全细胞催化甘油生物合成L-果糖体系的构建

L-果糖是一种重要的稀少糖,广泛应用于食品、医药和化学合成等领域。通过构建E型马肝乙醇脱氢酶和NADH氧化酶重组大肠杆菌,再偶联醛缩酶重组大肠杆菌催化甘油合成L-果糖。对表达E型马肝乙醇脱氢酶和NADH氧化酶的菌株进行诱导条件的优化,诱导温度20℃,诱导时间16 h,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷添加浓度0.05 mmol/L。通过单因素实验研究温度、pH值、湿细胞量、甘油浓度对合成L-果糖的影响,利用正交试验进行优化,优化条件为:温度40℃,pH值为9.0,湿细胞质量浓度为25 g/L,甘油浓度为500 mmol/L。在优化条件下得到L-果糖2.67 g/L。采用全细胞转化方法以廉价的甘油为原料生产L-果糖,不仅省去了繁琐的酶纯化步骤,无须添加辅因子,而且生产成本低廉,期望为L-果糖产品绿色生产及现有技术改造提供理论参考。

L-果糖的合成研究进展

L-果糖目前在自然界中尚未发现,它与D-果糖具有相同程度的甜味且在人体中不能被代谢,是糖尿病患者理想的甜味剂,而且它不像人工甜味剂那样会产生不快的后苦味。本文从化学合成和酶催化合成两个方面综述了L-果糖的合成路线,并对各路线进行了比较和评价。

L-糖的研究进展

L-糖因其具有与D-糖一样的甜味,可被作为甜味剂使用。同时L-糖又与D-糖不同,不能或较少被人体代谢,而这一特点使L-糖可作为特殊人群的甜味剂,如糖尿病人。L-糖的另一个优点是没有人工甜味剂(如糖精等)的后味。L-糖在自然界相对稀缺,特别是L-葡萄糖和L-果糖。研究结合国内外最新报道,介绍L-糖的特性,L-果糖、L-葡萄糖的化学合成方法和酶法合成方法,并介绍了L-糖的应用。

PPP2R2A在乳腺癌细胞中结合GFPT2并导致其去磷酸化

PPP2R2A是PP2A磷酸酶的调控亚基之一,以往的研究报道显示,PPP2R2A可促进肿瘤细胞生存和生长。本研究通过串联亲和纯化联合HPLC-Chip-ESI/MS/MS筛选PPP2R2A的相互作用蛋白质,分析结果显示,L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶1(Glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 1,GFPT1)和L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶2(Glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 2,GFPT2)是PPP2R2A可能的结合蛋白。通过免疫荧光共定位、GST Pull-down和免疫共沉淀等方法,进一步确认了PPP2R2A和GFPT1及GFPT2的相互结合。通过shRNA下调PPP2R2A后,GFPT2的磷酸化水平显著增加,但GFPT1的磷酸化水平改变不明显。GFPT2是O-GlcNAC糖基化修饰通路中的一个限速酶,在乳腺癌细胞MDA-MB-231中下调PPP2R2A后,蛋白质O-GlcNAC糖基化修饰水平增加。这些结果表明,PPP2R2A可直接结合GFPT2,并导致其去磷酸化,进而影响细胞内O-GlcNAC糖基化修饰。