表没食子儿茶素没食子酸酯与L-茶氨酸对乙醇脱氢酶和乙醛脱氢酶活性的体外协同作用

目的探究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)与L-茶氨酸对乙醇脱氢酶(alcohol dehydrogenase,ADH)和乙醛脱氢酶(acetaldehyde dehydrogenase,ALDH)活性的体外协同作用。方法设置不同浓度及组分,以0μg/mL实验组为对照,先后进行单因素实验和最优组合验证实验,通过对ADH、ALDH活性的检测,确认EGCG、L-茶氨酸不同剂量的解酒效果并探究其最佳配比。结果单因素实验中,样品质量浓度为200、300μg/mL实验组相较于0μg/mL浓度组,随着EGCG和L-茶氨酸的添加,ADH和ALDH活性显著高于空白组(P<0.05);最优组合验证实验中,11组不同配比组合物对ADH和ALDH活性均具有促进作用,且协同组比单因素组激活效果要更好。其中,当配比组合物为7:3时,ADH、ALDH的活性最高。结论EGCG、L-茶氨酸解酒组合物最佳配比为7:3时ADH与ALDH活性最高,研究结果为EGCG、L-茶氨酸组合物用于抗醉酒药物研发提供科学依据。

气相色谱/串联三重四级杆质谱法测定绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸的含量

建立了绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸的气相色谱-串联三重四级杆质谱(gas chromatography-tabdem triple quadrupole mass spectrometry,GC-MS/MS)同时测定分析方法。茶叶样品经85℃热水浸泡后,用乙腈提取,采用QuEchERs法净化,HP-5MS色谱柱分离,三重四级杆质谱多反应监测(multiple reaction monitoring,MRM)模式有效降低茶叶基质的背景干扰,GC-MS/MS分析检测。该检测方法的检出限为0.001~0.003 mg/kg,方法验证试验结果表明,该类化合物的平均回收率为73%~104%,相对标准偏差为3.0%~10.5%。通过对市售茶叶样品的检测,进一步验证该方法重现性好,准确度高,操作简单,适用于绿茶中L-茶氨酸、咖啡因、茶多酚和十六烷酸的检测。

酶法拆分DL-茶氨酸及其分离纯化

将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用本实验室筛选的有较高氨基酰化酶活性的真菌刺孢小克银汉霉9980(Cunnighamella echinulata 9980)对DL-茶氨酸进行拆分并对拆分条件进行摸索。结果表明:反应最适温度50℃,最适pH7.0,底物浓度0.5mol/L,湿菌体量4g/100ml,拆分时间30h,拆分率可达92%。产物经JK008阳离子交换树脂氨性柱分离,L-茶氨酸收率84.3%,[α]2D5=8.1(c=2,H2O),符合JP2000药典。

固定化米曲霉氨基酰化酶拆分DL-茶氨酸

研究固定化米曲霉Aspergillus oryzae AS3.381氨基酰化酶细胞拆分DL-茶氨酸制备L-茶氨酸的最佳工艺条件。将DL-茶氨酸乙酰化为N-乙酰-DL-茶氨酸,利用固定化米曲霉细胞立体专一性去乙酰化,可以获得L-茶氨酸,并分析固定化条件对比酶活的影响。结果显示:最适固定化条件为戊二醛浓度0.5%、交联时间2 h、温度55°C、pH8.0、底物0.2 mol/L、菌液比12 g菌体/100 mL戊二醛溶液,此时拆分率可达98%以上。菌体重复操作7批次,固定化细胞仍保留最高酶活的75%。与直接利用游离菌体转化相比,本法具有反应温度高、酶活高且稳定、能反复利用、酶活损失少等优点。

L-茶氨酸改善肝损伤功效及其作用机制研究进展

L-茶氨酸作为茶叶中特有的非蛋白氨基酸,因其健康功效而被广泛研究。L-茶氨酸具有改善肝损伤的良好效果。本文通过综述近年L-茶氨酸改善肝损伤的途径研究进展,梳理其干预肝损伤的作用机理,主要涉及减少机体氧化应激损伤、下调机体炎症因子表达及调节细胞信号通路等,进而为肝损伤的治疗和干预提供系统理论基础和实践依据。

