L-鼠李糖的制备及检测方法研究进展

L-鼠李糖作为一种微量糖广泛分布于植物中,是食品加工中常用的甜味剂之一,还可用于生产香精香料。研究发现,L-鼠李糖还可以诱导酵母甘露聚糖提高在动物机体中α-甘露糖苷酶的活性,显示出良好的药用价值。一方面介绍了L-鼠李糖的制备方法及应用的研究情况,另一方面根据L-鼠李糖的化学性质及测定原理,结合近年来L-鼠李糖含量检测研究领域中的最新研究成果,综述了L-鼠李糖的检测方法,并重点从薄层色谱发(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)及二硝基水杨酸法(DNS)等几方面介绍L-鼠李糖的定性、定量检测方法,并对各种检测方法的优缺点进行了比较。

L-鼠李糖异构酶的研究进展及应用前景

L-鼠李糖异构酶(L-rhamnose isomerase,L-RI)具有广泛的底物谱,能够催化包括D-阿洛糖与D-阿洛酮糖在内的多对五元、六元酮醛糖之间的异构化反应,在生物法工业化生产D-阿洛糖中具有巨大的潜力。近年来,L-RI的晶体结构已被解析,其基因已获得克隆、测序和高效表达,经过分子改造的L-RI突变体将是未来工业化生产D-阿洛糖的主要用酶。文章中综述了近年来国内外关于L-RI的结构功能、催化机理、酶学性质及其应用于D-阿洛糖生产方面的研究进展,并展望了其研究趋势。

芦丁水解液发酵法制备L-鼠李糖的工艺

利用发酵法从芦丁水解液中制备L-鼠李糖,选取酵母用量、发酵时间和发酵温度3个影响因素,采用均匀设计和T型关联度分析法进行了优化。得到最佳发酵工艺为:酵母用量为母液的3%,发酵时间为5 h,发酵温度为35℃,产品质量浓度为9.52 g/L。

L-鼠李糖结晶母液的脱色工艺研究

研究了脱色的活性炭用量、加热温度、时间对由芦丁制备的L-鼠李糖结晶后的母液脱色的影响,在单因素实验的基础上进行了正交实验,得到最佳工艺为:4%的活性炭用量,70℃下脱色40min。同时对脱色树脂的用量、作用时间、温度也进行了单因素实验,结果表明:采用阴离子树脂,树脂用量为2%,60℃下脱色3h。

L-鼠李糖氮杂核苷衍生物的设计、合成及抗癌活性研究

L-鼠李糖及L-鼠李糖结构的化合物具有较好的抗肿瘤活性及选择性,为了降低DNA甲基转移酶抑制剂氮杂胞苷的毒副作用,以氮杂胞苷为先导化合物设计、合成了7个L-鼠李糖氮杂核苷衍生物,其结构经核磁和元素分析确证.对目标化合物对两种细胞系进行了体外增值活性研究,4-氨基-1,3,5-三嗪-1-硫代-α-L-鼠李糖核苷(5D)对MKN-45细胞具有中等强度的抗癌活性,可作为先导化合物进一步研究.

芦丁水解过滤液制备L-鼠李糖工艺优化

[目的]优选芦丁水解过滤液制备L-鼠李糖工艺。[方法]通过正交试验设计,以单位时间内葡萄糖发酵量为考察指标,筛选出发酵pH、酵母添加量、温度对发酵工艺的影响;以吸光度为指标,筛选出温度、活性炭用量、时间对脱色工艺的影响。[结果]最佳发酵脱色工艺为:芦丁水解过滤液用氢氧化钡调pH值至5~7,过滤,滤液添加酵母1‰(m/v),30℃发酵14 h时,加3‰(m/v)活性炭,50℃搅拌90 min。[结论]对芦丁水解过滤液进行了有效利用,减少废水排放,优选的最佳发酵脱色工艺稳定可行,成本低,所得鼠李糖纯度≥98%。

