L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备、纯化及检测研究进展

L-α-甘油磷脂酰胆碱(L-α-GPC)是动物体内天然存在的水溶性磷脂代谢产物,是乙酰胆碱合成的胆碱源。甘油磷脂酰胆碱能够有效增强人体的记忆力和认知能力,预防和治疗多种疾病。然而国内L-α-GPC的制备、纯化和检测技术相对不够成熟,较难满足市场对高质量、高纯度L-α-GPC的需求。通过对国内外L-α-GPC的制备、纯化及检测方法进行综述,进一步为甘油磷脂酰胆碱以及相关产品开发技术提供支持。

L-α-甘油磷脂酰胆碱的制备研究进展

L-α-甘油磷脂酰胆碱(L-α-glycerol phosphatidylcholine,L-α-GPC)是具有良好生物活性的小分子物质,在人和动物体内大量存在,参与中间代谢,发挥着至关重要的生理作用,是磷脂改性研究的一个重要组成部分。介绍并对比了L-α-GPC的各种制备方法,全合成法具有产物分离容易、纯度高的优势,但存在原料昂贵、药学性质不同等缺点;半合成法具有原料廉价易得、收率高的特点,成为当前研究的主流。

双歧杆菌三联活菌联合多烯磷脂酰胆碱与运动-饮食护理干预在非酒精性脂肪性肝病患者中的应用效果

目的分析非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者应用双歧杆菌三联活菌联合多烯磷脂酰胆碱与运动?-?饮食护理干预的效果,为临床治疗NAFLD提供参考依据。方法采用随机数字表法将黄石市第五医院于2021年1月至2023年7月期间收治的107例NAFLD患者分为对照组(53例,采用多烯磷脂酰胆碱+运动-饮食护理干预治疗)和观察组(54例,在对照组的基础上联合双歧杆菌三联活菌治疗)。两组患者均连续治疗3个月。对比两组患者的临床疗效,治疗前后的脂肪衰减系数(CAP)、肝脏硬度(LSM)及血清二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸(D-Lac)、肝功能指标,以及治疗期间的不良反应发生情况。结果观察组患者临床疗效和总有效率高于对照组;治疗后观察组患者CAP及两组患者血清DAO、D-Lac水平与治疗前比均降低,且观察组血清DAO、D-Lac均低于对照组;治疗后两组患者血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、层黏连蛋白(LN)、转化生长因子-β_(1)(TGF-β_(1))与治疗前比均降低,且观察组均低于对照组(均P<0.05);治疗前后两组患者组内和组间LSM及对照组患者CAP比较,以及治疗期间两组患者不良反应总发生率比较,差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论NAFLD患者应用双歧杆菌三联活菌联合多烯磷脂酰胆碱与运动-饮食护理干预疗效显著,能有效改善其肠黏膜屏障功能和肝功能,且安全性良好。

L-a-甘油磷脂酰胆碱的研发进展

人口老龄化是当今社会的发展趋势,老年痴呆症已成为危及老年人生命的"第四大杀手",抗痴呆药物的研究是近年来的热点。本文对治疗阿尔茨海默病等痴呆症的药物——L-a-甘油磷脂酰胆碱作一介绍,包括近年来的市场状况及前景、临床应用、分离及其纯化方法等。以进一步促进L-a-甘油磷脂酰胆碱类药物的制备与应用,填补国内该类药物制备的空白。

