化学-酶法制备L-高苯丙氨酸

以苯丙酸乙酯为原料，通过正交设计优化2-氧4-苯基丁酸盐的制备条件：苯丙酸乙酯与草酸二乙酯摩尔比为1：3，缩合反应时间为2．5h，H2SO4质量分数为20％，水解反应时间为15h，优化条件下2-氧-4-苯基丁酸盐的产率为68．24％。随后，利用E．coli A5所产的天冬氨酸转氨酶为生物催化剂制备L-高笨丙氨酸。酶转化反应的最适条件为：游离细胞体系pH、温度、底物质量浓度和细胞质量浓度分别为8．5、37℃、20g/L和30g／L；而固定化细胞体系则分别为7．0—9．0、40℃、10g／L和30g/L。采用廉价的L-谷氨酸（L—Glu）作为氨基供体，添加表面活性剂有利于提高L-HPA产率。通过研究固定化细胞转化反应进程，结果发现8h内90％的底物可转化为L—HPA。

酪氨酸转氨酶法制备L-高苯丙氨酸

目的为抗高血压新药的共同中间体L-高苯丙氨酸的制备奠定基础。方法构建工程菌E.coli BL21(DE3)pET 30a-tyrB,乳糖诱导表达酪氨酸转氨酶;利用酪氨酸转氨酶对底物2-氧-4-苯基丁酸进行转化;利用HPLC、MS、1H-NMR进行产物检测与结构鉴定。结果构建了工程菌E.coliBL21(DE3)pET 30a-tyrB,乳糖诱导酪氨酸转氨酶表达,制备得到L-高苯丙氨酸。结论利用转氨酶催化法可以高效制备L-高苯丙氨酸。

酶法生产L-高苯丙氨酸的研究进展

L-高苯丙氨酸(L-homophenylalanine,L-HPA)作为一种重要的非天然氨基酸,是合成治疗高血压的普利类药物等的关键中间体,具有广阔的市场前景。目前L-高苯丙氨酸的合成主要依赖于化学法,但化学合成L-高苯丙氨酸具有原料昂贵、步骤繁琐和污染严重等缺点,限制了广泛应用。因此,国内外研究者对L-高苯丙氨酸的酶法生产进行了深入的研究。本文就目前酶法合成L-高苯丙氨酸的工艺,包括脱氢酶法、转氨酶法、海因酶法和脱羧酶法的研究进展进行了综述,为酶法合成L-高苯丙氨酸提供一定的借鉴,为最终实现L-高苯丙氨酸的酶法工业化生产奠定基础。

多酶组合催化制备L-高苯丙氨酸

【目的】L-高苯丙氨酸(L-HPA)是许多医药化学品的重要中间体,化学合成法生产L-HPA反应复杂、环境污染严重,本研究旨在开发高效环保的L-HPA酶法合成路线。【方法】采用模块化组装的方法,构建了一条以甘氨酸和苯乙醛为底物高产L-HPA的新途径。【结果】首先,根据文献挖掘设计了一条由苏氨酸醛缩酶(TA)、苏氨酸脱氨酶(TD)、苯丙氨酸脱氢酶(PheDH)和甲酸脱氢酶(FDH)组成的多酶组合催化途径,用于L-HPA的合成。其次,根据氨基基团的引入和重构,将L-HPA多酶组合催化途径分为基础单元和扩增单元,基础单元包括TA和TD,扩增单元包括PheDH和FDH。然后,利用不同表达水平的质粒,对基础单元和扩增单元进行蛋白表达的组合调节,获得最优工程菌BL21-C-M1-R-M2,使L-HPA产量达到208.6 mg/L。最后,我们对全细胞转化体系进行优化,使L-HPA产量进一步提高到1226.6 mg/L,苯乙醛摩尔转化率为34.2%。【结论】该工艺路线绿色高效,为未来大规模生产L-HPA奠定基础。

从三甲基硅重氮甲烷合成几种L-β-高苯丙氨酸

报道了以苯环 2 -位分别为甲基、氯、氟取代的 N - Fmoc- L -α-苯丙氨酸为原料 ,以三甲基硅重氮甲烷替代重氮甲烷 ,通过 Arndt- Eistert反应合成相应有光学活性的高一级的 N - Fmoc- L -β-高苯丙氨酸的新方法。