L-茶氨酸延缓应激条件下秀丽隐杆线虫的衰老

以秀丽隐杆线虫为实验对象,研究L-茶氨酸对线虫的移动力、热应激下的寿命和修复后相对荧光强度、H202诱导的氧化应激下的寿命和脂褐素水平、以及抗氧化酶活力的影响,以探究L-茶氨酸对于应激导致秀丽隐杆线虫组织损伤和衰老的作用。结果表明,L-茶氨酸可以有效延长热应激后的平均寿命以及降低它的相对荧光强度,延长线虫在氧化应激下的最大寿命和降低线虫的脂褐素水平,同时能显著地提高SOD、GSH-Px、CAT活性等。说明L-茶氨酸对应激导致线虫组织损伤有保护作用,其作用主要体现在应激条件下的寿命延长、抗氧化酶活力的提高以及降低氧化损伤。

L-茶氨酸新型酶法制备及其催化工艺优化(英文)

L-茶氨酸是茶叶中游离氨基酸的主要组成部分,关于其良好的生理活性已有广泛报道。首次报道了来源于Cunnighamell aechinulata9980的L-氨基酰化酶用于高光学纯度的L-茶氨酸的酶法制备。该酶在pH6.5,底物N-乙酰-DL-茶氨酸浓度为50mmol/L,且有40mmol/LCoCl2时催化效果较好。结果表明,在上述条件下,50℃作用12h得L-茶氨酸22.5mmol/L,转化率90%。

L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能和免疫功能的影响

本试验旨在探讨L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能和免疫功能的影响。选用1日龄黄羽肉鸡690只,随机分为6个处理,每个处理5个重复,每个重复23只。6个处理分别为对照组(饲喂无抗生素基础饲粮)、抗生素组[饲喂在基础饲粮中添加10%硫酸黏杆菌素的饲粮,前期(1～3周)添加200 mg/kg,后期(4～7周)添加150 mg/kg]、4个不同梯度(100、200、400和800mg/kg)L-茶氨酸试验组,试验期为49 d。试验检测了黄羽肉鸡的生产性能、免疫器官指数、肠道分泌性免疫球蛋白A(sIgA)含量及血清溶菌酶活性、抗体水平和免疫细胞因子含量等指标。结果表明:在试验前期,100 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡的体增重显著低于其他各组(P<0.05),100、200和800 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡的法氏囊指数显著低于对照组(P<0.05),各L-茶氨酸组黄羽肉鸡的肠道sIgA含量和血清干扰素-γ(IFN-γ)含量显著高于对照组(P<0.05)。在试验后期,与对照组及抗生素组比较,L-茶氨酸对黄羽肉鸡生产性能、免疫器官指数、肠道sIgA的含量影响不显著(P>0.05);100、200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清白细胞介素-2(IL-2)的含量显著高于对照组(P<0.05),200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清IFN-γ的含量显著高于对照组(P<0.05)。在整个试验期,各组黄羽肉鸡血清溶菌酶的活性和白细胞介素-4的含量差异不显著(P>0.05);一免后第6天,100和200 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡血清新城疫抗体滴度显著低于对照组和抗生素组(P<0.05),一免后第14天,100、200和400 mg/kg L-茶氨酸组黄羽肉鸡抗牛血清白蛋白(BSA)抗体水平显著高于对照组(P<0.05),其他各阶段各组间的抗BSA抗体水平和新城疫抗体滴度均差异不显著(P>0.05)。由此可知,饲粮添加L-茶氨酸对黄羽肉鸡生长后期生产性能、免疫器官指数均无显著影响,说明其对黄羽肉鸡后期生长是安全的;同时L-茶氨酸可提高黄羽肉鸡生长前期肠道sIgA的含量、后期血清IL-2的含量及全期血清IFN-γ的含量,从而增强其机体免疫功能。

生物转化法应用重组谷氨酰转肽酶合成L-茶氨酸

构建了一个高效表达大肠杆菌来源的GGT重组质粒pET28a-GGT并转化E.coliBL21(DE3),工程菌株经0.2mmol/LIPTG,20℃诱导表达8h,粗酶液的酶活达到1.5U/mL,大约是出发菌株E.coliK-12的26倍。工程菌粗酶液以267mmol/LL-谷氨酰胺和2.0mol/L乙胺作底物,37℃、pH10.0条件下反应4h,L-茶氨酸的生成量达到26.9g/L,L-谷氨酰胺的转化率为57.8%。

