L-3-n-丁基苯酞对急性缺血性脑卒中发病后1个月中性粒细胞和淋巴细胞计数的影响

目的:观察L-3-n-丁基苯酞(L-3-n-butylphthalide,NBP)对急性缺血性脑卒中(acute ischemic stroke,AIS)患者发病后1个月中性粒细胞和淋巴细胞计数的影响。方法:将241例AIS患者纳入队列研究,根据患者是否使用NBP分为非NBP组和NBP组。在两组入院时和发病后1个月均进行血常规检查,并计算入院时和发病后1个月的中性粒细胞差值、淋巴细胞差值及中性粒细胞/淋巴细胞比值(neutrophilto-lymphocyte ratio,NLR)差值,分析这些指标与使用NBP之间的关系。结果:241例AIS患者中,62例(25.7%)患者使用了NBP。与非NBP组比较,NBP组的中性粒细胞差值、NLR差值较高,发病后1个月的中性粒细胞计数、NLR、淋巴细胞差值较低(P<0.05)。中性粒细胞差值(校正OR=2.36,95%CI=1.12~4.83,P=0.006)、淋巴细胞差值(校正OR=0.85,95%CI=0.30~0.94,P=0.043)、发病后1个月NLR(校正OR=0.82,95%CI=0.34~0.98,P=0.046)与使用NBP独立相关。结论:NBP可显著降低AIS患者的中性粒细胞计数及NLR,并延缓外周淋巴细胞计数的下降。

Novozyme 435选择性酸解(R,S)-3-n-丁基苯酞

Novozyme 435可以提高对映体选择性酸解(R,S)-3-n-丁基苯酞。最适的有机溶剂、水分活度、转速和转化时间分别是正己烷、0.54、150 r/min和64 h。在此优化条件下,丁基苯酞的转化率为14.8%,产物的对映体过量值为99.3%。

Novozyme 435催化的对映体选择性转酯化(R,S)-3-n-丁基苯酞的研究

[目的]研究在正己烷中脂肪酶Novozyme 435对映体选择性转酯化(R,S)-3-n-丁基苯酞的可行性。[方法]通过Novozyme 435酶法反应试验和液相色谱分析反应后丁基苯酞的转化量,研究某些关键因素如水活度、加酶量、乙酸乙烯酯与丁基苯酞摩尔比和转化时间等对对映体转酯化反应的影响。[结果]在此反应中,合适的水活度0.62,Novozyme 435添加量8 mg/ml,乙酸乙烯酯与丁基苯酞摩尔比8∶1,转化时间40 h。在此条件下,丁基苯酞的eeS为96.5%,产物的eeP>98%,丁基苯酞转化率为49.2%。[结论]脂肪酶Novozyme435对催化丁基苯酞的转酯化具有高对映体选择性。

一氧化氮供体型3-丁基苯酞衍生物的合成及抗血小板活性

目的:研究一氧化氮(NO)供体型3-丁基苯酞衍生物的合成和生物活性,寻找新型抗脑缺血药物。方法:使用不同的连接基团将3-丁基苯酞的开环衍生物2-(1-乙酰氧戊基)苯甲酸与一氧化氮供体连接,合成了目标化合物6a-6c、10a-10c和12a-12c,同时测定它们在体外释放NO的量。结果:合成了9个未见文献报道的目标化合物,其结构均经IR、1HNMR、MS和元素分析确证。它们均有一定的抗血小板活性且有不同程度的NO释放,其中化合物10b活性最强,明显优于阿司匹林和3-丁基苯酞(P<0.01),其NO最大释放量为0.05μmol/L,而活性最弱的化合物6c仅为0.01μmol/L。结论:NO供体型3-丁基苯酞衍生物具有较强抗血小板活性,其作用机制可能与NO释放有关。

6-[N-(4-氨基丁基)-N-乙基]氨基-2,3-二氢-1,4-酞嗪二酮的合成

目的 建立一种合成化学发光标记试剂 6 - [N- (4-氨基丁基 ) - N-乙基 ]氨基 - 2 ,3-二氢 - 1,4 -酞嗪二酮 (ABEI)的简便、经济的新方法 .方法 室温下用 KOH将邻苯二甲酰亚胺转化为邻苯二甲酰亚胺钾盐 ,并进一步进行甲基化、硝化和还原反应 ,得到 N-甲基 - 4 -氨基邻苯二甲酰亚胺 .N- (4-溴丁基 )邻苯二甲酰亚胺与 N -甲基 - 4 -氨基邻苯二甲酰亚胺缩合之后 ,通过乙基化和肼解反应得到目的产物 ABEI.结果 按起始原料计算 ,ABEI的总收率为 4 .4 % .经熔点、核磁、质谱、红外、元素分析等方法鉴定 ,各中间体及目的产物均与其分子结构相符 .结论 起始原料价廉易得 ,反应步骤操作简便 。

丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响

目的探讨丁基苯酞对氧糖剥夺/复氧糖诱导的星形胶质细胞中caspase-3表达的影响。方法将原代培养、鉴定的Sprague-Dawley大鼠星形胶质细胞随机分为对照组、模型组和实验组,各组细胞经高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)培养48 h,细胞贴壁并伸出突触后实验组及模型组更换DMEM无糖培养基进行氧糖剥夺,对照组仍使用DMEM高糖培养基培养,3组细胞放入培养箱中孵育6 h后,实验组更换为含100μmol·L^(-1)丁基苯酞的DMEM高糖培养基,模型组更换为DMEM高糖培养基进行氧糖剥夺/复氧糖,对照组更换新的DMEM高糖培养基,继续培养24 h。四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测各组细胞活力,免疫荧光及免疫印迹法检测星形胶质细胞中caspase-3表达,酶联免疫吸附试验检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)表达。结果 MTT法结果显示,对照组星形胶质细胞活力高于实验组和模型组(P<0.05),实验组星形胶质细胞活力显著高于模型组(P<0.05)。免疫荧光染色结果显示,对照组星形胶质细胞内荧光信号最弱;模型组星形胶质细胞内荧光信号最强;实验组星形胶质细胞内荧光信号强度较模型组降低,但高于对照组(P<0.05)。免疫印迹检测结果显示,模型组星形胶质细胞在氧糖剥夺/复氧糖后caspase-3表达相对最高,实验组次之,对照组最低,各组间两两比较差异均有统计学意义(P<0.05)。氧糖剥夺/复氧糖24 h后,实验组细胞培养液中LDH水平高于对照组(P<0.05),模型组细胞培养液中LDH水平显著高于实验组(P<0.05)。结论丁基苯酞可以改善氧糖剥夺/复氧糖引起的星形胶质细胞损伤。

慢性间断性缺氧后细胞色素C和caspase-3的表蛳达及维生素E和左旋丁基苯酞对其变化的影响

目的 探讨慢性间断性缺氧后细胞色素C的释放、 caspase-3 的激活以及维生素 E 和左旋丁基苯酞(L-NBP)对这些变化的影响。 方法 建立大鼠慢性间断性缺氧模型,并给予 L-NBP 和维生素E 。用 W estern blot方法和免疫组化方法分别检测大鼠皮层的细胞色素 C 释放和 caspase-3 的激活。 结果 对照组可检测到微弱的caspase-3 阳性染色。缺氧组 caspase蛳3 阳性染色显著增加(P < 0.01)。与缺氧组相比,大、小剂量维生素 E 组,大、小剂量L-NBP 组阳性细胞均明显减少( < 0.01)。对照组线粒体可见明显的细胞色素 C 蛋白条带,而胞浆则无此条 P带。缺氧组胞浆可见该蛋白表达, 而线粒体蛋白条带的表达则相应降低。与缺氧组相比大 小剂量维生素 以及 E大、小剂量 L-NBP 均可明显抑制线粒体细胞色素 C 的释放, 有非常显著性差异( P < 0.01)。 结论 慢性间断性缺氧能够诱导细胞色素C由线粒体至胞浆的释放和caspase-3 的激活。维生素 E 和 L-NBP 能够降低细胞色素C的释放及 caspase-3 的裂解激活。

左旋丁基苯酞对Aβ_(1-42)诱导的原代培养神经元Caspase-3的影响

目的观察左旋丁基苯酞对Aβ1-42原代培养海马及基底前脑神经元Caspase-3表达影响,并探讨其脑保护机制。方法运用细胞原代培养的方法培养大鼠基底前脑及海马胆碱能神经元并进行鉴定,用2μmol/L的Aβ1-42建立神经细胞损伤模型,用不同剂量左旋丁基苯酞处理48 h后,噻唑蓝(MTT)法测定细胞的存活率,免疫印记检测Caspase-3的含量变化,观察Aβ1-42对神经元的损伤及不同剂量的左旋丁基苯酞对神经元的影响。结果与正常组相比,Aβ1-42作用于基底前脑及海马神经元48 h后,存活率显著下降,Caspase-3增高(P<0.01),不同剂量左旋丁基苯酞能够显著增高神经元存活率,抑制Caspase-3表达(P<0.05),且以中、高剂量组的作用显著。结论Aβ1-42能够诱导原代培养神经元Caspase-3表达,左旋丁基苯酞能够降低Aβ1-42诱导的基底前脑和海马神经元Caspase-3的激活。

