高效液相色谱法同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中5种物质及其样品处理方法对色谱峰的影响分析

建立了同时测定微生物酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺反应体系中5种物质(L-丙氨酰-L-谷氨酰胺、L-谷氨酰胺、L-丙氨酸甲酯、L-谷氨酸、L-丙氨酰-L-丙氨酸)的高效液相色谱分析方法。考察了样品处理中存在的发酵液、磷酸、三氯乙酸对色谱峰的影响,建立了一种对色谱峰无干扰的样品处理方法。选用邻苯二甲醛(OPA)为衍生剂,以在线衍生的方式实现了标准品或样品的柱前自动衍生。选用C18色谱柱进行分离,柱温40℃,以12.5 mmol/L磷酸盐缓冲液(88%,pH 7.4)与12%乙腈为流动相进行等度洗脱,流速为1 m L/min,在λex=338 nm,λ_(em)=450 nm下进行荧光检测,外标法定量。结果显示,该色谱条件下5种物质的测定线性范围广,相关系数均大于0.999 4。低、中、高3组加标水平下的回收率为93.5%~104.9%,相对标准偏差(RSD)小于7%。1日内间隔2 h进行6次进样,5种物质保留时间的RSD均小于0.12%,峰面积RSD均小于1.2%。该方法操作简单,分离度与灵敏度高,定量精确,重复性好。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺对低氧胁迫后军曹鱼幼鱼生长性能、血清生化与抗氧化指标的影响

本试验旨在为探究L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(Ala-Gln)对低氧胁迫后军曹鱼幼鱼生长性能、血清生化与抗氧化指标的影响。以低氧胁迫14 d后的军曹鱼幼鱼[(105.16±6.01)g]为研究对象,随机分为4组,每组3个重复,每个重复30尾。4组试验鱼分别投喂Ala-Gln添加量为0(对照组)、0.5%、1.0%、1.5%配制4种等氮等脂的试验饲料,并分别于试验第7、14、28天采集血清进行指标测定。结果显示:1)与对照组相比,在饲喂14与28 d时,1.0%组和1.5%组的增重率和特定生长率显著升高(P<0.05),饲料系数显著降低(P<0.05)。2)与对照组相比,在饲喂28 d时,1.0%组和1.5%组血清中甘油三酯和总胆固醇含量显著降低(P<0.05),所有添加Ala-Gln组血清中葡萄糖、总蛋白和白蛋白含量显著升高(P<0.05),1.5%组血清中谷草转氨酶与谷丙转氨酶活性显著升高(P<0.05)。3)与对照组相比,在饲喂28 d时,1.0%组和1.5%组血清中超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性显著升高(P<0.05),血清丙二醛含量显著降低(P<0.05)。以上结果表明,饲料中添加1.0%Ala-Gln可提高军曹鱼幼鱼血清中TP和ALB的含量以及减少血清中TC和TG的堆积,提高生长性能与抗氧化能力,改善低氧胁迫所带来的氧化损伤。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成反应研究

以L-乳酸乙酯和L-谷氨酰胺为原料,通过L-乳酸乙酯氯化、水解、酰化得到D-2-氯-丙酰基氯,再将D-2-氯-丙酰基氯与4-谷氨酰胺缩合后氨解,得到目标化合物,总收率43%,纯度(HPLC)大于98%。缩合反应的溶剂甲苯不需要脱水处理。重点讨论了中间体D-2-氯-丙酸的合成。

10 t/a中试规模制备二肽L-丙氨酰-L-谷氨酰胺

以邻苯二甲酰基为保护基,采用混合酸酐法接肽,中试规模制备了L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(力肽)。结果表明,制备L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的最佳条件为:N-Pht-L-丙氨酸接肽的最佳溶剂是乙酸乙酯,温度为0℃,n(N-Pht-L-丙氨酸)∶n(L-谷氨酰胺)=1∶1。以L-丙氨酸计,总摩尔收率为34.4%。目标产物质量分数达98.6%。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成及初步鉴定

