基于HPLC指纹图谱和L-02细胞/CCK-8测定法的复方牛胎肝提取物片质量评价研究

目的:建立复方牛胎肝提取物片高效液相色谱(HPLC)指纹图谱,结合L-02细胞/CCK-8测定法,为复方牛胎肝提取物片的质量评价提供一种新方法。方法:选择3家生产企业生产的9批复方牛胎肝提取物片样品。采用HPLC法,以0.1%甲酸为流动相A,0.1%甲酸甲醇溶液为流动相B,进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min^(-1);检测波长260 nm;柱温30℃;进样量20μL。用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)建立复方牛胎肝提取物片的指纹图谱,进行相似度分析,并用L-02细胞/CCK-8测定法对产品进行活性测定。结果:建立了复方牛胎肝提取物片的HPLC指纹图谱,相似度计算结果在0.963~1.000范围内,3家企业生产工艺稳定,同企业产品批间一致性良好。L-02细胞/CCK-8测定法检测3家企业9批复方牛胎肝提取物片的活性,产品对细胞的修复率在49%~147%范围内,不同企业产品活性存在较大差异。结论:所建立的指纹图谱方法专属性强,高效快速,可用于考察复方牛胎肝提取物片的批间一致性。采用L-02细胞/CCK-8测定法测定产品对细胞的修复率,明显提升了指标的科学性,改善现标准的指标钝化的现状,为复方牛胎肝提取物片的质量评价提供参考。

何首乌中1个新的木脂素酰胺类化合物

目的对何首乌Polygonum multiflorum 70%乙醇提取物进行化学成分研究,并考察部分化合物对正常人L02肝细胞生长的影响。方法采用大孔吸附树脂(DM-8型)、ODS反相硅胶、MCI和制备液相等多种色谱技术进行分离纯化,运用质谱和现代波谱学技术对化合物进行结构鉴定;采用CCK-8法,以细胞抑制率为评价指标,考察部分化合物对L02肝细胞生长的影响。结果从何首乌70%乙醇提取物中分离得到8个化合物,分别鉴定为(E)-2-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)-3-[N-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]carbamoyl-5-[N-2-(4-hydroxyphenyl)ethyl]carbamoylethenyl-7-methoxybenzofuran(1)、cannabisin D(2)、grossamide(3)、eleutherinol(4)、isolariciresinol(5)、N,N-二甲基-色氨酸甲酯(6)、N-反式-阿魏酰酪胺(7)和N-反式阿魏酰-3-甲氧基酪胺(8)。化合物1、7和8对L02肝细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为3.02、190.35、300.61μmol/L。结论化合物1为新的木脂素酰胺类化合物,命名为何首乌庚素。化合物2~6均为首次从该植物中分离得到,并通过二维核磁谱补充了化合物4和6的核磁数据。化合物1对正常人L02肝细胞具有较强的抑制作用。