外源添加L-脯氨酸对棉花黄萎病发生及其根际土壤微生物群落的影响

【目的】根系分泌物是植物与土壤微生物进行互作的信号媒介,对于植物病害发生和植株生长均具有重要调控功能。论文旨在明确棉花根系分泌物L-脯氨酸抵御棉花黄萎病发生的微生态机制,揭示L-脯氨酸介导的根际微生物与棉花黄萎病发生的互作关系,为构建生物防治土传病害的有益菌群提供新视角。【方法】通过温室盆栽试验,以外源添加不同浓度的L-脯氨酸(0、50、100、200和400 mmol·L^(-1))为试验处理,采用实时荧光定量PCR(real-time qPCR)和宏基因组测序技术分别测定不同处理的土壤中大丽轮枝菌(Verticillium dahliae)DNA拷贝数量和土壤微生物群落结构及功能,采用主成分分析比较不同处理的根际土壤微生物群落结构,利用冗余分析研究土壤养分因子与微生物群落结构的相关性,利用斯皮尔曼相关分析研究微生物群落结构功能代谢途径的相关性。【结果】与空白对照相比,低浓度(50 mmol·L^(-1))L-脯氨酸处理不能够减轻棉花黄萎病的发生,高浓度(100、200和400 mmol·L^(-1))L-脯氨酸处理的病情指数分别下降22.51%、60.23%和64.23%。qPCR结果表明,L-脯氨酸处理不能够显著降低土壤中大丽轮枝菌拷贝数量。宏基因组测序分析表明,L-脯氨酸处理后细菌多样性Shannon指数显著增加,真菌多样性Shannon指数呈下降趋势。在属水平上,L-脯氨酸处理后类诺卡氏菌属(Nocardioides)、溶杆菌属(Lysobacter)、节杆菌属(Arthrobacter)、Phycicoccus、假单胞菌属(Pseudomonas)和毛霉菌属(Mucor)的相对丰度呈上升趋势。线性判别分析表明,除浓度为100 mmol·L^(-1)的L-脯氨酸外,外源添加L-脯氨酸处理后根际土壤微生物KEGG通路的富集情况发生改变。冗余分析表明,细菌群落组成受pH、电导率、硝态氮、铵态氮和有机质显著影响,而真菌群落组成与铵态氮存在显著相关性。Spearman相关分析表明,细菌的KEGG代谢通路与pH、有机质、铵态氮含量呈负相关关系,而与电导率和硝态氮呈正相关关系;真菌的大部分KEGG代谢通路与土壤养分的相关性较差。【结论】外源添加适量L-脯氨酸通过改变土壤细菌群落结构和功能,增加有益微生物的相对丰度,从而影响棉花黄萎病的发生,但其不能够改变病原菌数量。同时,根际细菌群落组成和功能均与土壤养分存在相关性。

L-脯氨酸拆分1,1′-联-2-萘酚的实验设计

为了将手性化合物的包结拆分法引入有机化学实验教学,设计了有机化学综合实验“L-脯氨酸拆分1,1′-联-2-萘酚”:将L-脯氨酸和外消旋联萘酚研磨后,乙腈回流后析出L-脯氨酸和(S)-BINOL形成的包合物,(R)-BINOL留在溶液中。该综合实验实现了光学纯联萘酚的高效拆分,创新了教学体系。实践表明,该综合实验采用基于非共价键作用的包结拆分法进行手性拆分,激发了学生的学习兴趣;此外,该实验综合性强,有利于学生动手操作能力、分析和解决综合问题能力的培养。

稀土脯氨酸配合物[RE_2(L-Pro)_6(H_2O)_4](ClO_4)_6的标准生成焓测定

合成了两种稀土高氯酸盐与Ｌ－脯氨酸配合物的晶体．经热重、差热、化学分析及对比有关文献，知其组成 是［Ｐｒ２（Ｌ－Ｐｒｏ）６（Ｈ２Ｏ）４］（ＣｌＯ４）６和［Ｅｒ２（Ｌ－ＰｒＯ）６（Ｈ２Ｏ）４］（ＣｌＯ４）６，质量分数为９９．２４％和９８．２０％．选用ＲＥ（ＮＯ３）· ６Ｈ２Ｏ（ＲＥ＝Ｐｒ，Ｅｒ）、ＬＰｒｏ、ＮａＣｌＯ４·Ｈ２Ｏ和 ＮａＮＯ３作辅助物，使用具有恒温环境的反应热量计，以 ２ ｍｏｌ·Ｌ－１ＨＣｌ 作溶剂，分别测定了［２ＲＥ（ＮＯ３）３·６Ｈ２Ｏ＋６Ｌ－ＰｒＯ＋６ＮａＣｌＯ４·Ｈ２Ｏ］和｛ ［ＲＥ２（Ｌ－ＰｒＯ）６（Ｈ２Ｏ）４］（ＣｌＯ４）６＋６ＮａＮＯ３｝在 ２９８．１５ Ｋ时的溶解热．设计一热化学循环求得化学反应的反应焓ｒＨ分别是：６３．９０４ ｋＪ·ｍｏｌ－１和 ９１．０１７ ｋＪ·ｍｏｌ－１，经计算得配合物［ＲＥ２（Ｌ－Ｐｒｏ）６（Ｈ２Ｏ）４］（ＣｌＯ４）６（ｓ）在 ２９８．１５ Ｋ时的标准生成焓（２９８．１５ Ｋ）分别 是－６ ５９４．７８ ｋＪ·ｍｏｌ－１和－６ ５３２．８７ ｋＪ·ｍｏｌ－１。