目的 探讨L 丙氨酰 L 谷氨酰胺双肽的化学合成方法。方法 以L 谷氨酰胺和 2 D 氯丙酰氯为原料 ,通过缩合、胺化等反应 ,合成L 丙氨酰 L 谷氨酰胺双肽 ;采用熔点、氨基酸组分分析、元素分析、质谱等方法对其结构进行鉴别 ,用高效液相色谱法确定其纯度。结果 合成的双肽经理化检测 ,质量高。结论 采用本法合成谷氨酰胺双肽具有简便、快速、质量高等优点。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺双肽对水痘合并脓毒症患者影响分析与护理

目的观察L-丙氨酰-L-谷氨酰胺双肽对水痘合并脓毒症患者炎症反应、免疫功能及临床转归的影响。方法将患者随机分为观察组和对照组,每组各25例。对照组患者每天提供普通氨基酸1.5 g/kg,观察组每天提供普通氨基酸1.0 g/kg和L-丙氨酰-L-谷氨酰胺双肽0.5 g/kg,肠外营养的各种成分配制成3 L袋在容量输液泵控制下匀速静脉输注,连用7 d。观察比较两组治疗前后炎症反应、免疫功能及临床结局等指标。结果观察组在治疗后第8天炎症反应、血清蛋白及免疫指标改善均较对照组明显;观察组病死率及ICU住院天数较对照组均降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 L-丙氨酰-L-谷氨酰胺双肽可改善脓毒症患者免疫功能、减轻炎症反应、降低病死率、缩短ICU住院日。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺对杂交鲟体成分、肠道形态的影响

将初始体质量(0.42±0.05)g的杂交鲟(Acipenser schrenckii♀×A.baerii♂)仔鱼饲养在室内循环水养殖系统中,投喂添加0(G1)、0.25%(G2)、0.5%(G3)、0.75%(G4)和1.0%(G5)L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-AG)的5种等氮饲料,每个处理3个重复,每个重复1500尾鱼,研究L-AG水平对杂交鲟体成分和十二指肠形态的影响。56d的养殖结果表明:饲料中添加0.25%和5.0%L-AG对全鱼粗蛋白含量影响不显著(P>0.05),但添加0.75%和1.0%L-AG显著提高了全鱼粗蛋白含量(P<0.05)。添加0.25%~1.0%L-AG对全鱼水分、粗脂肪和灰分含量影响不显著(P>0.05)。与对照组相比,添加0.25%~1.0%L-AG对肠道绒毛高度、微绒毛高度和肌层厚度均未产生显著影响(P>0.05)。结果表明:外源补充0.75%~1.0%L-AG可显著提高杂交鲟仔鱼粗蛋白含量,但添加0.25%~1.0%L-AG对十二指肠形态不产生显著影响。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺环合类有关物质的测定

目的采用阳离子交换色谱(IEC)分离测定L-丙氨酰-L-谷氨酰胺环合类有关物质。方法阳离子交换色谱柱,以0.000 5 mol·L-1硫酸溶液为流动相;检测波长:215 nm。结果样品中各成分的分离度及检测限完全满足有关物质的测定要求。结论阳离子交换色谱法用于本品环合类有关物质的测定专属性强,排除了非环合类有关物质的影响,更能反映药品有关物质的组成情况。

