细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因的克隆及在其不同阶段的差异表达和生物信息学分析

目的研究细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶分子特性及其在细粒棘球绦虫不同发育阶段的表达差异。方法通过分析细粒棘球绦虫原头蚴高通量转录组测序文库对Unigene进行KEGG通路分析,筛选出一个脂肪酸代谢酶通路及该通路的一个主要调控基因3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因。PCR扩增3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因,分析其核苷酸序列及其编码蛋白的结构和功能;通过实时荧光定量PCR分析虫体的原头蚴、成虫发育阶段的mRNA的转录情况。结果细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因具有完整的开放阅读框,cDNA全长为822bp,编码274个氨基酸。生物信息学预测3-羟基酰基-CoA脱氢酶蛋白质的相对分子质量及等电点分别为32.98×10^5和8.87。该蛋白无跨膜螺旋区,具有亲水性,且具有多个潜在的优势抗原表位。氨基酸序列多重比对分析显示其与多房棘球绦虫亲缘关系较近。实时荧光定量PCR检测对该基因在原头蚴和成虫期均有表达,以成虫阶段表达量更高。结论细粒棘球绦虫3-羟基酰基-CoA脱氢酶基因在原头蚴和成虫期高表达,其编码蛋白具有潜在的优势抗原表位该基因可作为细粒棘球绦虫终末宿主抗原候选基因。

运动对ApoE基因敲除小鼠骨骼肌脂代谢及PPAR-α mRNA表达的影响

目的 观察运动对胰岛素抵抗小鼠骨骼肌过氧化物酶体增殖物激活受体-α（PPAR-α）及靶基因脂酰辅酶A氧化酶（ACO）、烯酰辅酶A水解酶/L-3羟-CoA脱氢酶（EHHADH）mRNA表达的影响,并初步探讨运动改善脂代谢的可能机制.方法 将20只雄性ApoE基因敲除小鼠随机分为高脂组及运动组,高脂组小鼠给予高脂饮食喂养,运动组小鼠在高脂饮食基础上增加游泳训练,另选取C57BL/6J小鼠作为对照组.经干预12周后,测定各组小鼠空腹血脂、血糖及胰岛素浓度,并计算胰岛素抵抗指数;同时取各组小鼠腓肠肌进行电镜超微结构观察,采用RT-PCR方法检测各组小鼠骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA水平.结果 通过电镜观察发现,高脂组可见肌细胞线粒体水肿、肌膜下水肿、肌原纤维间水肿,伴有肌溶解灶,该组小鼠血脂（总胆固醇、低密度脂蛋白、游离脂肪酸）、空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数均较对照组明显升高（均P ＜0.05）,骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA表达均较对照组明显下调（均P＜0.05）.运动组小鼠经游泳干预后,发现其肌细胞肌原纤维间有轻度水肿,肌纤维排列整齐,未见肌溶解及肌膜下水肿;血脂水平较高脂组明显降低（均P＜0.05）,高密度脂蛋白较高脂组明显升高（P＜0.05）;空腹血糖、空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数较高脂组明显降低（均P＜0.05）,骨骼肌中PPAR-α、ACO及EHHADH mRNA表达较高脂组明显上调（均P＜0.05）.结论 游泳运动可显著改善ApoE基因敲除小鼠脂代谢紊乱及胰岛素抵抗,其治疗机制可能与上调骨骼肌中PPAR-α,进一步激活其下游靶基因ACO及EHHADH,从而提高脂肪酸氧化代谢能力有关.

蛋白敏感性低血糖5例病例报道及文献复习

目的总结蛋白敏感性低血糖的临床特征、基因突变及治疗随访情况,以提高临床医师对蛋白敏感性低血糖的诊治认识。方法2015年6月至2017年12月在复旦大学附属儿科医院内分泌遗传代谢科收治的5例蛋白敏感性低血糖病例,对其临床表现、蛋白负荷试验以及治疗随访资料进行分析。其中4例进行内分泌遗传代谢疾病基因组合的高通量测序。系统复习国内外蛋白敏感性低血糖文献报道,归纳其临床表现、基因突变及治疗效果。结果在5例蛋白负荷试验确诊蛋白敏感性低血糖的患儿中,谷氨酸脱氢酶1(GLUD1)基因突变3例(c.965G>A,p.R322H:2例;c.943C>T,p.H315Y:1例),L-3-羟酰基-CoA脱氢酶(HADH)基因复合杂合突变1例(c.29G>C,p.R10P;c.89T>A,p.V30E)。5例患儿低蛋白饮食(蛋白质1~1.2g·kg^-1·d^-1)后低血糖发作被明显控制。通过复习文献,共检索到18篇文献,与本文病例合并后共有161例蛋白敏感性低血糖患者,其中GLUD1基因激活突变149例,HADH失活突变10例。结论以“低血糖”就诊的患儿,如伴进食后出现严重的低血糖、伴或不伴高血氨,需注意蛋白敏感性低血糖可能,蛋白负荷试验可以协助诊断。