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重组L-门冬酰胺酶Ⅱ的提取纯化工艺
被引量:
13
1
作者
吴敬
赖龙生
+1 位作者
刘景晶
吴梧桐
《中国医药工业杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第2期50-53,共4页
采用渗透振扰破壁法、硫酸铵分级沉淀、乙醇分级沉淀、DEAE-纤维素层析等步骤提取和纯化重组L-门冬酰胺酶,并优化了提纯过程的条件,提取总回收率高于50%,产品纯度经高效毛细管电泳检测为单一峰,具有工业生产前景。
关键词
l-门冬酰胺酶ⅱ
分离
纯化
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职称材料
大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究
2
作者
林洁
黄永城
+2 位作者
王学军
吴洁
刘景晶
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2006年第3期159-165,共7页
为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主...
为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E.coliBL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2C,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符。ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2C强。证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶。最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性。
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关键词
l-门冬酰胺酶ⅱ
嵌合
酶
表面呈现
外源多肽
抗原表位
表位扫描
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职称材料
ASP-ChIFN-α融合基因的构建及表达
3
作者
李丽
周学章
+1 位作者
李敏
王玉炯
《宁夏大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2008年第2期157-160,共4页
利用PCR技术从宁夏地方三黄肉鸡肝组织中扩增出α干扰素基因,构建成原核重组表达质粒pET-28a/ChIFN-α.从埃希氏菌属大肠杆菌(Escherichia coli)中扩增出L-天(门)冬酰胺酶Ⅱ(L-Asparaginase,ASP)信号肽基因,并与原核重组质粒pET-28a/ChI...
利用PCR技术从宁夏地方三黄肉鸡肝组织中扩增出α干扰素基因,构建成原核重组表达质粒pET-28a/ChIFN-α.从埃希氏菌属大肠杆菌(Escherichia coli)中扩增出L-天(门)冬酰胺酶Ⅱ(L-Asparaginase,ASP)信号肽基因,并与原核重组质粒pET-28a/ChIFN-α连接,构建成分泌型表达重组质粒pET-28a/ASP-ChIFN-α.将重组质粒经IPTG诱导5 h,用SDS-PAGE分析表达蛋白含量,并用鸡α-干扰素ELISA(Western-blot)试剂盒检测表达的重组蛋白的特异性.结果表明,包涵体型重组质粒pET-28a/ChIFN-α和分泌型重组质粒pET-28a/ASP-ChIFN-α在23 kD处均表达出目的蛋白,蛋白含量分别为27%和38%,pET-28a/ASP-ChIFN-α的蛋白表达含量比pET-28a/ChIFN-α的蛋白表达含量要高出11%,表达的重组蛋白具有特异性.实验实现了鸡α-干扰素成熟蛋白基因的高效表达,筛选出了可应用于临床的鸡α-干扰素高效表达菌株BL21(DE3)(pET-28a/ASP-ChIFN-α).