丙氨酰谷氨酰胺通过JAK2/STAT3通路减轻失血性休克小鼠急性肺损伤的作用机制

目的研究N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(NLAG)通过Janus激酶2(JAK2)/信号传导与活化转录因子3(STAT3)通路减轻失血性休克小鼠急性肺损伤(ALI)的作用及机制。方法选择野生型雄性C57BL/6小鼠分为对照组、模型组、NLAG+模型组、Ad-NC组、Ad-NC+模型组、Ad-NC+NLAG+模型组和Ad-JAK2+NLAG+模型组,每组8只。采用心脏穿刺、抽取30%总血量的方法建立失血性休克致ALI模型,造模前30 min给予生理盐水或NLAG腹腔注射干预,造模前2周给予相应的腺病毒Ad-NC或Ad-JAK2尾静脉注射。造模后24 h计算肺指数=肺湿重/体质量,肺组织进行HE染色并计算肺损伤评分,检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)活性和p-JAK2、p-STAT3表达水平。结果模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达高于对照组,SOD活性低于对照组(P<0.05);NLAG+模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达低于模型组,SOD活性高于模型组(P<0.05);尾静脉注射腺病毒后,Ad-JAK2+NLAG+模型组肺指数,肺损伤评分,肺组织TNF-α、IL-6、MDA含量及p-JAK2、p-STAT3表达高于Ad-NC+NLAG+模型组,SOD活性低于Ad-NC+NLAG+模型组(P<0.05)。结论NLAG明显减轻失血性休克小鼠的ALI,该作用与抑制JAK2/STAT3通路介导的炎症反应和氧化应激有关。

酶法产L-丙氨酰-L-谷氨酰胺重组大肠杆菌pepD/pepN基因的敲除及其发酵优化

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺(L-alanyl-L-glutamine,L-Ala-L-Gln),是目前国内外公认的L-谷氨酰胺载体,在临床医学和营养学等领域有广泛应用。为了减少丙谷二肽在生物酶法生产过程中菌体对其降解,利用λRed同源重组系统,敲除大肠杆菌中肽酶D和氨肽酶对应的编码基因。与野生型菌株相比,双敲除突变菌株的全细胞酶活提高了0.29倍。对该菌株进行摇瓶发酵优化,得到最优培养基为(g/L):葡萄糖12、酵母提取物10、胰蛋白胨10、(NH_4)_2SO_4 1、KH_2PO_4 3、K_2HPO_4 1、MgSO_4 0.2;最优发酵温度为27℃;最佳反应条件为:Gln 200 mmol/L、Ala-Ome·HCl 200 mmol/L,反应p H 8.5,反应温度25℃。在最优条件下发酵36 h,丙谷二肽产量达到了14.51g/L反应液,是优化前的4.74倍。

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成研究

以L-丙氨酸和L-谷氨酰胺为起始原料,以邻苯二甲酰基为保护基,采用混合酸酐法接肽,水合肼脱保护,得到目标产物。探讨了接肽时的最佳溶剂,肼解脱保护时的最佳温度等反应条件。总收率大于38%,纯度大于99%(液相色谱外标法定量)。产品通过核磁共振氢谱、熔点测定、红外光谱等手段进行了表征。

N(2)-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺合成路线图解

本文综述了L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的合成方法,并给出其合成路线图解。

L-丙胺酰-L-谷氨酰胺的合成

丙氨酰-谷氨酰胺是肠外营养的一个重要的组成部分。人们已经证明了丙氨酰-谷氨酰胺具有调节机体蛋白质合成、维持机体氮平衡、维护肠道完整性、增强机体免疫力以及保护肝脏的功能。丙氨酰-谷氨酰胺已经在国外进入了工业生产阶段,而国内现阶段研究的合成方法步骤繁琐而造成最终产率较低,不利于工业生产。基于此,本课题以L-丙氨酸为起始原料设计了一个新的合成路线,成功合成了L-丙氨酰-L-谷氨酰胺,经离子交换树脂分离纯化得到了纯产品。整个合成路线简洁,操作简单,所用试剂毒性低,便于管理。产品丙氨酰-谷氨酰胺经核磁、质谱、熔点检测,各项指标均相符。丙氨酰-谷氨酰胺新的合成方法开发成功。

丙氨酰-谷氨酰胺在颅脑外伤患者中的应用研究

应激反应时,通过促进儿茶酚胺、糖皮质激素和以高血糖素的释放增多,以及对胰岛素、生长激素（GH）和甲状腺素（T3、T4）等合成、释放和活性的抑制,介导机体物质代谢的变化[1].谷氨酰胺贮备迅速耗竭,骨骼肌氨基酸池谷氨酰胺浓度降低50%以上,游离谷氨酰胺减少是应激性分解代谢的典型特点,谷氨酰胺消耗的比率和病情的严重程度相关.尤其在休克、组织低灌性状态下,体内谷氨酰胺严重缺乏,肠黏膜屏障及免疫系统功能受损,细菌移位,增加肠源性感染风险和病死率.重视营养支持,特别是免疫调理素N（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺补充更显得重要.本研究探讨丙氨酰-谷氨酰胺（Ala-Gln）强化治疗对颅脑外伤患者的肠黏膜屏障及免疫系统功能的影响.

