L型氨基酸转运蛋白1的表达对非霍奇金淋巴瘤临床病理特征和预后的影响

目的:检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中L型氨基酸转运蛋白1(LAT1)的表达,分析LAT1对患者临床病理特征和预后的影响。方法:收集2017年1月至2019年4月在本院接受治疗的NHL患者92例,免疫组织化学检测NHL组织中LAT1的表达,比较不同病理特征(包括性别、Ann Arbor分期、结外浸润、Ki-67)患者组间LAT1的表达差异,单因素和多因素Cox回归分析影响患者死亡的危险因素,受试者工作曲线(ROC)检测NHL组织中LAT1阳性细胞百分比对患者死亡的预测价值,分析LAT1阳性细胞百分比对患者生存率的影响。结果:LAT1在NHL组织中呈阳性表达,Ann Arbor分期III期和IV期组LAT1高表达率高于I期组,结外浸润组LAT1高表达率高于无结外浸润组,Ki-67阳性表达组LAT1高表达率高于阴性表达组,比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。LAT1高表达组治疗3个疗程后的缓解率为70.7%,低于低表达组的91.2%,比较差异有统计学意义(P<0.05)。Ann Arbor分期III期、IV期、结外浸润、Ki-67阳性表达和LAT1表达增加(即LAT1阳性细胞比例评分≥2)为患者死亡的危险因素。LAT1阳性细胞百分比预测NHL死亡的截断值为45.6%,曲线下面积为0.905(95%CI:0.897-0.924)。LAT1高水平组(LAT1阳性细胞百分比≥45.6%)3年生存率为50.00%,低于LAT1低水平组的78.26%(P<0.05)。结论:LAT1在NHL组织中表达水平增加,影响患者的肿瘤分期和结外浸润,是患者死亡的危险因素。

L-型氨基酸转运体1在肿瘤诊断和治疗中的研究进展

L-型氨基酸转运体1(LAT1)是L-型氨基酸转运蛋白家族的一个成员,它是由两条多肽链通过二硫键形成的异二聚体,也是异二聚体氨基酸转运体SLC7亚家族的重要成员。LAT1的主要功能是介导一些分子中含有苯环或者支链的、分子质量较大的、体液环境中酸碱性呈中性的氨基酸(L-亮氨酸、L-甲硫氨酸和L-苯丙氨酸等)及其类似物(美法仑、多巴和甲状腺素等)的跨膜转运,其跨膜转运方式为不依赖Na^+和ATP的协助扩散。LAT1转运体在许多肿瘤细胞中有特异性的高表达,且其表达程度与临床上肿瘤的分期情况及治疗预后有密切的联系。LAT1不仅被证明在肿瘤诊断中具有重要意义,也是一个潜在的肿瘤治疗靶点。本文对LAT1的结构和转运特点进行了阐述,并总结了LAT1在肿瘤诊断和治疗中的最新研究进展。

L型氨基酸转运载体1对奶牛乳腺中β-酪蛋白表达的影响

为研究L型氨基酸转运载体1(L type amino acid transporter 1,LAT1)对奶牛乳腺中β-酪蛋白表达的作用,本试验采用PCR技术体外扩增奶牛LAT1基因并构建LAT1真核表达载体,采用脂质体转染技术将LAT1真核表达载体转染奶牛乳腺上皮细胞,并于转染48h后采用Western blotting技术检测LAT1过表达后乳腺上皮细胞中LAT1、4F2hc和β-酪蛋白的表达变化。荧光显微镜检测结果显示,LAT1真核表达载体成功转染奶牛乳腺上皮细胞;Western blotting检测结果显示,LAT1过表达的奶牛乳腺上皮细胞中LAT1极显著增加(P<0.01),β-酪蛋白的表达显著升高(P<0.05),4F2hc表达变化不显著(P>0.05)。这些结果提示LAT1对奶牛乳腺上皮细胞乳蛋白合成具有促进作用。

