L-鸟氨酸脱羧酶抑制剂筛选模型的建立

目的基于酶促反应法,利用HPLC测定腐胺含量,评价待筛选药物对PC-3M细胞中L-鸟氨酸脱羧酶(L-ODC)活性的影响,建立鸟氨酸脱羧酶抑制剂的筛选模型。方法将与药物反应后的细胞处理样本,以TSKge lODS-80TM凝胶色谱柱(150 mm×4.6 mm,5μm)为分析柱,在甲醇-水(8∶2)保持3 min,从4 min到14 min,甲醇比率由80%梯度增至100%梯度洗脱,流速为0.8 ml/min,激发波长为340 nm,发射波长为515 nm,柱温为50℃,进样量10μl。按内标法定量。结果 ODC特异性抑制剂二氟甲基鸟氨酸(DFMO)对ODC活性的抑制率为(59.3±5.4)%,雷帕霉素对ODC活性的抑制率为(29.8±6.4)%,姜黄素对ODC活性的抑制率为(26.1±6.6)%。结论本模型通过测定药物对ODC细胞内鸟氨酸脱羧酶的作用,利用HPLC分离法测定在药物抑制影响下的鸟氨酸脱羧酶的活性,这一模型有望成为筛选ODC抑制剂的快速方便准确的检测方法。

DPS数据处理系统在L-鸟氨酸发酵培养基优化中的应用

利用正交设计与均匀设计试验方法,并采用DPS软件对实验结果进行分析,得出石蜡节杆菌WZFF.X-146菌株生产L-鸟氨酸的最适批式摇瓶发酵培养基配方。结果表明,DPS软件在L-鸟氨酸发酵培养基优化方面取得良好的效果,产酸水平达到19.91g/L,提高了125%以上。

L-鸟氨酸发酵培养基的中心复合法优化

考察不同碳氮源对Corynebacterium glutamicum1006发酵产L-鸟氨酸的影响,并借助于statistica6.0数学分析软件,采用Plackett-Burman试验设计及中心复合试验设计分析法,对L-鸟氨酸产生菌1006进行了发酵培养基的优化研究。优化后的发酵培养基使1006菌株的L-鸟氨酸产率提高了44.03%。

L-鸟氨酸的生物功能及生产研究

L-鸟氨酸是人体代谢中必不可少的中间代谢产物,一种非蛋白质氨基酸。鸟氨酸多功能的保健作用使其愈来愈广泛的应用到食品工业和医药工业中。发酵法生产L-鸟氨酸是国内外研究的方向。介绍了L-鸟氨酸的生物功能及发酵法生产L-鸟氨酸的过程及研究状况,包括产L-鸟氨酸的菌种,发酵条件的摸索及优化和国外L-鸟氨酸的工业化生产情况。

L-鸟氨酸的制备及应用

L-鸟氨酸是一种游离的多功能氨基酸,应用前景十分广阔。综述了L-鸟氨酸的制备方法、生理功能和在医疗保健及化工等领域的开发应用,并对未来L-鸟氨酸的研究方向提出了建议。

柱前衍生化HPLC法测定发酵液中L-瓜氨酸和L-鸟氨酸含量

建立一种应用异硫氰酸苯酯将，L-瓜氨酸和L-鸟氨酸柱前衍生后进行定量分析的高效液相色谱法．实验结果表明，瓜氨酸在0．2～2．0mg／mL范围内线性回归显著（R^2=0．9998），平均回收率99．87％；鸟氨酸在0．2-2．0mg／mL范围内线性回归显著（R^2=0．9997），平均回收率100．92％．应用该方法对发酵液中L-瓜氨酸和L-鸟氨酸含量进行测定取得了满意的结果，能有效指导谷氨酸棒杆菌L-瓜氨酸的发酵生产．