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关键词
鸡α-干扰素基因
l-
天(
门
)
冬
酰胺
酶
ⅱ
信号肽
克隆
表达
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职称材料
题名
重组L-门冬酰胺酶Ⅱ的提取纯化工艺
被引量:
13
1
作者
吴敬
赖龙生
刘景晶
吴梧桐
机构
中国药科大学生化教研室
出处
《中国医药工业杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2000年第2期50-53,共4页
基金
国家"九五"科技攻关项目! (编号 96 90 2 0 1)
文摘
采用渗透振扰破壁法、硫酸铵分级沉淀、乙醇分级沉淀、DEAE-纤维素层析等步骤提取和纯化重组L-门冬酰胺酶,并优化了提纯过程的条件,提取总回收率高于50%,产品纯度经高效毛细管电泳检测为单一峰,具有工业生产前景。
关键词
l-门冬酰胺酶ⅱ
分离
纯化
Keywords
L asparaginase
ⅱ
separation
purification
分类号
R979.1 [医药卫生—药品]
Q556.403 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究
2
作者
林洁
黄永城
王学军
吴洁
刘景晶
机构
中国药科大学生命科学与技术学院
出处
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2006年第3期159-165,共7页
基金
国家自然科学基金项目(No.30270298)
文摘
为了研究大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ(L-asparaginaseⅡ,AnsB)能否作为多肽呈现载体。选取乙肝病毒表面抗原(HBSAg)preS2结构域的核心抗原表位区作为模型多肽,构建了两种表达载体pET28a-AnsB-preS2L和pET28a-AnsB-preS2C,分别转化至表达宿主菌E.coliBL-21,LB培养基(Kanr)培养,乳糖诱导高效表达,通过渗透休克,DEAE 52-cellulose柱层析纯化获得了在AnsB C端融合有线状和环状模型多肽的嵌合酶AnsB-preS2L和AnsB-preS2C,两种嵌合酶分别保留了AnsB 81%、25%的催化活力,两者的pH稳定性均与AnsB相符。ELISA检测结果显示AnsB-preS2L与抗preS2抗体的结合能力较AnsB-preS2C强。证明AnsB确实能够作为一种表面呈现载体将线性外源多肽以融合表达的方式呈现在酶分子的表面,最终形成一种在每个亚基表面呈现有多肽的嵌合酶。最后,用富含带电序列的8肽(KRKRKKSR)替换核心抗原表位区作为模型多肽,进一步验证了AnsB作为多肽呈现载体的可行性和通用性。
关键词
l-门冬酰胺酶ⅱ
嵌合
酶
表面呈现
外源多肽
抗原表位
表位扫描
Keywords
l-
asparaginase,Chimeric enzyme, Surface display, Foreign peptide, Antigen epitope, Epitope mapping
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
ASP-ChIFN-α融合基因的构建及表达
3
作者
李丽
周学章
李敏
王玉炯
机构
宁夏大学西部特色生物资源保护与利用教育部重点实验室
出处
《宁夏大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2008年第2期157-160,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30560110)
文摘
利用PCR技术从宁夏地方三黄肉鸡肝组织中扩增出α干扰素基因,构建成原核重组表达质粒pET-28a/ChIFN-α.从埃希氏菌属大肠杆菌(Escherichia coli)中扩增出L-天(门)冬酰胺酶Ⅱ(L-Asparaginase,ASP)信号肽基因,并与原核重组质粒pET-28a/ChIFN-α连接,构建成分泌型表达重组质粒pET-28a/ASP-ChIFN-α.将重组质粒经IPTG诱导5 h,用SDS-PAGE分析表达蛋白含量,并用鸡α-干扰素ELISA(Western-blot)试剂盒检测表达的重组蛋白的特异性.结果表明,包涵体型重组质粒pET-28a/ChIFN-α和分泌型重组质粒pET-28a/ASP-ChIFN-α在23 kD处均表达出目的蛋白,蛋白含量分别为27%和38%,pET-28a/ASP-ChIFN-α的蛋白表达含量比pET-28a/ChIFN-α的蛋白表达含量要高出11%,表达的重组蛋白具有特异性.实验实现了鸡α-干扰素成熟蛋白基因的高效表达,筛选出了可应用于临床的鸡α-干扰素高效表达菌株BL21(DE3)(pET-28a/ASP-ChIFN-α).
关键词
鸡α-干扰素基因
l-
天(
门
)
冬
酰胺
酶
ⅱ
信号肽
克隆
表达
Keywords
chicken's interferon-α gene,
l-
asparaginase
ⅱ
signal peptide; cloning, expression
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组L-门冬酰胺酶Ⅱ的提取纯化工艺
吴敬
赖龙生
刘景晶
吴梧桐
《中国医药工业杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2000
13
下载PDF
职称材料
2
大肠杆菌L-门冬酰胺酶Ⅱ作为多肽呈现载体的可行性研究
林洁
黄永城
王学军
吴洁
刘景晶
《药物生物技术》
CAS
CSCD
2006
0
下载PDF
职称材料
3
ASP-ChIFN-α融合基因的构建及表达
李丽
周学章
李敏
王玉炯
《宁夏大学学报(自然科学版)》
CAS
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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