组织桥接整合因子1、Ⅰ型胶原蛋白基因、核转运蛋白基因2与三阴性乳腺癌术后复发关系

目的探究组织桥接整合因子1(BIN1)、Ⅰ型胶原蛋白基因(COL1A1)、核转运蛋白基因2(KPNA2)表达与三阴性乳腺癌(TNBC)术后复发关系及联合检测意义。方法选取2019年5月至2020年5月上海市第八人民医院行手术治疗的TNBC病人80例,根据术后2年是否复发分为复发组、未复发组,比较两组临床资料、组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达,复发的相关影响因素采用单因素与多因素logistic回归分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达预测术后复发的价值采用受试者操作特征曲线(ROC曲线)分析,组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达与复发时间关系采用Pearson分析,比较不同组织BIN1、COL1A1、KPNA2基因表达病人无复发生存期(RFS)。结果复发组T分期、N分期与未复发组比较,差异有统计学意义(P<0.05);复发组组织BIN1mRNA表达为0.24±0.07,低于未复发组的0.35±0.10(P<0.05),复发组组织COL1A1mRNA、KPNA2mRNA表达分别为2.07±0.62、2.91±0.84,高于未复发组的1.48±0.43、1.85±0.60(P<0.05);T分期、N分期、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA均是复发相关独立危险因素,BIN1 mRNA是复发相关独立保护因素(P<0.05);BIN1 mRNA、COL1A1 mRNA、KPNA2 mRNA的AUC分别为0.76、0.80、0.78,三者联合的AUC为0.94;BIN1mRNA与复发时间呈负相关(r=-0.79,P<0.001),COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与复发时间呈正相关(r=0.77、0.78,均P<0.001);BIN1mRNA高水平病人RFS长于低水平病人,COL1A1mRNA、KPNA2mRNA高水平病人RFS短于低水平病人(P<0.05)。结论BIN1mRNA、COL1A1mRNA、KPNA2mRNA与TNBC术后复发风险、复发时间有关,联合检测可作为早期预测术后复发的一个可靠方案,为临床治疗提供重要的参考信息。

L型氨基酸转运体1和血管内皮生长因子在甲状腺乳头状癌中的表达及意义

目的探讨L型氨基酸转运体1(LAT1)和血管内皮生长因子(VEGF)在甲状腺乳头状癌(PTC)中的表达及意义。方法采用免疫组织化学法检测68例PTC和相应癌旁组织中LAT1蛋白及VEGF蛋白的表达,并分析LAT1与PTC临床病理参数的关系及LAT1和VEGF的相关性。结果 LAT1蛋白在PTC组织和相应癌旁组织中的阳性表达率分别为83.8%和8.8%,VEGF蛋白在PTC组织和相应癌旁组织中的阳性表达率分别为88.2%和7.4%,LAT1蛋白和VEGF蛋白在PTC组织中的阳性表达率均高于癌旁组织(P<0.05);LAT1蛋白在PTC组织中的阳性表达与肿瘤临床分期和淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、性别和肿瘤大小无关(P>0.05);PTC组织中LAT1蛋白和VEGF蛋白表达呈正相关(P<0.05)。结论 LAT1可能通过调控VEGF表达而促进PTC的发生与演进,并可能成为PTC治疗的一个新的分子靶点。

视神经损伤对大鼠视网膜兴奋性氨基酸转运蛋白-1表达的影响

目的研究视神经损伤对兴奋性氨基酸转运蛋白-1(EAAT-1)的表达以及对视网膜谷氨酸(Glu)摄取的影响。方法建立大鼠右眼视神经损伤模型48只。术后1、7、14 d以高效液相色谱分析检测大鼠玻璃体谷氨酸浓度;通过免疫组织化学检测大鼠视网膜EAAT-1的表达。结果视神经损伤后1、7、14 d,实验眼玻璃体谷氨酸浓度升高,与对照眼比较,差异均有统计学意义(t1 h=10.171,P=0.000;t7 h=3.871,P=0.006;t14 h=5.599,P=0.001);实验眼视网膜EAAT-1表达降低,与对照眼比较,差异均有统计学意义(t1 h=3.460,P=0.011;t7 h=4.182,P=0.004;t14 h=4.077,P=0.005)。结论视神经损伤后视网膜内谷氨酸积聚,与视网膜EAAT-1的表达降低有关。

必需氨基酸上调乳腺腺泡中L型氨基酸转运载体1的表达

为探讨泌乳乳腺中必需氨基酸与L型氨基酸转运载体1(L-type amino acid transporter 1,LAT1)表达之间的关系,本研究通过体外构建奶牛乳腺泌乳模型,采用免疫印迹方法检测生理浓度的必需氨基酸对乳腺腺泡中LAT1及其辅因子4F2重链(4F2heavy chain,4F2hc)表达变化的影响。结果表明,生理浓度的必需氨基酸显著上调体外培养的奶牛乳腺腺泡中LAT1和4F2hc的表达,提示LAT1是奶牛乳腺上皮细胞内负责转运必需氨基酸的主要转运载体,LAT1和4F2hc的表达受必需氨基酸的诱导。