茶叶中L-茶氨酸HPLC-PDAD分析方法的建立

以0．05％三氟乙酸和50％乙腈为流动相，应用HPLC—PDAD建立了茶叶中未衍生化L-茶氨酸的分析方法。结果表明，L-茶氨酸的紫外吸收波长范围在190～240nm之间，且在199nm具有最大吸收峰。在0．02—1．00mg·mL^-1范围内，L-茶氨酸峰面积与浓度之间有良好的线性关系，回归方程为：Y=5．8343×10^6X＋1．8201×10^5（r^2=0．9991）。6大茶类各样品L-茶氨酸含量（RSD）在0．24％-1．74％之间，平均加标回收率为99．21％-101．28％。

米曲霉氨基酰化酶拆分DL-茶氨酸

DL 茶氨酸经乙酰化可生成N 乙酰DL 茶氨酸, 然后利用米曲霉氨基酰化酶拆分N 乙酰DL 茶氨酸可以获得L 茶氨酸。本文对氨基酰化酶酶促反应也进行了初步研究, 考察了反应温度、反应时间、pH值和底物浓度等因素对酶促反应的影响。实验表明, 转化温度40℃、转化时间30 h、pH为7 0和底物浓度0 2 mol/L时, 目的产物L 茶氨酸的产率最高。

中试规模制备L-茶氨酸及其衍生物

报道了中试规模制备L-茶氨酸和L-谷氨酰胺的一种方法。以廉价的L-谷氨酸为原料,采用邻苯二甲酰基作为保护基,保护L-谷氨酸的α-氨基,醋酐回流10 m in使其分子内脱水生成N-邻苯二甲酰-L-谷氨酸酐,在常温、常压条件下,分别与2 mol/L氨水和2 mol/L乙胺水溶液反应生成中间产物N-邻苯二甲酰-L-谷氨酰胺、N-邻苯二甲酰-L-茶氨酸,中间产物在室温条件下与0.5 mol/L水合肼反应48 h脱除保护基,分别以57%、61%的收率得到L-谷氨酰胺和L-茶氨酸。

L-茶氨酸改善热应激引起的小鼠组织损伤和氧化逆境

以SPF级Slca/KM雄性小鼠作为实验对象,在恒温恒湿模拟气候箱进行热处理,灌喂干预不同剂量L-茶氨酸,考察L-茶氨酸对小鼠采食量、体重变化、空肠切片病理情况、器官指数、血清谷丙转氨酶(ALT)与谷草转氨酶(AST)活性、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和干扰素-γ(IFN-γ)含量、肝组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活性以及肝组织病理学变化的影响,以探讨L-茶氨酸改善热处理引起的小鼠组织损伤和氧化逆境作用。结果表明,L-茶氨酸能在一定程度上促进热处理小鼠采食量和体重的增加,降低肝脏和脾脏器官指数,降低血清ALT、AST酶活性,抑制血清炎症介质TNF-α、IL-6、IFN-γ的含量,降低肝组织MDA含量,提高SOD、GSH-Px、CAT酶活性,减轻热处理对空肠及肝脏组织的损伤,且以L-茶氨酸中剂量处理效果较好。说明L-茶氨酸具有改善热处理引起的小鼠组织损伤和氧化逆境的作用,主要表现为提高小鼠营养物质吸收能力、减少炎性细胞因子表达,以及降低氧化损伤。

L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌引起的免疫应激小鼠肝脏的保护作用研究

以SPF级Balb/c雌性小鼠为实验动物,对其适应性饲养3 d后连续30 d灌喂不同剂量L-茶氨酸,然后腹腔注射产肠毒性大肠杆菌E44813诱导免疫应激,5 h后取样,分析研究了各组小鼠肝脏与脾脏系数,血清谷丙转氨酶(Alanine aminotranferease,ALT)与谷草转氨酶(Aspartate aminotransferase,AST)含量,肝组织匀浆丙二醛(Malondialdehyde,MDA)水平与谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSH-PX)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)活性,肝组织病理学变化,以及血清中γ-干扰素(γ-Interferon,IFN-γ)、白细胞介素-4(Interleukin-4,IL-4)的表达量,以探明L-茶氨酸对产肠毒性大肠杆菌免疫应激小鼠肝脏的保护作用。结果表明,不同剂量的茶氨酸干预处理均能明显降低由大肠杆菌E44813感染引起的肝脏、脾脏系数的升高,降低血清ALT、AST及肝组织匀浆MDA水平,提高肝组织匀浆SOD、CAT、GSH-PX活性,减少IFN-γ、IL-4表达量,改善肝脏组织病理损伤,其中以300 mg·kg-1剂量组效果最好,说明茶氨酸干预对产肠毒性大肠杆菌诱导的免疫应激小鼠肝损伤具有保护作用,而且可能是通过减少IFN-γ与IL-4的表达、降低炎症反应、提高抗氧化能力等途径达到保护肝脏的作用。

