳验证。将重组质粒 pQE32 -HPV18L1转入工程菌 (M 15 ) ,用酶切电泳验证重组工程菌 (pQE32 -HPV18L1/M15 )正确性。利用SDS -聚丙酰胺凝胶电泳 (SDS -PAGE)检测HPV18L1目的蛋白。采用不同浓度异丙基 - β-D -半乳糖苷 (IPTG)、不同诱导时间来优化HPV18L1目的蛋白表达条件。利用Western印迹检测蛋白质 (Westernblot)鉴定HPV18L1目的蛋白的特异性。结果 PCR扩增DNA片段约为 1 7Kb ,与预期结果相同。克隆重组质粒 pUC19-HPV18L1酶切后显示的酶切图谱与预期相同 ,而且测序验证插入片段全序列无改变。表达重组质粒 pQE32 -HPV18L1酶切图谱亦与预期相同。蛋白表达条件优化结果为 1mmol/LIPTG诱导 4h后 ,获得HPV18L1最佳蛋白表达量 :SDS -PAGE显示 ,约 6 展开更多
关键词 人乳头瘤病毒18l1基因 基因重组 蛋白表达
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