高效液相色谱法测定大鼠坐骨神经组织中山梨醇的浓度

目的：建立高效液相色谱法（HPLC）测定大鼠坐骨神经组织中山梨醇浓度的方法。方法采用An‐gilent ZORBAX SB C18（4．6 mm ＆#215;250 mm ，5μm）色谱柱，以L‐鼠李糖为内标，乙腈（A）‐水（B）为流动相，梯度洗脱，流速1．0 mL·min－1；检测波长228 nm ；进样量20μL ；柱温25℃为检测方法，对该方法测定大鼠坐骨神经山梨醇浓度进行包括专属性试验、线性关系检测、精密度试验、加样回收率试验及稳定性试验等在内的方法学考察。结果该方法专属性良好，大鼠坐骨神经山梨醇浓度在7．5～600 nmol·mL^－1线性范围内线性关系良好（r^2＝0．9999），最低定量限为7．5 nmol·mL^－1。日内、日间精密度小于10％，加样回收率较高，满足生物样品回收率在80％～120％内的要求，RSD均小于9％；方法稳定性好，反复冻融3次、室温放置4 h、－20℃冻存28 d以及处理好的标本于进样器放置24 h的RSD 均小于10％。结论该测定方法简便、结果准确、可靠，可用于大鼠坐骨神经组织中山梨醇浓度的测定。

利用微生物酶法生产D-阿洛糖

近年来,D-阿洛糖由于其具有的许多药物活性(包括抗癌、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗高血压、冷冻保护和免疫抑制等活性),吸引了社会的极大关注。D-阿洛糖已经可以从D-阿洛酮糖利用D-阿洛糖生产酶转化的方法得到,常用的D-阿洛糖生产酶包括L-鼠李糖异构酶、核糖-5-磷酸异构酶和半乳糖-6-磷酸异构酶。本文描述了D-阿洛糖的性质和应用,回顾了D-阿洛糖生产酶的生物化学特性及动力学参数。此外还对几种D-阿洛糖生产酶的D-阿洛糖产物进行了比较。

云南贯众提取物驱猪蛔虫效果研究及对猪主要生化指标的影响

为猪蛔虫(Ascaris suum)病的防治提供无毒、无残留,对人体无害的高效防治方法,利用云南贯众(Cyrtom ium yunnanense)分离得到的化合物山奈酚-3-a-L-(4-O-乙酰基)鼠李糖基-7-a-L-鼠李糖苷(化合物A)作为试验用药,对感染猪蛔虫的动物进行了药效试验研究。选用15头长白仔猪作为试验对象,试验分A(对照组),B,C,D,E 5个组,每组3头。根据试验效果可选用0.3 mg/kg BW作为化合物A驱除猪蛔虫的推荐使用剂量。试验中通过粪检虫卵计数表明,每克粪便中猪蛔虫虫卵数从用药前的100%下降至35.83%,虫卵数下降了64.17%,每克粪便中虫卵数与用药前相比存在差异显著性(P<0.05)。另外,试验中所检测的血液生化指标在给药前后均没有出现显著性的变化、差异无显著性(P>0.05)。从而可初步推断化合物A对猪的肝脏、肾脏、心脏和肌肉等组织器官没有产生明显的影响。云南贯众提取物化合物A对猪蛔虫病有较好的驱虫效果,且毒副作用小,有望开发成为一种新的驱蛔虫药。

双酶偶联转化果糖制备含有稀少糖的混合糖液

酶转化法是功能性稀少糖生产的重要途径,但单一稀少糖转化酶的转化率普遍较低。文中提出构建双酶偶联转化系统提高转化效率的思路,即利用D-阿洛酮糖3-差向异构酶(D-psicose 3-epimerase,DPE)和L-鼠李糖异构酶(L-rhamnose isomerase,L-RhI)双酶偶联反应,催化D-果糖生成D-阿洛酮糖和D-阿洛糖等功能性稀少糖。DPE和L-RhI加酶量的比例为1∶10,其中DPE的浓度为0.05 mg/mL;转化反应的最佳温度为60℃,最适pH为9.0。当D-果糖浓度为2%时,反应10 h达到平衡,此时D-阿洛酮糖和D-阿洛糖的产量分别为5.12和2.04 g/L。利用文中提出的双酶偶联系统可以将果葡糖浆等富含果糖的低附加值原料转化为含有功能性稀少糖的高附加值混合糖液。