L-茶氨酸对大鼠内脏组织抗氧化能力及相关基因表达的影响

目的:通过对大鼠灌胃L-茶氨酸溶液,观察大鼠心脏、肝脏、脾脏和肾脏中抗氧化指标的变化,探究L-茶氨酸对大鼠心、肝、脾和肾抗氧化能力及其相关酶mRNA表达量的影响。方法:64只SD大鼠随机分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组4组(每组16只,雌雄各半),分别灌胃0、50、200、400 mg/(kg·d)L-茶氨酸。连续灌胃14 d后采集内脏组织,采用试剂盒检测样品中丙二醛(malondialdehyde,MDA)与一氧化氮(nitric oxide,NO)的含量,以及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GPX)、过氧化氢酶(catalase,CAT)和一氧化氮合成酶(nitric oxide synthase,NOS)的活性,并采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-q PCR)法测定相应抗氧化酶的mRNA表达量。结果:L-茶氨酸灌胃影响大鼠心脏组织的NO含量,以及SOD、CAT与NOS活力,其中高剂量组大鼠心脏组织中NO含量最低,SOD与CAT活力最大;同时影响大鼠肾脏中NO的含量,高剂量组最低;但对除上述指标外的肝、脾、肾、心的MDA与NO含量,以及SOD、CAT、GPX与NOS活力无显著影响。低剂量L-茶氨酸灌胃显著抑制肝脏中SOD1 mRNA的表达和脾脏中SOD1、SOD3、GPX1 mRNA的表达;高剂量L-茶氨酸则上调脾脏SOD2 mRNA的表达;同时各剂量组心脏组织中的SOD1、SOD2、SOD3、GPX1 mRNA的表达量都显著增加。结论:L-茶氨酸灌胃增强了心脏的抗氧化能力,其机制可能是通过上调了大鼠心脏中SOD2基因的mRNA的表达,从而增加心脏中SOD的活性,起到抗氧化的保护作用。同时,L-茶氨酸灌胃对大鼠内脏抗氧化功能的影响存在性别差异。

L-茶氨酸对氧化应激断奶仔猪生长性能及血液生化指标的影响

本研究探讨了L-茶氨酸对氧化应激断奶仔猪生长性能、抗氧化能力及免疫功能的影响。试验采用2×2二因素设计,160头断奶仔猪(7.53kg±0.51kg)随机分为4个处理组:1组(日粮中不添加L-茶氨酸,腹腔注射5mL生理盐水);2组(日粮中不添加L-茶氨酸,腹腔注射8 mg/kg体重敌快死);3组(日粮中添加1 000mg/kg L-茶氨酸,腹腔注射5mL生理盐水);4组(日粮中添加1 000mg/kg L-茶氨酸,腹腔注射8mg/kg体重敌快死)。预试期7d,正试期28d。结果显示:(1)与1组相比,2组仔猪平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)显著降低,而料重比显著升高(P<0.05);与2组相比,4组仔猪ADG显著增加(P<0.05)。(2)与1组相比,2组仔猪血清丙二醛(MDA)含量显著增加,而总抗氧化能力(T-AOC)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性显著下降(P<0.05),3组仔猪血清MDA显著降低,而T-AOC显著增加(P<0.05);与2组相比,4组仔猪血清MDA含量显著降低,而T-AOC和GSH-Px活性显著上升(P<0.05)。(3)与1组相比,2组仔猪血清IgA、IgG、IL-2、IL-4水平显著增加,C3和C4水平显著下降(P<0.05),3组仔猪血清IgA、IgG和IL-4水平显著降低,而C3和C4水平显著增加(P<0.05);与2组相比,4组仔猪血清IgA、IgG、IL-2、IL-4水平显著降低,而血清C3水平显著增加(P<0.05)。结果表明,注射敌快死可引发仔猪氧化应激,造成生长性能下降、体液免疫能力下降;日粮中添加1 000mg/kg L-茶氨酸可缓解仔猪氧化损伤,提高氧化应激仔猪的生长性能、抗氧化能力和体液免疫能力。