卵巢子宫内膜异位症患者血清磷脂酰胆碱、苯丙氨酰-异亮氨酸表达水平及临床价值研究

目的探讨卵巢子宫内膜异位症(ovary endometriosis,OEM)患者血清磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine,PC)、苯丙氨酰-异亮氨酸(phenylalanyl-isoleucine,PheIL)表达水平及临床价值。方法选取2020年1月~2022年1月期间亳州市人民医院诊治的OEM患者163例为研究对象(OEM组),根据患者术后复发情况分为复发组(n=35)和未复发组(n=128)。以同期因卵巢良性疾病诊治的60例女性患者为对照组。应用高效液相色谱-串联质谱法(high performance liquid chromatography tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS)检测各组血清PC和PheIL水平。比较不同美国生殖医学会(American Society of Reproductive Medicine,ASRM)分期、痛经程度OEM患者血清PC和PheIL水平差异。单因素及多因素COX回归分析影响OEM复发的危险因素。受试者工作曲线评价血清PC,PheIL及联合检测对OEM复发的诊断价值。结果OEM组患者血清PC(34∶3)(18.01±3.66μg/ml),PheIL(64.38±7.75 ng/ml)均高于对照组(1.66±0.47μg/ml,42.66±6.50ng/ml),差异具有统计学意义(t=34.388,18.145,均P<0.05)。ASRM分期Ⅲ~Ⅳ期的OEM患者血清PC(34∶3)(21.74±3.71μg/ml),PheIL水平(71.22±7.89ng/ml)高于Ⅰ~Ⅱ期患者(14.41±3.50μg/ml,57.79±7.60ng/ml),差异具有统计学意义(t=12.979,11.069,均P<0.05)。ASRM分期Ⅲ~Ⅳ期(OR=1.510,P<0.001),PC(34∶3)升高(OR=1.446,P<0.001),PheIL升高(OR=1.706,P<0.001)是影响OEM患者术后复发的独立危险因素,术后妊娠(OR=0.736,P<0.001)和术后用药(OR=0.749,P<0.001)是影响OEM患者术后复发的保护因素。血清PC(34∶3)和PheIL联合检测对OEM复发诊断的曲线下面积(95%CI)为0.864(0.840~0.879),大于血清PC(34∶3)和PheIL单一指标检测0.772(0.735~0.808),0.727(0.683~0.770),差异具有统计学意义(Z=4.252,5.640,均P<0.001)。结论OEM患者血清PC和PheIL水平升高,两者与ASRM分期有关,两者联合检测有助于预测OEM复发。

高效液相色谱-蒸发光散射法测定甘油磷脂酰胆碱

建立了高效液相色谱一蒸发光散射法（HPLC—ELSD）测定甘油磷脂酰胆碱（L-α-GPC）的方法。得到最佳色谱条件：色谱柱为TigerkinDiol柱（250×4．6mm，5μm），流动相为甲醇-水（体积比90：10），氮气流量为1．50L／min，漂移管温度为65℃。用外标法对L-α-GPC和磷脂酰胆碱（PC）进行定量分析，线性范围分别为0．25～3．00g／L和0．50～5．00g／L，相关系数分别为0．9993和0．9987；平均回收率分别为95．87％和95．72％；相对标准偏差分别为1．75％和1．93％。该方法能够简便快速的将L—a—GPC与其他磷脂进行分离。

富DHA-磷脂酰胆碱对双酚S致小鼠肝损伤的影响

【目的】研究从大西洋鲱(Clupea harengus)鱼籽中提取的富二十二碳六烯酸-磷脂酰胆碱(DHA-PC)对双酚S(BPS)诱导的小鼠肝损伤的改善作用。【方法】将24只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、BPS模型组和DHA-PC给药组,每组8只,模型组和给药组分别给予5 mg·(kg·d)^(-1)BPS,给药组同时灌胃80 mg·(kg·d)^(-1)DHA-PC,饲养10周。监测各组小鼠的食物摄入量、体质量、肝功能、附睾脂肪指数、肝脏组织病理学分析、肝脏组织中炎症因子和氧化应激等指标,研究DHA-PC对BPS诱导的小鼠肝损伤的改善作用。【结果】BPS处理后,模型组小鼠体质量、肝脏指数、附睾脂肪指数显著升高(P<0.05),但经DHA-PC饲喂治疗后,均呈现下降趋势。所有组别小鼠的食物摄入量、能量摄入量无差异(P>0.05)。病理学结果显示模型组小鼠肝脏肝索消失,肝脏发生局灶性脂肪性病变,给药组肝索恢复,中央静脉重现。与模型组相比,DHA-PC给药组显著降低谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、白介素(IL)^(-1)β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α、胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)、低密度脂蛋白(LDL-C)和丙二醛(MDA)的含量(P<0.05),显著提高高密度脂蛋白(HDL-C)、总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)的含量(P<0.05)。【结论】鲱鱼鱼籽源DHA-PC可通过抑制炎症、改善脂质代谢紊乱和氧化应激等途径有效改善BPS诱导的小鼠肝损伤。