稀土脯氨酸配合物[Nd_2(L-pro)_6(H_2O)_4](ClO_4)_6的热化学研究

稀土氨基酸高氯酸盐 [Nd2 (pro) 6 (H2 O) 4](ClO4 ) 6 的标准生成焓数据未见有文献报道。用L 脯氨酸与稀土钕盐合成了稀土高氯酸盐L 脯氨酸配合物 ,经热重、差热、化学分析及对比有关文献 ,得知其组成是 [Nd2 (L pro) 6 (H2 O) 4](ClO4 ) 6 。采用具有恒温环境的反应热量计 ,以 2mol/LHCl作溶剂 ,NdCl3·6H2 O、L pro、NaClO4 ·H2 O和NaCl作辅助物 ,测定了 [2NdCl3· 6H2 O +6L pro +6NaClO4 ·H2 O]和 {[Nd2 (L pro) 6 (H2 O) 4](ClO4 ) 6 +6NaCl +1 4H2 O}在 2 98 1 5K时的溶解热。利用Hess定律设计一热化学循环求得化学反应的反应焓ΔrH m =-2 0 840kJ/mol,由标准生成焓热力学数据求得配合物 [Nd2 (L pro) 6 (H2 O) 4](ClO4 ) 6 (s)在 2 98 1 5K时的ΔfH m (2 98 1 5K) =-65 2 3 496kJ/mol。

高效液相色谱法测定饲料和宠物食品中的L-羟脯氨酸

建立饲料和宠物食品L-羟脯氨酸含量的高效液相色谱检测方法。采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为0.05 mol/L醋酸钠缓冲液(含1%N,N-二甲基甲酰胺)和乙腈溶液(体积比为80:20),流速为1.0 mL/min,检测波长为360 nm。结果显示,L-羟脯氨酸在1.0~100.0μg/mL范围内线性关系良好,线性方程y=2994.4x+1051.9,R^(2)=0.9998;最低检出限为2.0 mg/kg,回收率95.00%~100.00%。该方法简单快速、重现性好、精确度高,可作为饲料和宠物食品中L-羟脯氨酸的质量控制手段。

谷氨酰胺对草鱼肠道L-亮氨酸、L-脯氨酸吸收及肠道蛋白质合成的影响

利用肠道离体灌注模型和同位素示踪技术,研究谷氨酰胺对草鱼肠道L-亮氨酸和L-脯氨酸吸收量、肠道组织游离亮氨酸和脯氨酸量、以及对肠道蛋白质合成量的影响。结果表明:谷氨酰胺能够显著增加草鱼肠道对两种氨基酸的吸收量,显著增加肠道组织游离亮氨酸和脯氨酸量,并显著增加肠道蛋白质的合成量;将1.0mmol/L组与5.0mmol/L组谷氨酰胺的试验结果相互比较,无论是肠道吸收总量还是肠道组织游离氨基酸、新蛋白质合成量均没有显著差异;草鱼肠道在吸收亮氨酸和脯氨酸的同时,能够利用吸收的亮氨酸和脯氨酸和肠道蛋白质周转的氨基酸合成新的蛋白质,蛋白质合成量随着亮氨酸和脯氨酸浓度增加呈线性增加关系。本文结果表明,谷氨酰胺能够显著增加草鱼肠道对亮氨酸和脯氨酸的吸收量、能够显著增加肠道蛋白质的合成代谢。

L-脯氨酸发酵生产的研究进展

L-脯氨酸是含有亚氨基的中性氨基酸,是构成蛋白质的20种基本氨基酸之一,属人体非必需氨基酸。L-脯氨酸具有一定的生理活性,在医药、农业、化工及食品等方面有着广泛的用途,尤其在医药上是许多新药合成的中间体。重点概述了L-脯氨酸发酵生产菌种的选育、培养条件的优化和提取纯化研究,为L-脯氨酸发酵生产提供理论指导。