茶多酚和L-茶氨酸对热应激下蛋用仔公鸡生长性能及抗氧化能力的影响

本试验采用单因子试验设计研究茶多酚与L-茶氨酸在热应激下对蛋用仔公鸡生长性能及抗氧化能力的影响。选用1日龄蛋用仔公鸡180只，随机分为6组，每组3个重复，每个重复10只鸡。试验1组为对照组，饲喂基础日粮；试验2-6组分别在基础日粮中添加400 mg/kg茶多酚、200 mg/kg L-茶氨酸、200 mg/kg茶多酚＋200 mg/kg L-茶氨酸、400 mg/kg茶多酚＋200 mg/kg L-茶氨酸、600 mg/kg茶多酚＋200 mg/kg L-茶氨酸，试验期28 d。结果表明，茶多酚可有效降低热应激下蛋用仔公鸡的料重比（P〈0.05），L-茶氨酸单独添加或与茶多酚同时添加对生长性能影响均不显著（P〉0.05）；茶多酚可显著降低各组织器官的丙二醛（MDA）含量 （P〈0.05），显著提高各组织器官的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）与过氧化氢酶（CAT）活性（P〈0.05）；L-茶氨酸能显著提高各组织器官的CAT活性（P〈0.05），不同程度降低各组织器官的MDA含量；茶多酚与L-茶氨酸同时添加时，抗氧化能力与茶多酚的添加量不呈正比；400 mg/kg茶多酚＋200 mg/kg L-茶氨酸组肝脏样总超氧化物歧化酶（T-SOD）与GSH-Px活性均显著降低（P〈0.05），MDA含量显著提高（P〈0.05）。在热应激条件下，200 mg/kg茶多酚＋200 mg/kg L-茶氨酸同时添加时，抗氧化效果较理想。

L-茶氨酸抗氧化作用的研究进展

L-茶氨酸是茶叶中特有的一种非蛋白氨基酸,是茶叶的主要功能成分,具有抗氧化、增强机体免疫、松弛神经紧张等生理活性作用,有益于机体健康。目前L-茶氨酸生理功效的评价也已成为现代医学和食品科学的研究热点,但其作用机制仍然有待于进一步的深入研究。2014年L-茶氨酸已被新增为新型食品原料,但在国内市场上尚罕见以L-茶氨酸为主要原料的产品,其在新药、保健食品等方面的开发和利用更是远远不够。综述了L-茶氨酸对机体的抗氧化调节作用及其下调炎症因子、调控线粒体凋亡通路和mitogen-activated protein kinase(MAPK)信号通路、减少促凋亡信号引起的细胞凋亡和氧化应激损伤等机理的研究进展,旨在为L-茶氨酸在相关领域的进一步研究和L-茶氨酸作为功能产品的进一步开发利用提供参考。

酶催化合成L-茶氨酸的研究进展

L-茶氨酸是茶叶中的特征氨基酸,具有改善食品风味、放松减压、增强抗肿瘤药物疗效等多种功能。本文介绍了L-茶氨酸的生理功能及其在食品、保健品和医药领域中的应用,并重点对L-茶氨酸的酶法合成进行了综述,在此基础上探讨了工业化生产L-茶氨酸的未来可能的研究方向,以期为利用酶法实现L-茶氨酸的工业化生产提供参考依据。

离子交换法提取酶促转化液中的L-茶氨酸

用717阴离子交换树脂提取酶促转化液中的L-茶氨酸,用静态和动态的方法考察了不同操作条件对固定床离子交换效果的影响。静态吸附实验表明,717阴离子交换树脂对酶促转化液中L-茶氨酸的最佳吸附条件为pH8.5,平衡吸附时间16min,吸附量为0.083mmol/g。L-茶氨酸转化液上样的最佳流速为0.5BV/h。按照以上条件,转化液稀释3倍上样,经0.5mol/L盐酸洗脱,旋转蒸发仪浓缩,醇沉结晶后,可得L-茶氨酸纯品。