大肠杆菌44277(O2:K1)中rmlB基因功能

【目的】确定rmlB基因在大肠杆菌(O2:K1)L-型鼠李糖合成中的作用。【方法】将基因rmlB进行原核表达并测定酶活;用同源重组的方法将rmlB基因敲除,分析表型变化,并运用质谱,以及核磁共振等手段分析脂多糖O侧链的结构,以确定rmlB在O抗原合成中的作用。【结果】成功对rmlB基因进行了表达并测定了重组蛋白的酶活,确定蛋白RmlB具有dTDP-D-glucose 4,6-dehydratase活性。成功构建了rmlB基因缺失突变株,对突变株进行表型分析发现突变株的表型与野生株相比无变化。对突变株分析发现突变株中的O抗原仍含有L-型鼠李糖,说明在该菌株中可能存在RmlB的同功能酶或者存在其它的L-型鼠李糖合成途径。【结论】rmlB基因编码的蛋白具有dTDP-D-glucose 4,6-dehydratase活性但此基因对于L-型鼠李糖的合成不是必需的。

基于多糖组成和含量的3种基原黄精质量比较和识别研究

目的通过定性与定量分析,结合化学计量学方法,比较黄精3种基原植物中多糖的组成和含量差异,为黄精药材质量评价提供参考。方法采用红外光谱法(FTIR)和柱前衍生化-HPLC(PMP-HPLC)法比较3种基原黄精中多糖的差异;采用紫外光谱法(UV)测定总多糖含量。结果 3种基原黄精多糖的IR平均光谱和二阶导数图谱差异明显,主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)及聚类分析(HCA)分析均可将3种基原的黄精加以区分;PMP-HPLC图谱显示3种基原黄精中多糖的单糖组成存在差异,共有成分为D-甘露糖、D-核糖、L-鼠李糖、D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖醛酸、D-半乳糖、D-葡萄糖、D-木糖、D-阿拉伯糖和L-岩藻糖;结果表明,所测样品多糖含量符合《中国药典》2015年版的要求。结论本研究所建立方法为黄精类药材的多糖组成研究和质量评价提供了新的参考。

以D-果糖为原料利用新型异构酶转化生产D-阿洛糖

稀少糖是自然界中含量稀少、化学合成困难的一类低热量单糖。D-阿洛糖是一种重要的稀少己醛糖,其具有减少活性自由基、抑制癌细胞增殖等独特的生理学功能。因此,以微生物发酵生产D-阿洛酮糖-3-差向异构酶(DPE)和L-鼠李糖异构酶(L-RhI)转化生产D-阿洛糖,成为近几年来国际研究的热点之一。文中分别克隆了来源于解纤维梭菌Clostridium cellulolyticum H10的DPE基因以及来源于枯草芽胞杆菌Bacillussubtilis 168的L-RhI基因,并分别使其在宿主菌B.subtilis及大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)中得到了表达。进一步利用镍亲和层析和阴离子交换色谱等手段对这两种酶进行了纯化,并对这两种纯化后酶的转化能力进行了分析测定。结果表明,以D-果糖为原料利用两种异构酶依次转化获得D-阿洛酮糖及D-阿洛糖,其两步转化效率分别为27.34%和34.64%。

苍白杆菌核糖-5-磷酸异构酶B基因的克隆及表达

[目的]将新筛选出的苍白杆菌菌株中的核糖-5-磷酸异构酶B(Rpi B)克隆到大肠杆菌中进行异源表达优化。[方法]以苍白杆菌菌株基因组为模板PCR扩增Rpi B基因,经酶切连接表达载体p ET-28a后转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,利用异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达及优化,利用SDS-PAGE分析表达情况。通过LC-MS-MS验证重组酶活性。[结果]SDS-PAGE分析表明,核糖-5-磷酸酶在大肠杆菌中高效表达可溶性蛋白,分子量在19 k Da左右。优化结果表明在16℃下需要IPTG诱导20 h后蛋白表达量最多。重组粗酶液在30℃下转化L-鼠李糖为L-鼠李酮糖,转化率为19%。[结论]成功克隆并表达出来源于苍白杆菌的Rpi B酶,它对其非天然底物糖L-鼠李糖表现出了异构酶活性。

绞股蓝中1个新的葫芦烷型皂苷类化合物

目的对绞股蓝Gynostemma pentaphyllum的总皂苷提取物进行化学成分研究。方法综合应用多种色谱技术进行分离纯化,通过各种现代谱学技术对化合物进行结构鉴定。结果从绞股蓝的总皂苷提取物中分离得到2个葫芦烷型三萜皂苷类化合物,分别鉴定为葫芦素L-2-O-{[a-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)][α-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖基}-25-O-β-D-吡喃木糖苷(1)、葫芦素L-2-O-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)][a-L-吡喃阿拉伯糖基-(1→3)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)。结论化合物1为1个新化合物,命名为绞股蓝葫芦皂苷A。