HPLC-ELSD法测定酶解磷脂中甘油磷脂酰胆碱含量的研究

本研究建立了高效液相色谱-蒸发光散射法酶催化水解磷脂样品中的甘油磷脂酰胆碱(GPC)的方法。检测条件为:使用Alltech Silica色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温40℃,甲醇为流动相,流速1.0 mL/min,蒸发光散射检测器漂移管温度65℃,空气流速1.7 L/min。GPC为最后出峰的强极性组分,其保留时间为4.97 min,所得GPC标准曲线为Y=2.048 3 X+7.774 4,线性相关系数R2为0.991 4。检测限为6.3μg/mL(S/N=3),定量限为13.0μg/mL(S/N=10)。GPC的平均加标回收率为102.5%,RSD是2.2%(n=3),分析时间小于6 min。结果表明本方法分离效果好,检测结果准确、稳定,适用于酶催化水解磷脂样品中甘油磷脂酰胆碱的定量测定。

双油酰磷脂酰胆碱复合聚L-乳酸静电纺产物的形态

目的考察不同质量比的双油酰磷脂酰胆碱与聚L-乳酸复合电纺所得产物的形态。方法将双油酰磷脂酰胆碱与聚L-乳酸以不同的质量比共同溶解在二氯甲烷中制备成均相溶液或者W/O乳液后静电纺。扫描电子显微镜观察所得产物形态。结果当双油酰磷脂酰胆碱与聚L-乳酸的质量比较低时,产物呈现珠子-纤维结构,当前者比例增高后,纤维逐渐变细、不连续直至消失,当组成几乎为双油酰磷脂酰胆碱时,产物呈现单个的颗粒状,直至呈现条状。结论在不同的比例下以双油酰磷脂酰胆碱与聚L-乳酸静电纺可以得到形态多样的产品。

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物与水飞蓟宾对四氯化碳所致小鼠急性肝损伤保护作用的对比

目的比较水飞蓟宾 磷脂酰胆碱复合物 (SPC)与水飞蓟宾对四氯化碳所致的小鼠肝损伤的保护作用。方法 5 0只小鼠随机分成 5组 ,通过对对照组、给药组小鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶 (AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及肝组织学观察 ,比较SPC与水飞蓟宾对四氯化碳所致小鼠肝损伤之预防作用的效果。结果水飞蓟宾和SPC均能降低小鼠血清ALT、AST活性 ,能减轻肝脏病理学变化 ,但以SPC作用最为明显。结论SPC对四氯化碳造成的急性肝损伤有明显的保护作用 ,SPC的作用强于水飞蓟宾。

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对四氯化碳致小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对四氯化碳(CCl4)所致的小鼠急性肝损伤的预防和治疗作用。方法:50只小鼠随机分成5组,每组10只:正常对照组、模型组、预防组、治疗组和预防+治疗组,采用CCl4造成小鼠急性肝损伤模型,预防组于注射CCl4前多次给小鼠灌服SPC,治疗组于注射CCl4后给SPC,预防+治疗组于注射CCl4前后均给SPC,24h后采血,分离血清,检测血清ALT和AST活性,并取肝组织观察比较肝脏病理组织学改变。结果:SPC明显降低小鼠血清ALT和AST活性,治疗、预防及预防+治疗组与模型组比较差异均有极显著性(P<0.01),预防组与治疗组比较差异有显著性(P<0.05),预防+治疗组与治疗组比较差异有极显著性(P<0.01),且均能改善肝脏病理组织学变化。结论:SPC对CCl4造成的急性肝损伤有明显的预防和治疗作用。