丁基苯酞通过激活PI3K/Akt/GSK-3β信号通路及其在局部脑缺血损伤脑梗死中的神经保护作用

目的探讨丁基苯酞(butylphthalide,NBP)对局部脑缺血损伤脑梗死的保护作用及在PI3K/Akt/GSK 3β信号通路的调节机制。方法将100只12~15周龄的SPF级Wistar雄性大鼠随机分为5组(n=20):假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、丁基苯酞组(NBP组)、P13K特异性抑制剂LY294002组(LY组)和丁基苯酞+LY294002组(NBP+LY组),采用大脑中动脉阻塞法构建大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,造模后第1天开始,NBP组、LY组、NBP+LY组分别腹腔注射10 mg/kg NBP、10 mg/kg LY和10 mg/kg NBP+10 mg/kg LY,注射剂量10μL,每天1次,连续给药7 d,Sham和Model组腹腔给予等量生理盐水。第7天给药30 min后对大鼠进行神经功能缺损程度(mNNS)评分,并采用磁共振成像法测量脑梗死体积,再用尼氏染色检测脑组织中神经元数损伤情况,同时在光镜下观察记录完整神经元数目,蛋白免疫印迹检测PI3K/Akt/GSK 3β信号通路中的Akt、P Akt、GSK 3β、P GSK 3β蛋白表达。结果与Sham组相比,Model组大鼠神经功能损伤评分明显升高,脑梗死体积明显增大,脑组织中完整的神经元数量及Akt、GSK 3β磷酸化水平明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);与Model组相比,NBP组神经功能损伤评分明显下降,脑梗死体积明显减小,脑组织中完整神经元的数量及Akt、GSK 3β磷酸化明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);LY组、NBP+LY组与Model组各指标相比组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论NBP可以激活缺血性脑梗死所致的PI3K/Akt/GSK 3β信号通路,从而减轻神经功能损害,发挥对局部缺血致脑梗死的保护作用。

3-(3′-羟基)丁基苯酞氨基酸酯衍生物的设计与合成

3-(3′-羟基)丁基苯酞是丁苯酞在体内的代谢产物,具有多种药理作用,可以作为一种新的活性成分应用于药物开发中。本文以甘氨酸、甲硫氨酸和亮氨酸为起始原料,经过Boc保护,再与3-(3′-羟基)丁基苯酞进行缩合,脱保护3步反应合成了3-(3′-羟基)丁基苯酞的氨基酸酯。以期提高水溶性和改善药代动力学性质,获得3-(3′-羟基)丁基苯酞的前药。

丁基苯酞对蒙古沙土鼠全脑缺血再灌注损伤后海马神经元的影响及Caspase-3表达变化

目的 探讨丁基苯酞（dl-3n-butylphthalide,NBP）对蒙古沙土鼠全脑缺血再灌注后海马组织Caspase-3表达的影响.方法 沙土鼠双侧颈总动脉夹闭10min再灌注,制备全脑缺血再灌注模型.沙土鼠随机分为三组：1）正常对照组（CON）;2）模型对照组（I/R）;3）NBP治疗组（NBP）.采用Nissl染色观察海马CA1区神经锥体细胞形态及数量的改变,通过蛋白印迹检测海马组织Caspase-3蛋白水平的变化.结果 正常对照组海马CA1区锥体细胞形态完整,细胞大而圆,尼氏体位于胞浆,深染;模型对照组海马CA1区锥体细胞排列紊乱,胞体缩小、变形、核固缩,并向四周扩散;NBP治疗组锥体细胞排列较整齐,细胞大而圆,尼氏体深染,但仍可见少量胞浆浓染.模型对照组与正常对照组比较锥体细胞数量明显减少,NBP治疗组与模型对照组比较锥体细胞数量明显增加,有显著性差异（P〈0.01）.蛋白印迹检测发现模型对照组与正常对照组比较海马组织Caspase-3蛋白表达明显上调,有显著性差异（P〈0.01）;NBP治疗组与模型对照组比较海马组织Caspase-3蛋白表达明显下调,有显著性差异（P〈0.01）.结论 丁基苯酞对海马区锥体细胞具有保护作用,可能与其下调Caspase-3的表达,抑制神经元凋亡有关.