氨基酸转运载体B0AT1(SLC6A19)新型抑制剂的鉴定,作为诱导蛋白质限制和治疗2型糖尿病的潜在目标

中性氨基酸转运载体B0AT1最近被确定为是治疗2型糖尿病及相关代谢失调的靶点。B0AT1介导所有钠依赖性中性氨基酸的摄取。B0AT1需要collectrin(TMEM27)的共表达来在表层表达并发挥催化活性。本研究旨在建立鉴定和评估新型B0AT1的抑制剂的方法。CHO细胞系可稳定表达collectrin和B0AT1。利用高通量筛选以及荧光探针手段检测B0AT1摄取氨基酸期间细胞膜的去极化情况。在进行功能分析的同时,基于与B0AT1高度同源的果蝇多巴胺转运载体的高分辨率结构,使用AutoDock4对计算机模拟化合物进行筛选。我们测定了一系列新型B0AT1转运蛋白抑制剂。Benztropine是转运蛋白的竞争性抑制剂,其IC 50为44±9μmol。该化合物对相关转运体具有选择性,并阻断了小鼠小肠翻转模型中中性氨基酸摄取。本研究建立的方法可以广泛用于鉴定新的转运抑制剂。利用该方法能够可研究上皮转运、诱导蛋白质限制或通过药物化学进一步开发化合物。

L型氨基酸转运蛋白抑制剂BCH联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用

目的:探讨L型氨基酸转运蛋白抑制剂2-氨基双环-(2,2,1)-庚烷-2-羧酸(BCH)单用及联用顺铂对人卵巢癌SKOV3细胞生长的影响及其可能的分子机制。方法:人卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的BCH及BCH联合顺铂处理后,采用CCK-8法检测各组细胞的增殖活性;Western blot检测BCH对mTOR通路的影响。结果:单用BCH可显著抑制SKOV3细胞增殖,并呈现一定的时间-剂量依赖性。联用顺铂较之单独用药组,细胞活性明显降低(P<0.01),且BCH在顺铂之后应用时抑制作用更为明显(P<0.05)。Western blot显示BCH可抑制mTOR、p70 S6K和4E-BP1磷酸化,阻断mTOR通路。结论:L型氨基酸转运蛋白抑制剂BCH单用及联用顺铂均可显著抑制人卵巢癌SK-OV3细胞增殖,且BCH在顺铂之后应用抑制作用更明显,呈协同作用。

大鼠中性氨基酸转运蛋白SNAT1-HA融合蛋白的构建和表达(英文)

Na+偶联的中性氨基酸转运蛋白SNAT1是一种膜蛋白,属于转运蛋白第38家族(SLC38),在中枢神经系统(CNS)中起到重要的生理学作用.为了更容易地检测SNAT1在细胞膜上的表达,以pBK-CMVΔ-SNAT1为模板,用PCR,双酶切和T4连接酶连接的方法在SNAT1的C端加上了一个HA标签蛋白,构建了一个新质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA.用该质粒瞬时转染人胚胎肾细胞(HEK293T),转染36 h以后,融合蛋白SNAT1-HA可以用HA抗体检测.Western blot结果显示在约54 kDa处有一条特异性条带,与预期分子量大小一致.利用重组质粒pBK-CMVΔ-SNAT1-HA可以更方便地检测到SNAT1在细胞膜上的表达与定位,为进一步研究SNAT1结构与功能奠定了基础.

氨基酸转运载体LAT1研究进展

哺乳动物氨基酸的跨膜运输由多种氨基酸转运载体蛋白介导,其中L型氨基酸转运载体1(LAT1)属于L系统,主要转运大分子支链氨基酸和芳香族中性氨基酸。研究表明,LAT1广泛存在于哺乳动物肝脏、骨髓、大脑、胎盘、心脏和睾丸组织中,LAT1在恶性肿瘤中大量表达,对其不断的增殖起着重要的作用。目前国内对氨基酸转运载体LAT1的研究仍是空白,鉴于LAT1的研究在医学、营养等生命科学领域的研究意义,本文就氨基酸转运载体蛋白LAT1的表达、调节及其相关研究进展作一综述。