醇相体系制备高纯甘油磷脂酰胆碱的研究

探讨了在醇相体系中甲醇钠催化制备甘油磷脂酰胆碱(L-alpha glycerylphosphorylcholine)的可行性,建立了磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine)和L-α-GPC的HPLC-ELSD检测方法,研究了温度、料液比、甲醇钠添加量、反应时间对PC转化率和GPC得率的影响。利用Design Expert软件对工艺参数进行优化,得最佳条件:温度35℃、料液比3/20(g/mL)、甲醇钠添加量2 mL、反应时间1.5 h,GPC得率为88.2%。极差分析结果,反应条件对GPC得率影响的顺序为:甲醇钠添加量>温度>反应时间>料液比。大豆粉末磷脂的醇解反应液经过硅胶柱色谱纯化,最终可以得到纯度为99.8%的L-α-GPC,回收率78.4%,这为工业级规模制备高纯L-α-GPC提供了一种好的思路和方法。

大豆粉末磷脂同时制备甘油磷脂酰胆碱和甘油磷脂酰乙醇胺的研究

以大豆粉末磷脂为原料,研究了甲醇钠催化其醇解反应,同时制备含有甘油磷脂酰胆碱(GPC)和甘油磷脂酰乙醇胺(GPE)的混合物。通过探讨大豆粉末磷脂与无水甲醇料液比、催化剂甲醇钠添加量、反应温度、反应时间对反应产物中GPC和GPE得率的影响规律,确定了甲醇钠催化醇解大豆粉末磷脂的最佳反应条件:料液比1∶4,催化剂甲醇钠添加量5%(以大豆粉末磷脂质量计),反应温度35℃,反应时间6 h。在最佳反应条件下,GPC得率为93.60%,GPE得率为88.69%。

非水电位滴定法测定甘油磷脂酰胆碱

建立了非水电位滴定测定甘油磷脂酰胆碱(GPC)含量的方法。采用高氯酸标准溶液对GPC样品进行电位滴定,利用二级微商法确定电位滴定终点消耗的高氯酸标准溶液体积从而得出GPC含量,用建立的方法测得自制GPC样品含量为78.73%,其方法精密度RSD为0.048%。该法操作方便、准确度高,适合GPC的快速检测。

多烯磷脂酰胆碱对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠肝脏SREBP-1c与ABCA1蛋白表达的影响

目的观察多烯磷脂酰胆碱对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠肝脏SREBP-1c、ABCA1蛋白表达的影响。方法采用高脂饲料建立SD大鼠NAFLD模型,并用多烯磷脂酰胆碱胶囊进行干预治疗4周,观察该药对大鼠血脂、肝脏脂肪含量的影响,并用免疫组化法观察药物对大鼠肝脏SREBP-1c、ABCA1蛋白表达的影响。结果空白组、观察组肝脏TG、TC含量明显低于模型组(P<0.01);同时SREBP-1c蛋白表达水平也明显低于模型组(P<0.01),但观察组与空白组比较差异无统计学意义;而ABCA1蛋白表达水平均明显高于模型组(P<0.01)。结论对肝脏组织SREBP-1c蛋白表达的下调,以及对ABCA1蛋白表达的上调,可能是多烯磷脂酰胆碱改善NAFLD的重要机制。

脂肪酶Rhizopus chinensis催化水解大豆粉末磷脂制备L-α-甘油磷脂酰乙醇胺

为考察脂肪酶Rhizopus chinensis催化水解大豆粉末磷脂制备L-α-甘油磷脂酰乙醇胺(L-α-GPE)的可行性,采用脂肪酶Rhizopus chinensis催化水解大豆粉末磷脂制备L-α-GPE,通过单因素实验考察了pH、大豆粉末磷脂质量浓度、反应温度、CaCl_(2)质量浓度、酶浓度对L-α-GPE得率的影响,并对纯化产品进行了红外光谱和超高效液相色谱电喷雾四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)结构验证。结果表明:在pH 7,大豆粉末磷脂质量浓度5 mg/mL,大豆粉末磷脂磷酸盐缓冲溶液中添加终质量浓度为2 mg/mL的CaCl_(2)、终浓度为30 U/mL的脂肪酶Rhizopus chinensis,于45℃下反应15 h后,L-α-GPE得率为93.8%。产品经分离纯化后得到纯度为99.2%的浅黄色黏稠液体,经结构验证确为L-α-GPE。

