三价铬与六价铬化合物对L-02肝细胞毒性的比较

目的 评价三价铬 (Cr(III) )和六价铬 (Cr(VI) )对L -0 2肝细胞的细胞毒效应差异。 方法 以L -0 2肝细胞为研究对象 ,用MTT法检测L -0 2肝细胞死亡指数 ,比色法检测细胞内乳酸脱氢酶 (LDH)、天冬氨酸氨基转移酶(ALT)、丙氨酸氨基转移酶 (AST)的渗出程度。 结果 细胞处理 12h ,Cr(VI)处理组的细胞死亡指数明显高于Cr(III)细胞处理组 ,在 4～ 2 5 6μmol/L浓度范围具有明显的浓度 -效应关系 (相关系数r =0 .945 ,P <0 .0 5 )。细胞处理 5h后 ,Cr(VI)低剂量和高剂量组 (16μmol/L和 12 8μmol/L)LDH的漏出比均明显高于相应剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 ) ;在Cr(VI)高剂量组 (12 8μmol/L)ALT与AST的漏出比显著高于相同剂量的Cr(III) (P <0 .0 5 )。 结论 Cr(VI)对L -0 2肝细胞的细胞毒效应明显大于Cr(III)。

六价铬对L-02肝细胞线粒体功能的影响

目的 探讨六价铬 (Cr(VI) )对肝细胞线粒体与凋亡密切相关功能的影响。 方法 选取 2、4、8、16、3 2、64μmol/L 6个不同浓度的Cr(VI)溶液处理L -0 2人胚肝细胞 6h ,采用MTT法检测细胞活力和线粒体酶抑制率 ;荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔 (PTP)的开放程度和线粒体膜电位的 (△ψm)的变化。 结果 在 2～ 64 μmol/LCr(VI)处理浓度 ,Cr(VI)对L -0 2肝细胞具有明显的细胞毒性 ,其细胞存活率与Cr(VI)处理浓度呈负相关 (相关系数r =-0 .910 )。随着Cr(VI)浓度的增加L -0 2肝细胞线粒体总酶活性受到抑制 ;线粒体PTP孔开放程度增加 ;线粒体膜电位(△ψm)降低 ,且与对照组比较均具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。 结论 Cr(VI)可对L -0 2肝细胞线粒体与凋亡相关的功能产生损伤效应。

双酚A对人胚肝细胞DNA损伤和修复功能的影响

[目的]研究双酚A(BisphenolA,BPA)对人肝L-02细胞DNA损伤修复功能的影响。[方法]分别以1、10、50、100μmol/LBPA和100μmol/LBPA+30μg/LVitC处理L-02细胞,比较处理和未处理的人胚肝L-02细胞在DNA损伤程度、切除修复鼠缺陷交叉互补蛋白1(ERCC1)、尿嘧啶DNA糖基化酶(UDG)、错配修复hMSH2基因(hMSH2)、DNA依赖蛋白激酶复合物(DNA-PKcs)及O6-甲基鸟嘌呤甲基转移酶(MGMT)表达水平的差异。每组细胞数均为1×106个/ml。[结果]BPA处理后,彗星试验显示BPA在低剂量(10μmol/L)时即具有DNA损伤作用(P<0.05),随着剂量增大,DNA损伤效应增加。100μmol/LBPA+30μg/LVitC组DNA损伤效应降低,显示抗氧化剂VitC可减缓BPA所致的DNA损伤效应,氧化损伤是BPA所致DNA损伤的方式之一。5种DNA损伤修复酶表达水平在1μmol/L、10μmol/L、50μmol/L剂量组依次降低,在100μmol/L、100μmol/L+VitC组依次增加,50μmol/L组各种DNA损伤修复酶表达水平最低。BPA50μmol/L组与溶剂对照比较,5种DNA损伤修复酶均有明显降低,差异具有显著性(P<0.05)。100μmol/L组的表达水平均高于50μmol/L组,100μmol/L+VitC组均高于100μmol/L组。除DNA-PKcs与hMSH2外,其他DNA损伤修复酶在100μmol/L+VitC组与溶剂对照组比较差异均无显著性(P>0.05)。[结论]BPA对L-02细胞具有氧化损伤作用,并可导致DNA损伤,多种DNA损伤修复酶参与修复双酚A所导致的DNA损伤。VitC可减缓双酚A的DNA损伤作用。