钴60与紫外线复合诱变选育L-鸟氨酸高产菌株

目的诱变选育L-鸟氨酸高产菌株。方法以谷氨酸棒杆菌S9114为出发菌株,经60Coγ射线和紫外线复合诱变处理,选育出L-鸟氨酸的高产菌株,研究其最佳发酵条件。结果选育出一株L-鸟氨酸的高产菌株HG106-25,遗传标记为精氨酸营养缺陷型+磺胺胍抗性(Arg-+SGr)。结论突变株HG106-25在优化发酵条件后,摇瓶发酵4~5 d,L-鸟氨酸平均产量为14.7 g.L-1,达较高水平,可进行放大试验。

L-鸟氨酸快速定量检测方法

在参照Chinard的L-鸟氨酸测定方法的基础上,确定了一种有效、高灵敏度的L-鸟氨酸快速定量检测方法.用6 mol/L H3PO4-冰乙酸(1/3,V/V)配制浓度为25 mg/mL茚三酮混合酸溶液作为显色液,在100℃水浴锅中60 min反应后,波长510 nm下比色测定L-鸟氨酸浓度.该反应体系稳定,受其他氨基酸的影响程度很小,或者在发酵液等的实际测定体系中存在量极少而可以忽略不计,线性范围为0～0.20 μmol/mL,检测精度为0.01 μmol/mL.

胚胎注射L-精氨酸和L-鸟氨酸对肉仔鸡早期肠道发育的影响

为探讨胚胎注射L-精氨酸和L-鸟氨酸对肉仔鸡早期肠道发育的影响,试验选用200枚孵化18d的艾维因肉仔鸡活胚蛋,随机分成4个处理组,每个处理组5个重复,每个重复10枚蛋。处理组I不注射任何营养物质作为对照,处理组II、III、IV分别向羊膜腔内无菌注射L-精氨酸(0.5%)、L-鸟氨酸(0.5%)、L-精氨酸+L-鸟氨酸(0.25%+0.25%)营养液1m。L结果表明:与对照组相比,其他各处理组的肉仔鸡早期肠道黏膜形态学结构都得以改善(P<0.05或P<0.01),其改善程度在不同时间(出壳后2、72h、7d)、不同肠段(十二指肠、空肠、回肠)、不同处理之间有所不同,且L-精氨酸与L-鸟氨酸的加性效应不明显。胚胎注射都可极显著提高肠道隐窝细胞增生率(P<0.01),其中以注射L-鸟氨酸效果最好。

L-鸟氨酸的混合菌种发酵研究

谷氨酸棒杆菌可发酵葡萄糖产L-鸟氨酸。通过连续筛选与驯化筛选到了产量较高的生产菌株CG1006。以GC/MS对发酵液成分的定性分析及鸟氨酸的产量为依据,优化了培养条件,产量从最初的14.346g/L提高到40.416g/L。初步考察了酵母菌CG1006-1对发酵液成分及产量的影响。结果表明混合菌种发酵可纯化发酵液成分。

精氨酸酶转化生产D-精氨酸和L-鸟氨酸

以L-精氨酸为原料,经水杨醛催化消旋反应得到DL-精氨酸,在精氨酸酶的作用下,定向地将L-精氨酸转化为L-鸟氨酸和尿素,并经进一步分离纯化得到D-精氨酸和L-鸟氨酸盐酸盐。该文通过水杨醛对L-精氨酸进行消旋化,反应2.5 h,消旋率可达74.5%;同时,对L-精氨酸酶促反应条件进行了优化,结果表明,最佳反应条件为:37℃,pH=10,反应时间24 h,底物质量浓度40 g/L,酶质量浓度0.2 g/L,在该条件下转化率可达98.0%。经该法制备得到的产物D-精氨酸和L-鸟氨酸盐酸盐纯化后光学纯度可达99.0%。