稀土与L-脯氨酸配合物的合成、表征及晶体结构

本文合成了通式为Ln(L-Pro)_3(H_2O)_2(ClO_4)_3(Ln=Pr、Nd、Er,L-Pro=L-脯氨酸)的固体配合物.元素分析、红外光谱、热分析对配合物进行了表征.培养了镨脯氨酸配合物的单晶,X射线四圓衍射确定了晶体的结构.晶体属于单斜晶系、空间群P2_1,α=0.9879(3),b=2.1883(4),c=1.3393(2)nm,β=91.23(2)°,V=2.895(1)nm^3,Z=2.晶体中每一个镨原子与来自6个L-脯氨酸羧基上的6个氧原子和2个结晶水分子键合,形成了一个八配位的稍有畸变的三角十二面体.每一个L-脯氨酸分子以羧基双齿方式与两个镨离子配位,形成了一个无限长的链状结构.

L-羟脯氨酸手性键合固定相的表征和色谱性能

制备了L－羟脯氨酸手性键合固定相，并采用红外光谱、低温氮吸附和元素分析方法表征了该键合相，系统考察了流动相pH、离子强度及柱温等色谱条件对α－氨基酸对映体拆分的影响，探讨了拆分色谱过程热力学和拆分机理，拆分了14种α-氨基酸对映体。

L-脯氨酸协助合成β-氢氧化镍和氧化镍花球及纳米三角片(英文)

以NH3·H2O和NaOH作为沉淀剂,通过水热方法在180℃,L-脯氨酸作用下,分别合成出了β-Ni（OH）2花球和纳米三角片。XRD结果表明合成出的β-Ni（OH）2产物是六方相,透射电镜（TEM）和场发射电镜（FESEM）表明花球直径为1~2μm,它是由厚15nm,边长110nm的三角片自组装形成的。对相应的β-Ni（OH）2前驱物在350℃空气下退火2h,分别得到NiO花球和纳米三角片。

枯草芽孢杆菌NCD-2对棉花根系分泌物L-脯氨酸响应的转录-蛋白质组学联合分析

【目的】棉花根系分泌物L-脯氨酸是影响生防菌株定殖的关键因素之一,前期研究发现L-脯氨酸能够提高枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)NCD-2生物膜形成能力。通过高通量测序技术分析L-脯氨酸调控枯草芽孢杆菌NCD-2生物膜形成和生防潜力相关的基因,为深入认识棉花根系分泌物与生防菌株的分子互作关系打下基础。【方法】以枯草芽孢杆菌NCD-2菌株为供试材料,外源添加浓度为10 mg·mL^(-1)的L-脯氨酸共培养24 h后,分别进行转录组(RNA-seq)和同位素标记相对定量蛋白质组技术(iTRAQ)分析,对所获得的转录组和蛋白质组数据进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证不同代谢通路中部分差异基因的表达情况。【结果】转录组分析发现,L-脯氨酸和NCD-2菌株共培养后,获得1071个差异表达基因(DEG),其中602个基因上调,469个基因下调。GO分析发现在生物过程、细胞组分和分子功能方面分别有49、14和30个功能条目显著富集。KEGG代谢通路主要富集在化合物代谢、鞭毛组装、细菌运动和趋化作用。蛋白质组学分析发现,筛选到211个差异表达蛋白(DEP),其中118个蛋白上调,93个蛋白下调。GO分析发现在生物过程和分子功能方面分别有13和8个功能条目显著富集。KEGG代谢通路主要富集在氨基酸代谢、碳水化合物类代谢、鞭毛组装和ABC转运蛋白。进一步转录-蛋白质组学联合分析发现,在L-脯氨酸作用下,检测到共有的显著差异表达基因(或蛋白)112个,其中38个基因(或蛋白)下调,74个基因(或蛋白)上调。GO功能显著富集主要集中在营养库活性、催化活性、细胞膜、定位、细胞脂质代谢过程、氧化还原过程、sigma因子活性、转运活性、芽孢形成9个方面。KEGG代谢通路主要富集在能量代谢、ABC转运蛋白、抗生素生物合成、鞭毛组装、运动或趋化作用和双组分系统方面。RT-qPCR验证了26个差异表达显著基因,结果发现在表达量上存在一定的差异,但表达趋势与RNA-seq和iTRAQ组学分析结果基本一致。【结论】棉花根系分泌物L-脯氨酸与枯草芽孢杆菌NCD-2之间的互作存在一个复杂的生物过程,依赖于不同代谢通路网络中的多个基因。双组分系统、抗生素生物合成、能量代谢、运动或趋化作用、鞭毛组装和ABC转运蛋白通路中的差异基因(或蛋白)可能在棉花根系分泌物与枯草芽孢杆菌互作过程方面发挥着重要作用。