锌转运蛋白8抗体阳性的1型糖尿病患者胰岛自身抗体阳性率及生化指标水平

目的探讨锌转运蛋白8抗体(Zn T-8A)阳性的1型糖尿病(T1DM)患者胰岛自身抗体阳性率及生化指标水平。方法选择T1DM患者52例,分为Zn T-8A阳性组18例和Zn T-8A阴性组34例。检测并对比两组患者胰岛的自身抗体[谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)、胰岛细胞抗体(ICA)、胰岛素自身抗体(IAA)]阳性率及血糖、血脂等指标水平。结果 Zn T-8A阳性组患者的GADA、IA-2A、ICA、IAA阳性率均高于阴性组(P<0.05),但空腹C肽、餐后2 h C肽水水平低于阴性组(P<0.05)。结论 Zn T-8A阳性T1DM患者体内GADA、IA-2A、ICA、IAA等多呈阳性表达,胰岛素分泌功能较差。

氧化型低密度脂蛋白对THP-1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1表达的影响

观察氧化型低密度脂蛋白对THP 1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1和胆固醇流出的影响。用液体闪烁计数器检测细胞内胆固醇流出 ,流式细胞术检测细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1平均荧光强度。THP 1巨噬细胞与 5 0mg L氧化型低密度脂蛋白孵育不同时间即 6、12、2 4、4 8h ,油红O染色 ,显微镜下观察 ,可见细胞内脂滴由小而少逐渐地变为大而多 ,特别到 4 8h时非常明显地增多变大。油红O染色细胞计数分别为 2 6± 3个、30± 4个、4 3± 5个、5 4± 5个。 2 4h和 4 8h时分别与 6h时比较 ,油红O染色细胞明显增多 (P <0 .0 5 )。用 5 0mg L氧化型低密度脂蛋白孵育THP 1巨噬细胞不同时间即 6、12、2 4、4 8h ,测量胆固醇流出。结果显示氧化型低密度脂蛋白对THP 1巨噬细胞胆固醇流出的影响依时间不同而有所不同 ,在 6、12、2 4、4 8h时胆固醇流出分别为 2 .2 %、2 .9%、6 .3%、7.8% ,2 4h、4 8h时分别与 6h时比较 ,胆固醇流出明显增多 (P <0 .0 5 )。氧化型低密度脂蛋白使THP 1巨噬细胞的三磷酸腺苷结合盒转运体A1平均荧光强度从 6h时的 11.1增加到 4 8h的 32 .2。提示氧化型低密度脂蛋白可上调THP 1巨噬细胞三磷酸腺苷结合盒转运体A1的表达并增加胆固醇流出。

子宫内膜增生与高分化宫内膜样腺癌葡萄糖转运蛋白1型表达及其鉴别诊断意义

目的 葡萄糖转运蛋白1型（GLUT1）在子宫内膜增生及高分化宫内膜样腺癌组织中的表达及其鉴别诊断意义。方法 收集60例刮宫标本，包括诊断明确的各种类型内膜增生和高分化宫内膜样腺癌，采用单克隆抗体GLUT1的免疫组化SP方法进行染色。结果 不伴有非典型性的单纯性增生（12例）和复杂性增生（7例）的内膜组织分别只有2例和1例局灶化生细胞表达GLUT1；13例复杂性非典型增生全部呈不同程度的GLUT1阳性表达；28例高分化宫内膜样腺癌中，26 例GLUT1异常表达。结论 GLUT1异常表达是宫内膜非典型增生和宫内膜样腺癌的特征性生化改变，免疫组化检测GLUT1表达有助于鉴别宫内膜增生与非典型增生。

锌转运蛋白8在1型糖尿病诊断中的敏感性和特异性研究

目的探讨锌转运蛋白8(ZnT8A)在1型糖尿病(T1DM)诊断中的敏感性和特异性。方法选择2014年2月至2015年12月该院诊治的T1DM患者48例作为T1DM组,选择同期该院诊治的2型糖尿病(T2DM)患者96例作为T2DM组,同期在该院进行体检健康者96例作为健康对照组,3组都进行ZnT8A与常规指标的检测与相关性分析。结果健康对照组阳性阈值为0.011,ZnTSA阳性率为2.1%,T1DM组ZnTSA阳性率为37.5%,T2DM组ZnTSA阳性率为4.2%;T1DM组ZnTSA阳性率明显高于健康对照组与T2DM组(P<0.05),健康对照组与T2DM组ZnTSA阳性率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。T2DM组与T1DM组的空腹血糖与餐后2h血糖都明显高于健康对照组(P<0.05),T2DM组与T1DM组比较,差异无统计学意义(P>0.05),3组血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。选取ZnTSA阳性率大于或等于10.0%,空腹血糖大于或等于7.0mmol/L,餐后2h血糖大于或等于12.0 mmol/L作为T1DM的诊断阈值,特异性和敏感性分别为97.63%和98.22%、45.69%和94.34%、48.20%和96.20%。Spearman相关性分析显示T1DM组ZnTSA阳性率与空腹血糖、餐后2h血糖呈显著正相关关系(P<0.05),而与TC、TG、LDL-C、HDL-C无相关性(P>0.05)。结论 ZnT8A在T1DM中呈高表达,与空腹血糖和餐后2h血糖呈正相关性,可在维持T1DM诊断敏感性的同时提高特异性,具有很好的临床应用价值。