L-丙氨酰-L-谷氨酰胺强化的肠外营养支持在外科危重患者的应用

目的 探讨用L 丙氨酰 L 谷氨酰胺强化的肠外营养对外科危重患者营养支持的应用价值。方法 将 2 4例外科危重患者随机分为两组 ,对照组单纯给予静脉营养 ,强化组除给予静脉营养外 ,按 1 5ml/kg补充L 丙氨酰 L 谷氨酰胺。分别在静脉营养治疗的前 1d、治疗后第 4、 7、 14d测定氮平衡、营养指标、免疫功能指标和患者耐受性指标。结果 治疗 7d后两组患者均由负氮平衡转为正氮平衡 ,营养指标、免疫功能指标均明显增高 ,但强化组增高更明显 ;患者耐受性指标中 ,强化组无显著变化 ,对照组则出现血葡萄糖和总胆红素升高。结论 用L 丙氨酰 L 谷氨酰胺强化比单纯的肠外营养更能明显改善危重患者的营养状况和免疫功能 。

4-(2-乙酰氨基-3-羧基丙酰氨基)苯甲酸的合成工艺研究

以L-天冬氨酸和乙酸酐为原料,经脱水环化合成N-乙酰-L-天冬酸酐,然后与对氨基苯甲酸经N-酰化反应合成得到新化合物4-(2-乙酰氨基-3-羧基丙酰氨基)苯甲酸。通过Scifinder查询,未发现它的报道。研究了物料配比、反应温度、反应时间和溶剂等因素对产物收率的影响。优化条件为:无水乙醇作溶剂,n(N-乙酰-L-天冬酸酐)∶n(对氨基苯甲酸)=1∶1,反应温度为45℃,反应时间为3 h。优化条件下产物收率为78.7%。目标化合物经熔点、红外和核磁氢谱确证。

基于COSMO-RS模型L-丙氨酸-L-谷胺酰胺结晶溶剂的筛选及其溶液热力学性质研究

利用真实溶剂似导体屏蔽模型(conductor-like screening model for real solvents,COSMO-RS)预测发现异丙醇可以作为L-丙氨酰-L-谷氨酰胺的结晶工艺中的优化溶剂,并通过实验加以验证;研究了L-丙氨酰-L-谷氨酰胺在水-异丙醇二元体系中从293.15 K至318.15 K的溶解度和相关溶液热力学性质;使用修正Apelblat方程,λh方程,van’t Hoff方程以及(NIBS)Redlich-Kister方程对溶解度数据进行拟合;通过水/异丙醇体系结合冷却-溶析耦合结晶工艺获得形态改善的L-丙氨酰-L-谷氨酰胺晶体。

碳酸氢钠注射液与瑞安吉和莱美活力存在配伍反应

碳酸氢钠注射液（Sodium Bicarbonate Injection）为无色澄明液体，适用于治疗代谢性中毒，碱化尿液及作为制酸药。瑞安吉（Fructose Sodium Diphosphate Injection．果糖二磷酸钠注射液）为无色澄明液体，适用低磷酸血症以及急性脑梗死等引起的脑血缺氧的辅助治疗。莱美活力[N（2）-L—Alanyl-L-glutamine Injection，N（2）-L-丙氨酰-L-谷氨酰胺注射液]为无色澄明液体，适用于需要补充谷氨酰胺患者的肠外营养，包括处于分解代谢和高代谢状况的患者。临床化疗患者常常会联合应用这三种药物对症治疗。