胚胎注射L-精氨酸和L-鸟氨酸对肉仔鸡早期生长、免疫器官及血浆激素T_3、T_4的影响

为探讨胚蛋注射L-精氨酸和L-鸟氨酸对肉仔鸡早期个体生长发育的影响,试验选用200个孵化18d的艾维茵肉仔鸡活胚蛋,随机分成4个处理,每个处理5个重复,每个重复10个蛋。处理组Ⅰ不注射任何营养物质作为对照,处理组Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ分别向羊膜腔内无菌注射L-精氨酸(0.5%)、L-鸟氨酸(0.5%)、L-精氨酸+L-鸟氨酸(0.25%+0.25%)营养液1mL。试验结果表明:①与对照组相比,胚蛋注射L-精氨酸、L-鸟氨酸及L-精氨酸+L-鸟氨酸混合物的出壳重与蛋重的比值分别提高了21.52%、14.38%、22.60%,差异达到极显著水平(P<0.01)。与对照组Ⅰ和处理组Ⅱ、Ⅲ相比,处理组Ⅳ肉仔鸡出壳后第3天的体重分别提高了5.35%、6.59%、6.53%,差异极显著(P<0.01),出壳后第7天的体重分别提高了7.94%(P<0.01)、8.60%(P<0.01)、4.88%(P<0.05),处理组Ⅱ和处理组Ⅲ与对照组Ⅰ相比第3天和第7天肉仔鸡的体重均没有显著性提高(P>0.05)。②胚蛋注射L-精氨酸和L-鸟氨酸可以在一定程度上提高肉仔鸡法氏囊和脾脏的重量及指数,其中处理组Ⅳ的法氏囊重与对照组Ⅰ相比提高了27.27%,差异达到了显著水平(P<0.05),但胚蛋注射L-精氨酸和L-鸟氨酸对胸腺的影响不明显(P>0.05)。③胚蛋注射L-精氨酸和L-鸟氨酸可以影响肉仔鸡出壳后第3天、第7天血浆中T3、T4的含量,其中处理组Ⅲ的T3含量与对照组Ⅰ相比提高了26.11%,差异显著(P<0.05)。

L-鸟氨酸发酵用培养基的改进研究

利用价格低廉的废酵母制作酵母水解液替代酵母浸膏做有机氮源,加入丁二酸做调控物对产L-鸟氨酸的谷氨酸棒杆菌进行发酵培养。结果表明,使用废酵母作为有机氮源后,L-鸟氨酸的产量增加了26.4%。加入1.0%的丁二酸,L-鸟氨酸的产量提高了10.4%。

L-鸟氨酸产品开发与应用进展

L-鸟氨酸是一种非蛋白氨基酸,有很多重要的生理功能,其中最重要的作用是参与尿素循环。该文首先综述了L-鸟氨酸在医药方面的产品开发情况,然后介绍了其在功能性食品和食品添加剂方面的应用现状,最后对L-鸟氨酸其他新产品开发提出了几点建议。

L-鸟氨酸-L-门冬氨酸治疗肝硬化肝性脑病的Meta分析

目的评价L-鸟氨酸-L-门冬氨酸(LOLA)治疗肝硬化肝性脑病(HE)的疗效和安全性。方法计算机检索MEDLINE、PubMed、EMBase、The Cochrane Central Register of Controlled Trials、中国生物医学文献数据库、中国科技期刊数据库(维普)、中国期刊全文数据库和万方数字化期刊全文数据库。中文检索词为:L-鸟氨酸-L-门冬氨酸、肝硬化、肝性脑病、随机对照试验;英文检索词为:L-ornithine-L-aspartate,hepatic cirrhosis,hepaticencephalopathy,randomized controlled trial。检索LOLA治疗肝硬化HE的临床随机对照试验,采用Cochrane图书馆提供的Review Manager 3.4软件对纳入的研究进行Meta分析。结果共纳入6项研究,包括512例肝硬化HE患者。纳入研究的主要结局指标有:(1)疾病临床缓解率;(2)血氨值;(3)缩短数字连接试验A(NCT-A)反应时间;(4)药物不良反应发生情况。纳入研究的Jadad评分为3～5分,均为高质量临床随机对照研究。Meta分析结果显示:(1)LOLA组HE临床缓解率高于对照组〔RR=1.49,95%CI(1.10,2.01),P=0.010〕;亚组分析结果显示,LOLA组轻微肝性脑病(MHE)临床缓解率高于对照组〔RR=2.25,95%CI(1.33,3.82),P=0.003〕,显性肝性脑病(OHE)临床缓解率也高于对照组〔RR=1.31,95%CI(1.15,1.50),P<0.0001〕。(2)LOLA组血氨值下降程度大于对照组〔WMD=-10.22,95%CI(-13.70,-6.75),P<0.00001〕。(3)LOLA组NCT-A反应时间短于对照组〔WMD=-10.34,95%CI(-14.87,-5.80),P<0.00001〕。(4)LOLA组药物不良反应发生率(13.0%)低于对照组(10.6%)〔RR=1.22,95%CI(0.69,2.17),P=0.49〕。结论现有的临床研究证据表明,LOLA可提高肝硬化HE患者疾病临床缓解率,对MHE和OHE同样有效,可明显降低肝硬化HE患者血氨水平,缩短NCT-A反应时间,且不良反应发生率低、疗效肯定、安全性好。