黄瓜质膜型Na^+/H^+逆向转运蛋白基因(SOS1)的克隆与序列分析

采用RACE(rapid-amplification of cDNA ends)方法从黄瓜Cucumis sativusL.中克隆出质膜Na+/H+逆向转运蛋白基因的cDNA(CsSOS1),该cDNA全长3 638bp,其中开放阅读框为3 435bp,编码1 145个氨基酸。氨基酸同源性分析表明,CsSOS1氨基酸序列与水稻OsSOS1和拟南芥AtSOS1的氨基酸序列同源性较高,分别为64%和58%,而与液泡型的Na+/H+逆向转运蛋白氨基酸序列亲缘关系较远。蛋白质跨膜结构分析表明CsSOS1包含11个完全跨膜片段。激光共聚焦显微镜显示CsSOS1基因的编码区与YFP基因融合后,定位在细胞膜上。酵母功能互补试验结果显示CsSOS1参与Na+与H+的转运,表明该基因转化酵母后可以补充酵母SOS1的缺失。

锌转运蛋白8抗体对1型糖尿病的诊断意义

目的 探讨锌转运蛋白8抗体在1型糖尿病患者中的诊断价值。方法 入选2015年12月-2016年4月我院临床确诊的1型糖尿病患者50例,2型糖尿病患者150例,选择健康对照组120例,实验组和对照组均于清晨抽取空腹静脉血,采用放射免疫沉淀法检测锌转运蛋白抗体。结果 与健康对照组比较,1型糖尿病与2型糖尿病患者的空腹血糖及餐后2 h血糖升高（P〈0.05）,1型糖尿病组新转运蛋白8抗体检测阳性率高于2型糖尿病和健康对照组（P〈0.05）。结论 在1型糖尿病患者的实验室诊断,锌转运蛋白8抗体可作为其诊断的预警信息,出现在临床症状之前,可以早期预测并指导临床治疗。

普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1的表达

目的观察普罗布考对氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1表达的影响。方法用逆转录聚合酶链反应、免疫荧光分别检测ATP结合盒转运体A1mRNA水平和蛋白的表达。结果用氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)分别孵育细胞0、12、24及48h,实验结果发现ATP结合盒转运体A1mRNA水平呈时序上调;用50μmol/L普罗布考预处理细胞4h,再用氧化型低密度脂蛋白孵育48h,普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组与氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1mRNA水平无明显差异,但免疫荧光检测发现普罗布考加氧化型低密度脂蛋白(100mg/L)处理组ATP结合盒转运体A1蛋白表达下调。结论普罗布考下调氧化型低密度脂蛋白诱导THP-1巨噬细胞ATP结合盒转运体A1蛋白的表达。

胰岛B细胞特异性锌转运蛋白与1型糖尿病

1型糖尿病(T1DM)是胰岛呈进行性破坏的自身免疫性疾病,以表达于胰岛B细胞的分子靶点作为抗原参与自身免疫反应为特征。其中阳离子外流锌转运蛋白8(ZnT8,SLC30A8)是人类T1DM的主要自身抗原之一,T1DM患者中SLC30A8基因位点上氨基酸325的多态性决定了其自身抗体多肽的特异性。ZnT8自身抗体可以在新发T1DM和糖尿病前期患者血清中检测出,在T1DM患者血清中其他自身抗体(谷氨酸脱羧酶抗体、抗酪氨酸磷酸酶抗体、抗胰岛素抗体和抗胰岛细胞抗体)阴性时ZnT8抗体仍有26%的阳性率。对自身抗体ZnT8的检测有助于在人群中筛查糖尿病前期患者,因此检测ZnT8抗体对评估T1DM的发生发展是必要的,ZnT8(SLC30A8)是T1DM的一个重要并独立的预测因子。