基因重组HPV16L1蛋白的血清学实验在人乳头瘤病毒16感染诊断中的应用价值

目的探讨基因重组人乳头瘤病毒16L1蛋白(HPV16L1)在诊断HPV16感染中的临床应用价值。方法对718例因宫颈病变到该院进行HPV检查的患者采用聚合酶链反应(PCR)法和基因重组HPV16 L1蛋白采用ELISA法检测HPV16 L1抗体,并按照宫颈癌组、尖锐湿疣组、宫颈糜烂组对HPV16 L1抗体阳性及HPV16 DNA阳性进行统计分析。结果宫颈癌组的HPV16 L1抗体水平、HPV16 DNA水平均显著高于尖锐湿疣组、宫颈糜烂组,差异均具有统计学意义(P<0.05);根据阳性临界值判定法则,ELISAHPV16 L1抗体检测法及PCR检查法宫颈癌组的HPV16阳性率分别为45.68%、48.15%均显著高于尖锐湿疣组的11.29%、12.90%及宫颈糜烂组的1.75%、1.95%(P<0.05)。尖锐湿疣组的HPV16 L1抗体水平、HPV16 DNA水平、HPV16阳性检出率显著高于宫颈糜烂组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。采用ELISA HPV16 L1抗体检查方法与PCR检测的HPV16阳性率符合率为89.23%(58/65),两种方法检测的一致性检验Kappa值=0.921,两种检测方法具有较高的一致性。结论基因重组人乳头瘤病毒16L1蛋白在诊断HPV16感染具有一定的准确性,对宫颈癌HPV16感染的临床筛查具有一定的推广价值。

鸽新城疫病毒毒力致弱株的拯救及免疫原性分析

为快速获得鸽新城疫(ND)疫苗株,本研究构建了鸽NDV/Pi/CH/LHLJ/110822株反向遗传操作平台,拯救得到2株亲本病毒株r0822-21A、r0822-17A,以及1株F蛋白裂解位点突变为La Sota相应位点的病毒株r0822-FCS。HA/HI试验结果显示r0822-FCS毒力已致弱,将其灭活乳化后免疫SPF鸡可刺激其产生高滴度HI抗体。安全性评价试验结果显示其安全性良好,但接种14 d时SPF鸡的HI抗体滴度仅达3 log2,对基因Ⅶ型鸡源强毒CK/CH/HLJ/01/06攻毒保护率小于50%;免疫效力试验显示,r0822-FCS分别以10~5EID_(50)/0.1 mL、10~6EID_(50)/0.1 mL剂量接种14日龄SPF鸡,未检测到明显的抗体阳转。基因组测序分析结果显示,3株拯救病毒均在L基因的不同位置与新城疫病毒(NDV) V4株高度同源的外源基因片段重组,推测在实验条件下的细胞内拯救病毒过程中,病毒L基因与辅助质粒中的L基因发生了随机同源重组。综上所述,本研究获得的r0822-FCS株作为弱毒疫苗效果不佳,但可作为鸽ND灭活疫苗候选株。此外,本研究首次报道了反向遗传操作实验条件下,NDV基因组与V4株辅助质粒之间发生了基因重组,且L基因是决定病毒复制的关键基因。此次基因重组现象应为实验条件下的偶发事件,其机制和风险尚需后继实验研究分析。