过量表达甲酸脱氢酶提高大肠杆菌合成L-2-氨基丁酸的效率

为了实现L-2-氨基丁酸(L-ABA)的高效生物合成,借助pACYCDuet-1和pET28a共表达系统,构建了携带L-苏氨酸脱氨酶(L-TD)、L-亮氨酸脱氢酶(L-L-DH)和不同活性甲酸脱氢酶(FDH)编码基因的重组大肠杆菌,分别命名为:E.coli BL21(DE3)/pACYCDuet-1-Ec TD-Es LeuDH:pET28a-Cb FDH和E.coli BL21(DE3)/p ACYCDuet-1-Ec TD-Es Leu DH:p ET28a-Cb FDH^(M)。经诱导表达后,L-苏氨酸脱氨酶和L-亮氨酸脱氢酶在两个重组大肠杆菌中的表达水平基本一致,而后者的甲酸脱氢酶酶活表达水平为(342.00±9.40)IU/mL,显著高于前者的(196.00±6.20)IU/mL。在50 mL反应体系中,200 mmol/L L-苏氨酸经220 r/min、30℃下反应6 h时,前者L-ABA得率为71%,后者为85%。结果表明,提高甲酸脱氢酶的表达水平可以显著提高L-ABA的合成效率。此外,优化反应温度后,在35℃下反应6 h时,L-ABA的得率可达90%。

解木糖赖氨酸芽孢杆菌发酵和生物催化产生L-2-氨基己二酸

以解木糖赖氨酸芽孢杆菌XX-2为出发菌株,110 mmol/L L-赖氨酸单盐酸盐为发酵前体,144 h发酵后L-2-氨基己二酸浓度达到10.4 mmol/L,产率为9.5%.以解木糖赖氨酸芽孢杆菌XX-2全细胞为生物催化剂,利用共生的L-赖氨酸6-脱氢酶和?-1-哌啶啉-6-羧酸脱氢酶催化L-赖氨酸单盐酸盐转化为L-2-氨基己二酸.最优条件为:细胞浓度为45 g(干重)/L,L-赖氨酸单盐酸盐浓度为100 mmol/L,pH=7.0,温度为30℃,反应时间144 h.在最优条件下,从100 mmol/L L-赖氨酸单盐酸盐产生90 mmol/L L-2-氨基己二酸,产率为90%.我们推测了生物催化过程中L-2-氨基己二酸产生的反应机理.

L-2-氨基丁酸大肠杆菌生产菌株的构建

L-2-氨基丁酸作为新型药物的关键手性前体,在化工和制药行业应用广泛。该文以1株生产L-苏氨酸的大肠杆菌(Escherichia coli) THRD为出发菌株,逐步延伸代谢途径,构建了L-2-氨基丁酸高产菌株。首先,分别把苏氨酸脱水酶编码基因ilv A2和ilv A4在THRD中过表达,菌株THRD/p Trc99a-ilv A2在5 L发酵罐中分批补料发酵,2-酮基丁酸积累量达到18 g/L。然后,分别与ilv A2串联表达酪氨酸转氨酶、谷氨酸脱氢酶和亮氨酸脱氢酶编码基因tyr B、gdh和bcdBS,将L-2-酮基丁酸转化为L-2-氨基丁酸,菌株THRD/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量达到19 g/L。最后,研究了阻断L-苏氨酸输出途径对发酵的影响,菌株THRDΔrht C/p Trc99a-bcdBS-ilv A2的L-2-氨基丁酸产量提升至22 g/L。因此,通过代谢途径延伸可以有效地将L-苏氨酸生产菌株转变为L-2-氨基丁酸生产菌株。该研究为L-2-氨基丁酸高产菌株的构建奠定了基础,且对其他延伸代谢途径获得新产品的代谢工程研究提供了参考。

L-2-氨基丙醇的合成新工艺

以L-2-氨基丙酸为原料,经缩合、化学还原两步反应制得标题化合物。化学还原中采用Synhydrid还原剂, 该还原剂价格低廉,还原效果好,操作容易,后处理简单,收率达到82．5％。

Bax、Bag-l、Bcl-2在乳腺肿瘤组织中的表达及意义

目的:探讨Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Bcl-2结合抗凋亡基因(Bag-1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)在乳腺肿瘤组织中的表达及临床意义。方法:选取本院乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织各85例、乳腺导管内癌及其癌旁组织各70例,采用链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(S-P)免疫组化法检测Bax、Bag-l、Bcl-2蛋白在各组织中的表达。结果:Bax蛋白在浸润性导管癌组织中的表达与癌旁正常组织及导管内癌组织比较,差异无统计学意义(P>0.05);Bag-1、Bcl-2蛋白在浸润性导管癌组织中的表达高于在癌旁正常组织,差异具有统计学意义(P<0.05);浸润性导管癌组织中Bag-1、Bcl-2蛋白阳性表达率明显高于导管内癌癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:乳腺癌组织中Bag-1、Bcl-2蛋白表达高于癌旁正常组织,在浸润性导管癌中的表达高于导管内癌组织,Bag-1、Bcl-2高表达可作为判断乳腺疾病良、恶性及预后的指标之一。