树脂柱色谱纯化甘油磷脂酰胆碱

研究了树脂柱色谱纯化甘油磷脂酰胆碱(L-α-GPC)的可行性,通过树脂筛选,确定D001大孔阳离子交换树脂为最佳纯化树脂,并对纯化工艺条件进行了优化。通过静态实验得到最优条件:上样质量浓度1.52 mg/mL,样品溶液pH为7,吸附时间300 min,解吸液为去离子水。在静态实验的基础上,进行了树脂柱色谱纯化L-α-GPC的动态实验,对吸附流速、解吸液和解吸流速进行优化。动态实验最优条件:吸附流速2 mL/min,解吸液为去离子水,解吸流速2 mL/min。依据动态实验最优条件,最终L-α-GPC的纯度为96%,回收率为54.1%,这表明树脂柱色谱纯化L-α-GPC的方法是经济、方便、可行的。

水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物对异硫氰酸-α-萘酯致小鼠肝损伤的保护作用

目的研究水飞蓟宾-磷脂酰胆碱复合物(SPC)对异硫氰酸-α-萘酯(ANIT)致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法小鼠40只随机均分成4组:正常对照组、ANIT模型组、ANIT+SPC低剂量(150 mg/kg)、ANIT+SPC高剂量(300 mg/kg)组。前两组予0.5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)悬液灌胃,后两组分别予SPC(150、300 mg/kg)CMC-Na悬液灌胃,连续1周。末次予SPC 12 h后,正常对照组灌胃予花生油,余3组予ANIT 60 mg/kg(花生油配制),制成小鼠急性肝损伤模型,16 h(禁食不禁水12h)后摘眼球采血,分离血清,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、血清总胆红素(TB)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)水平。结果予ANIT后,模型组小鼠血清ALT、AST、TB、MDA明显升高,SOD活性明显降低;SPC能明显对抗这种改变,SPC组(1503、00 mg/kg)与模型组比较差异显著(P<0.05)。结论SPC对ANIT造成的急性肝损伤有明显的保护作用。

硅胶吸附甘油磷脂酰胆碱的动力学和焓变的研究

主要研究硅胶吸附L-α-GPC的动力学和热力学特性对吸附过程的控制,发现界面扩散控制速率模型1-3(1-X)2/3+2(1-X)能很好的拟合硅胶的吸附过程。通过Freundlich方程和Langmuir方程对吸附平衡模拟,得到了Langmiur方程拟合硅胶吸附L-α-GPC的吸附等温线,计算出不同温度条件下的回归方程,相关系数均在0.99以上,并证实了硅胶的吸附为放热反应。同时,利用Clausius-Clapeyron方程计算出3个吸附量的硅胶吸附热力学参数分别为80、160和240 mg/g,焓变(ΔHAm)分别为24.85、23.82、22.72 k J/mol。研究结果为进一步探讨工业化硅胶柱色谱制备高纯L-α-GPC提供了基础数据和理论参考。

水飞蓟素-磷脂酰胆碱复合物的制备及体外溶出速率评价

目的:通过水飞蓟素-磷脂酰胆碱复合物的处方工艺研究,筛选得率和体外溶出速率高的制备处方和工艺并对其进行复合机理的研究。方法:采用正交实验设计制备水飞蓟素-磷脂复合物,以得率和体外溶出速率筛选最佳处方。结果:经处方筛选得最佳复合工艺条件为:水飞蓟素与磷脂摩尔比1∶2,温度45℃,反应时间3 h。经差热分析和核磁共振法证实水飞蓟素与磷脂经复合形成了新的复合物。其复合物体外溶出速率为市售益肝灵片剂的2.27倍。结论:水飞蓟素-磷脂酰胆碱复合物可提高水飞蓟素的溶出速率,是一种值得开发的水飞蓟素产品。