以味精为原料制备l-脯氨酸

报道了一种以味精为原料 ,经过 l-谷氨酸 - γ-乙酯制备 l-脯氨酸的方法。具有原料简单和路线短的优点 。

PEG-400介质中L-脯氨酸催化香豆素-3-羧酸乙酯的合成

用PEG-400为溶剂,L-脯氨酸作为催化剂,能高效简便地催化水杨醛与丙二酸二乙酯通过Knoevenagel缩合反应得到香豆素-3-羧酸乙酯。本方法具有易于操作,后处理方便,反应时间较短,反应收率较高,催化剂和溶剂价廉易得,而且环境友好等优点。

亲水性相互作用色谱-四极杆串联线性离子阱质谱测定蛋白食品中L-羟脯氨酸残留

建立了亲水性相互作用色谱-四极杆串联线性离子阱质谱检测含蛋白食品中的皮革水解蛋白标示物L-羟脯氨酸(L-HYP)的同时定性与定量分析方法。样品中的L-HYP经酶解后用乙腈沉淀蛋白,HLB小柱除去部分脂溶性干扰物,采用液相色谱-质谱进行测定。本方法采用IDA结合EPI模式对试样中的L-HYP进行定性分析,并建立L-HYP的二级子离子谱库。通过以MRM模式对L-HYP进行定量分析,L-HYP在12种蛋白食品中平均回收率在73.4%～114.2%(n=6)之间,相对标准偏差在2.5%～14.4%(n=6)之间,可对试样中的L-HYP在定性确证的同时进行定量分析。

乳与乳制品中动物水解蛋白L-羟脯氨酸测定法

通过试验论证,建立了L-羟脯氨酸测定法来鉴定乳与乳制品中是否添加了动物水解蛋白的成分。该方法结果稳定,准确性高,可以作为乳与乳制品中动物水解蛋白的鉴定方法。

α-氨基酸在L-脯氨酸手性配体交换色谱固定相上的分离

合成了L_脯氨酸硅胶键合手性配体交换色谱固定相 ,并用于α_氨基酸的直接光学分离 ,详细考察了流动相pH值、金属离子浓度、流速、柱温以及进样量等因素对分离效果的影响 。

L-羟基脯氨酸键合手性配体交换色谱固定相的制备及手性拆分

合成出了 L -羟基脯氨酸键合手性配体交换固定相 ,用元素分析和红外光谱对固定相进行了表征。该固定相在反相条件下 ,以水作流动相 ,对 DL

稀土元素L-脯氨酸、甘氨酸、L-丙氨酸四元固态配合物的合成与表征

合成了6种稀土与L-脯氨酸、L-丙氨酸、甘氨酸四元固态配合物[RE(Pro)(Gly)2(Ala)2]Cl3·C2H5OH,并以热谱、红外光谱、核磁共振氢谱、质谱进行了表征。

高效液相色谱法测定乳与乳制品中L-羟脯氨酸的含量

目的建立高效液相色谱法测定乳与乳制品中L-羟脯氨酸的含量。方法样品水解衍生后采用C18色谱柱,以乙腈和10 mmol/L乙酸钠（p H=5.0）为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 m L/min,柱温35℃,荧光检测器进行检测。结果 L-羟脯氨酸检出限为0.5 mg/kg,线性范围为1.0~100.0μg/m L,加标回收率在95.3%~102.7%之间,相对标准偏差在1.46%~7.56%之间。结论该方法操作简便、准确、快速,提高了样品检出灵敏度,适用于测定乳与乳制品中L-羟脯氨酸的含量。

柱前衍生化-HPLC法测定市售3种胶类药材中L-羟脯氨酸和胶原蛋白的含量

目的:建立测定胶类药材中L-羟脯氨酸(L-Hyp)和胶原蛋白含量的方法,并比较对照药材与市售药材中两种成分的含量。方法:采用柱前衍生化法进行前处理,并采用高效液相色谱法测定样品中L-Hyp的含量:色谱柱为Kromasil C18,流动相为[乙腈-0.1 mol/L醋酸钠缓冲液(p H 6.5,7∶93,V/V)]-[乙腈-水(4∶1,V/V)](梯度洗脱),流速为1.0 m L/min,检测波长为254 nm,柱温为43℃,进样量为20μL;再通过折算系数计算样品中胶原蛋白的含量。结果:L-Hyp检测质量浓度线性范围为2.5~40μg/m L(r=0.999 9);定量限为0.20μg/m L,检测限为0.05μg/m L;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<4.0%;加样回收率为96.03%~102.07%(RSD=2.20%,n=9)。28批市售药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量有一定差异,其中13批市售阿胶药材与阿胶对照药材中两种成分的含量较为接近,而5批龟甲胶和7批鹿角胶药材中两种成分的含量高于其对照药材。结论:该方法准确、可靠,适用于测定胶类药材中L-Hyp和胶原蛋白的含量。