银杏外种皮多糖对免疫功能低下小鼠IL-2活性及sIL-2R的影响

目的 :观测银杏外种皮多糖对免疫功能低下小鼠IL 2活性及sIL 2R的影响。方法 :用银杏外种皮多糖给荷瘤小鼠及环磷酰胺损伤小鼠灌胃治疗 ,分别检测小鼠脾淋巴细胞IL 2活性及血清sIL 2R含量。结果 :银杏外种皮多糖可促进荷瘤小鼠及CTX损伤小鼠脾淋巴细胞的IL 2活性 ,并减少其血清sIL 2R的形成。结论 :银杏外种皮多糖可促进荷瘤小鼠及CTX损伤小鼠的免疫功能。

点饱和突变提高腈水解酶不对称合成L-2-氨基丁酸的酶活

为了提高腈水解酶催化外消旋2-氨基丁腈不对称合成L-2-氨基丁酸的能力,首先从实验室的腈水解重组大肠杆菌中筛选获得了一株立体选择性较高的菌株E.coli BL21(DE3)/p ET-28bbll6402。通过对其腈水解酶Nitbll6402进行三维结构同源模建和"热点"氨基酸分析,选择了6个位于"疏水口袋"附近的氨基酸残基(Y198、P239、P272、K251、E240和M234)进行点饱和突变,得到酶活力明显提高的突变型腈水解酶E240G和K251C。在60 mmol/L底物下,生成的L-2-氨基丁酸的e.e值均为100%,浓度分别为5.43 g/L和5.29 g/L,比原始酶分别提高了63%和59%。此结果表明,E240G或K251C的单点突变均能在不影响立体选择性的前提下不同程度的提高腈水解酶Nitbll6402合成L-2-氨基丁酸的能力,这将为利用腈水解酶催化合成L-2-氨基丁酸的进一步研究奠定重要的理论基础。

新型延缓交联剂L-2的研制

针对油田高温、高盐调驱使用延缓交联剂的需要 ,同时兼顾环境保护 ,采用络合法 ,经过分子设计 ,研制了一种新型有机铝延缓交联剂L - 2 ,并对其性能进行了评价。该产品为无色无味液体 ,延缓时间在 6～ 48h内可调 ,能与聚合物形成体型结构 ,交联强度大 ,在 1 0 0℃、矿化度为 2 5 0g/L的条件下 ,仍然表现出较好的交联效果 ,符合环保要求 ,而且合成工艺简单 ,可操作性强 ,同时在降低产品生产成本 。

IL-2-PE40、CsA、雷公藤治疗角膜移植排斥反应实验研究

目的采用ＩＬ２ＰＥ４０、ＣｓＡ、雷公藤对角膜移植排斥反应进行实验性治疗。方法以Ｗｉｓｔａｒ大鼠异种角膜异位移植为模型，比较ＩＬ２ＰＥ４０、ＣｓＡ、雷公藤的免疫抑制疗效，同时测外周血Ｔ淋巴细胞亚群及Ｔ淋巴细胞集落形成数。结果ＩＬ２ＰＥ４０、ＣｓＡ、雷公藤均可推迟排斥反应的发生时间。ＩＬ２ＰＥ４０能明显减弱Ｔ淋巴细胞集落形成能力，Ｔ细胞集落数术前为２０１±１８．９，术后第５天为２１３±１９．４，而ＣｓＡ、雷公藤无该方面作用。结论ＩＬ２ＰＥ４０较ＣｓＡ、雷公藤特异性高，且提示有可能在更高层次上抑制排斥反应的发生。

CL-20/HMX无规作用及共晶作用的理论计算

为了对比六硝基六氮杂异戊兹烷(CL-20)/环四亚甲基四硝铵(HMX)炸药分子间的无规作用及共晶作用,基于密度泛函理论(DFT),在B3LYP方法上使用6-311++G(d,p)基组优化得到了4种CL-20/HMX无规构型(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ),对4种无规构型的几何结构、静电势、能量及电子密度拓扑进行了分析;利用分子动力学方法计算了共晶结构中H原子和O原子的径向分布函数;计算了不同摩尔比CL-20/HMX共晶的密度及爆速。结果表明,4种CL-20/HMX的无规构型存在氢键相互作用,氢键键长在0.274 2~0.296 4nm之间;4种无规构型的稳定性排序为:Ⅳ>Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ,构型的稳定性主要取决于氢键的数量和键长;4种无规构型在键临界点BCP处的电子密度ρ(r)大小排序为:Ⅳ>Ⅲ>Ⅱ>Ⅰ,CL-20和HMX分子之间不仅存在H…O以及H…N形式的氢键相互作用,还存在N…O和C…O形式的范德华作用;共晶结构中CL-20与HMX的相互作用主要有氢键和强范德华力,氢键键长为0.22nm;CL-20/HMX共晶(摩尔比2∶1)的理论密度为2.003g/cm^3,理论爆速为9 608m/s。