L-鸟氨酸纸层析定量测定法的研究

本文建立了一种纸层析定量测定L—鸟氨酸的新方法,用苯酚:氨水:水=5:1:1为展开剂能将L—鸟氨酸从发酵液中分开;确定了采用茚三酮为显色剂,90℃～100℃显色5min,硫酸铜:乙醇洗脱液洗脱10min后比色等测定条件,并发现滤纸上L—鸟氨酸含量为5～40μg比较合适;绘制了L—鸟氨酸标准曲线,并推出发酵液中L—鸟氨酸含量的计算公式为:X=38.46×A×n/V。

定向诱变谷氨酸棒杆菌13032产L-鸟氨酸的研究

采用典型的谷氨酸棒杆菌ATCC13032为出发菌,以磺胺胍和氟化钠为双抗性筛选标记,快速定向选育鸟氨酸高产菌。经亚硝基胍-紫外线诱变,获得2株遗传稳定性较好的突变菌株ANU1及ANU4,其中ANU4产量最高达1.92 g/L,比出发菌提高了8.7倍。

纳滤在L-鸟氨酸后提取中的应用研究

研究了采用纳滤技术代替活性碳对L-鸟氨酸发酵液进行脱色的可行性.从6种有机膜中选择了截留分子量为500的纳滤膜,并考察了料液pH、温度、压力、离子强度对L-鸟氨酸膜透过性能的影响.结果表明膜透过最优条件为:料液温度t=45℃、pH=9.0、操作压力p=2.0 MPa,在此条件下渗滤透过液的透光率T430 nm=96%,L-鸟氨酸收率达到95.8%.此方法在技术上是完全可行的.

近红外光谱技术在酶法转化制备L-鸟氨酸过程中的应用

旨在建立酶法转化过程中快速准确测定产物L-鸟氨酸含量的方法,以满足该酶促反应转化率实时监测的需求。本文采集不同时间酶促反应液获取近红外透射光谱图,结合偏最小二乘法建立L-鸟氨酸含量定果通过一阶导数预处理近红外光谱的模型具有良好的精确度和稳定性,在波数10000.0～5500.0cm-1光谱范围内,采用检验集检验建立模型,最佳主因子数为4,其中检验集的决定系数R2为0.9846,检验均方差(RMSEP)为3.41,校正集决定系数R2为0.9550,校正均方差(RMSEE)为4.47。结果表明,该模型可用于L-鸟氨酸酶法制备的常规检测,为酶法转化制备L-鸟氨酸的在线控制提供了简便有效的监控方法。

L-鸟氨酸高产菌的原生质体融合育种

以谷氨酸高产菌S9114和谷氨酸棒杆菌GS538为出发菌株,应用原生质体融合技术,定向选育出一株L-鸟氨酸高产菌株RH169,该菌株能在发酵液中积累L-鸟氨酸,质量浓度可达19.3 g.L-1。