富勒烯对人胚肝细胞的氧化损伤

为初步探讨富勒烯(C60)对人体细胞的潜在危害,以人胚肝细胞(L-02)为研究对象,研究富勒烯暴露对人胚肝细胞的氧化损伤。人胚肝细胞暴露于0、1.25、2.50、5.00、10.00、20.00和40.00μg.mL-1富勒烯悬液24h后,检测细胞内CAT活性和MDA与ROS含量。采用免疫组化法检测SOD蛋白在富勒烯暴露后细胞内的分布情况;Western blotting法观察富勒烯对人胚肝细胞内SOD、GSH-Px和CAT蛋白表达的影响。结果表明,各实验组中细胞内CAT活性均有不同程度的降低,与对照组相比,差异均具有统计学意义(p<0.05);10.00、20.00和40.00μg.mL-1富勒烯暴露组细胞内MDA含量以及10.00μg.mL-1组细胞内ROS的含量明显增加,差异均具有统计学意义(p<0.05)。随着富勒烯含量的增加,细胞内SOD蛋白表达减少且分布不均。同时,富勒烯降低细胞内GSH-Px和CAT蛋白的表达。综合实验结果推测富勒烯引起人胚肝细胞发生氧化损伤可能是通过降低细胞内SOD、GSH-Px和CAT蛋白表达水平来实现的。

双酚A对人胚肝细胞凋亡的影响

[目的]研究双酚A(BPA)对人胚肝L-02细胞的凋亡的影响。[方法]以MTT来分析不同浓度BPA对人胚肝L-02细胞的细胞存活率的影响;用流式细胞术分析不同浓度BPA对细胞凋亡的影响;通过RT-PCR分析BPA引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45、GADD153、GADD34表达水平的变化。[结果]BPA处理后,L-02细胞的生存率随着BPA浓度的增加而下降,在≥50μmol/L,细胞的存活率显著降低(P<0.01)。随着BPA浓度升高,细胞凋亡率增加,≥50μmol/L可显著升高L-02细胞的凋亡率(P<0.01)。生长抑制DNA损伤基因GADD45、GADD153.GADD34表达水平随着BPA浓度增加表达量也增加,100μmol/LBPA组显著高于正常对照组,但在100μmol/L,BPA+VitC组三种GADD基因表达量均稍降低。[结论]BPA对L-02细胞具有细胞毒性作用,可导致细胞凋亡率升高,与细胞生长调控和DNA损伤相关的GADD45、GADD153、GADD34基因表达升高,VitC可减缓BPA对DNA的损伤作用。

氯化两面针碱对肝、肾的毒性及酸性成纤维细胞生长因子对其的保护作用研究

目的:观察氯化两面针碱在体外对人胚肝细胞L-02,人胚肾细胞293的毒性作用,及酸性成纤维细胞生长因子(aF-GF)对氯化两面针碱引起的肝、肾细胞损伤的保护作用。方法:采用MTT法检测不同浓度氯化两面针碱对人肝、肾细胞的毒性,及加入aFGF后对肝、肾细胞的IC50值的影响。采用紫外分光光度法测定培养上清液中的SOD、MDA、LDH值。结果:aFGF可明显提高人胚肝细胞L-02、人胚肾细胞293的IC50值。aFGF保护组与氯化两面针碱损伤组的SOD、MDA和LDH测定结果有显著性差异(P<0.05)。结论:氯化两面针碱对人胚肝细胞L-02和人胚肾细胞293有一定毒性,加入aFGF后,可明显减轻氯化两面针碱对人胚肝细胞L-02和人胚肾细胞293的毒性作用。