固定化色氨酸合成酶细胞合成L-2-甲基色氨酸

利用固定化色氨酸合成酶细胞合成了L-2-甲基色氨酸,采用戊二醛作为交联剂、海藻酸钠作为包埋剂和改性玉米秸秆纤维作为填充剂固定色氨酸合成酶基因工程菌,并利用响应面法建立了最优固定因素水平条件,并考察了最佳条件下该固定化菌的酶活力以及其稳定性。实验结果表明:底物L-丝氨酸质量浓度为30 g/L、温度为35℃、pH=8.0时,L-2-甲基色氨酸质量浓度达到5.3 g/L,底物L-丝氨酸转化率为41.6%,产物L-2-甲基色氨酸收率为25.3%,固定化色氨酸合成酶基因工程菌可连续使用12批次。

南瓜多糖对糖尿病大鼠胰岛Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察南瓜多糖(PP)对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L、Bcl-2及Bax表达的影响。方法建立链脲佐菌素性糖尿病模型,PP(150、300、600mg.kg-1)灌胃进行治疗。3wk后检测大鼠空腹血糖值;采用免疫组化的方法探讨PP对链脲佐菌素性糖尿病大鼠Fas和Fas-L蛋白表达的影响;采用RT-PCR的方法观察PP对实验性糖尿病大鼠胰岛凋亡调控基因Bax和Bcl-2表达的影响。结果PP(300、600mg.kg-1)能明显降低STZ诱导的糖尿病大鼠的空腹血糖值;PP(150、300、600mg.kg-1)治疗后大鼠胰腺组织中Fas/Fas-L蛋白的表达率明显低于STZ模型组;PP(150、300、600mg.kg-1)给药3wk后,大鼠Bcl-2基因的表达明显增加,PP(300、600mg.kg-1)治疗后大鼠Bax基因的表达明显下降,Bcl-2与Bax的比值明显增加。结论PP对实验性糖尿病大鼠有降血糖作用,其作用与降低大鼠胰腺组织中Fas、Fas-L蛋白的表达、调节Bcl-2与Bax基因的表达有关。

基于类中心和密切度的L-2范数FSVM

支持向量机(SVM)是解决回归问题的一种有效的方法,但传统的支持向量机对样本中的噪声和孤立点非常敏感。为了克服这个问题,文中提出了一种基于类中心和密切度的L-2范数模糊支持向量机(L-2范数FSVM),即模糊隶属度的建立不仅根据样本到类中心的距离,而且根据样本点和其目标点之间的密切度。仿真实验结果显示了该方法有效地减少了噪声的影响,改进了回归的精度,增强了推广能力。

聚醚砜酮及其与ε-CL-20复合体系性能的分子动力学模拟

通过在二氮杂萘酮中引入叠氮基和氨基,设计了一种新型聚醚砜酮(PPESK),并研究了其对六硝基六氮杂异伍兹烷(ε-CL-20)稳定性和力学性能的影响。应用COMPASS力场,构建PPESK无定型晶胞并研究了其密度和玻璃化转变温度;对ε-CL-20的4个主要生长面与PPESK组成的界面晶体模型进行了分子动力学(MD)模拟,求得PPESK/ε-CL-20复合体系的内聚能密度、结合能和力学性能。结果表明,与文献相比,计算所得的PPESK密度和玻璃化温度较为准确;ε-CL-20与PPESK的溶度参数差值(Δδ)为8.512(J/cm^3)^(1/2),两者具有一定相容性;PPESK与ε-CL-20主要生长面的结合能大小依次为:(0 1 1)>(0 0 2)>(1 0-1)>(1 1 0),其中(0 1 1)为最大生长面,所占比例为38.2%;4种复合体系的力学系数均大幅度减小,表明PPESK的加入有效降低了ε-CL-20的刚性和各向同性,体系塑性增强。

L-2型皮革加脂剂的研究

L—2型皮革加脂剂是以猪皮下油为主要原料、经过深度改性、复配而制成的一种复合型阴离子加脂剂。具有优良的加脂性能,是一种适宜于服装、手套及软鞋面革加脂用的新型加脂材料。本文讨论了主要成份的改性工艺及其影响因素;研究了组份的复配。结合主要成份的改性工艺,研究了单一脂肪酸酯、混合脂肪酸酯及其改性产物的加脂性能。结合配套应用工艺的研究,对加脂材料在皮革中的分布、含量、进行了剖层分析。并对加脂材料中的各组份,在加脂前后(由革中萃取)的变化,进行薄层扫描色谱研究。同时还就不同复鞣系统对加脂的影响,进行了比较。研究结果表明,适宜的深度改性、合理的组份复配与相应的应用配套工艺,形成了L—2型皮革加脂剂优良的加脂性能。

吡哆素L-2-吡咯烷酮-5-羧酸酯雄性生殖毒性及机制研究

目的:研究吡哆素L-2-吡咯烷酮-5-羧酸酯(Metadoxine,MTDX)对雄性大鼠的生殖毒性及机制。方法:灌胃染毒雄性成年SD大鼠0,250,500和1000 mg/kgMTDX,每天1次,连续4周。染毒结束后观察性腺和附属性腺脏器系数、精子质量、组织形态学和血清睾酮等指标的变化。Hershberger方法检测MTDX抗雄激素活性作用:40只4周龄雄性SD大鼠行双侧睾丸切除手术,2周后,除1组皮下注射花生油并灌胃给予蒸馏水外,其余3组去势大鼠每天皮下注射丙酸睾酮(TP,1 mg/kg),并同时灌胃给予蒸馏水或MTDX(500,1000 mg/kg),连续7 d,观察雄激素依赖组织重量的变化。对体外培养睾丸碎块合成睾酮的影响:利用离体组织培养和放射免疫技术,观察不同浓度MTDX对体外培养睾丸碎块合成睾酮的影响。结果:1000 mg/kg剂量组大鼠睾丸、附睾、前列腺和精囊腺脏器系数明显降低;精子数量和精子存活率减少,精子活力降低,精子畸形率增高,血清T无变化;500 mg/kg剂量组在睾丸相对重量、精子数量和精子活力方面与对照组比较有显著性差异。在Hershberger实验中,1000 mg/kg组大鼠的精囊腺、前列腺以及球海绵体肌的脏器系数值均显著低于对照组。MTDX各剂量组睾丸培养液中睾酮的含量与对照组相比均没有显著性差异。结论:MTDX能引起雄性大鼠生殖毒性,这种毒性作用可能与其具有抗雄激素样作用有关。

d,l-2-乙酰氨基-3-(3′-吲哚)丙酸的制备和拆分研究

以3-吲哚基-甲基-乙酰氨基丙二酸二乙酯为原料，经选择性水解制备d，l-2-乙酰氨基-3-（3＇-吲哚）丙酸，最佳反应条件是：反应温度70～80℃，反应时间为6h，物料3-吲哚基-甲基-乙酰氨基丙二酸二乙酯与氢氧化钠的摩尔比为1：2.5，产率可达到84.4％ 研究了利用对硝基苯基-2-氨基-1，3-丙二醇为拆分剂对d，l-2-乙酰氨基-3-（3＇-吲哚）丙酸进行拆分，d-2-乙酰氨基-3-（3＇-吲哚）丙酸的拆分纯度为98％。

4-(6-羟基己氧基)联苯-4′-甲酸-L-2甲基丁醇酯的合成及其液晶性的研究

运用示差扫描量热仪、偏光显微镜、X射线衍射仪和计算机模拟分子链处于能量最低、最优构象时的分子长度等手段,对新合成的4-(6-羟基己氧基)联苯-4′-甲酸-L-2甲基丁醇酯进行表征。结果表明:该液晶化合物为近晶A相。合成总收率为47.3%(相对于4-羟基-4′-氰基联苯)。

产蛋白酶菌Planomicrobium sp.L-2发酵条件的优化

通过优化从长蛸胃肠道筛选得到的产蛋白酶菌Planomicrobiumsp.L-2菌株的发酵条件,提高其产蛋白酶的活力。采用单因素实验研究发酵培养基的最佳碳源、氮源以及最佳发酵条件,采用Box-Behnken设计方法进行响应面实验设计,进一步优化培养基组成。结果表明,最佳培养基组成及发酵条件为:可溶性淀粉0.73%、蛋白胨0.68%、酵母膏0.15%、磷酸高铁0.01%、海水,培养基初始pH值8.0,接种量8%,发酵温度25℃,发酵时间3.5d。优化后,所产蛋白酶的最高酶活力为1 457U·mL-1,比优化前提高约2倍。

煤矽肺患者血清sIL-2R含量的变化

用ELISA法检测煤矽肺患者与对照组血清sIL 2R的含量 ,结果sIL 2R在煤矽肺患者血清中高表达 。