左旋丁基苯酞对低糖氧造成神经元损伤的保护作用

目的探讨新药左旋丁基苯酞（1-NBP）对低糖低氧造成的神经细胞坏死和凋亡的保护作用，并从线粒体和细胞内钙角度对其可能的作用机制进行研究。方法：以低糖低氧造成原代培养神经细胞的损伤模型，采用Hoeehest 33824（Hoe）、Ppropidium iodide（PI）、Fluo-3／AM和Rhodamine-123（Rhod）对细胞进行荧光染色，分别测定不同损伤条件下神经细胞的坏死、凋亡、细胞内游离钙和线粒体膜电位的变化，并对1-NBP的保护作用进行观测。结果原代培养神经元的的坏死和凋亡的发生率在低糖氧处理3h后即出现明显升高，

丁基苯酞对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤及凋亡的作用

目的 探讨丁基苯酞对异丙肾上腺素诱导大鼠心肌损伤保护作用及抗凋亡机制.方法 SD大鼠48只,随机分为对照组（Control组,n=12）、异丙肾上腺素组（ISO组,n=12）、异丙肾上腺素＋Tween-80（丁苯酞溶媒）组（n=12）和异丙肾上腺素＋丁苯酞组（n=12）.7d后处死大鼠,测定血清CK-MB活性,TUNEL检测心肌组织细胞凋亡及Western Blot检测大鼠心肌caspase-3表达.结果 ISO组成功制备了心肌损伤模型.与Control 组相比,ISO组血清CK-MB活性明显增加,凋亡的心肌细胞增加,caspase-3的表达增加.丁基苯酞（NBP）能显著减轻异丙肾上腺素导致的心肌损害.与ISO组相比,ISO＋NBP组血清CK-MB活性降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,凋亡的心肌细胞减少,caspase-3的表达减少.结论 丁基苯酞对异丙肾上腺素引起的大鼠损伤心肌有保护作用,机制可能与其抗凋亡作用有关.

丁基苯酞通过磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B通路对局部脑缺血损伤脑梗死的保护作用

目的 观察丁基苯酞对局部脑缺血损伤引起的脑梗死的保护作用。方法 制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型（MCAO）,观察丁基苯酞对脑梗死率的影响,以及与磷酸肌醇3激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）通路的关系。结果 丁基苯酞（10、30mg/kg）给药后可以使MCAO大鼠的脑梗死率由41.2%降低至19.7%,神经功能评分由3.8分降低至2.6分,细胞角蛋白（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）的水平由5784 U/L和2997 U/L降低至2674 U/L和1615 U/L,并且引起磷酸化Akt（p-Akt）表达增加3倍和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶（Caspase）-3表达降低约3倍。而同时给予PI3K抑制剂LY294002后,可以完全拮抗丁基苯酞引起的MCAO大鼠脑梗死率降低（梗死率由19.8%升高至40.4%）、p-Akt表达的增加和Caspase-3表达的降低。结论 丁基苯酞通过激活PI3K/Akt通路对局部脑缺血损伤引起的脑梗死产生保护作用。

丁基苯酞对慢性脑缺血大鼠脑组织caspase-3表达的影响

目的 观察丁基苯酞(NBP)对慢性脑缺血大鼠脑组织中caspase-3表达的影响.方法 将大鼠随机分成对照组、模型组和治疗组,采用双侧颈总动脉结扎法建立大鼠慢性脑缺血模型,HE染色观察神经元形态学改变,免疫组化法观察各组大鼠大脑皮层和海马中caspase-3表达情况.结果 慢性脑缺血后,大鼠脑组织中caspase-3表达水平增高,经NBP治疗后,表达水平降低(P<0.05).结论 NBP可以通过下调慢性脑缺血组织中caspase-3的表达发挥神经保护作用.

川芎化学成分研究

目的 研究川芎化学成分。方法 利用硅胶柱层析分离 ,薄层纯化 ,分离川芎化学成分 ,经理化常数测定 ,波谱分析等鉴定结构。结果 共分得 7个化合物 ,分别为正十六烷酸 ( ) ,4,7-二羟基 - 3-丁基苯酞 ( ) ,大黄酚( ) ,咖啡酸 ( ) ,原儿茶酸 ( ) ,阿魏酸 ( )和胡萝卜苷 ( )。结论 化合物 为一新化合物 ,化合物 、 为首次从该植物中分得。

高纯度地瑞那韦乙醇盐的合成

以莱克酮为起始原料,合成关键中间体(3R,3aR,6aS)-羟基六氢呋喃-3-基(4-硝基苯)碳酸酯,其再与中间体4-氨基-N-(2R,3S)(3-氨基-2-羟基-4苯基-丁基)-N-异丁基-苯磺酰胺反应生成地瑞那韦,地瑞那韦加乙醇成盐并精制得到高纯度地瑞那韦乙醇盐,纯度达99.9%以上。

川芎调节血脑屏障通透性的作用及机制研究

目的探讨川芎Chuanxiong Rhizoma调节血脑屏障通透性的作用特点,并从紧密连接蛋白、外排蛋白表达、埃兹蛋白/根蛋白/膜突蛋白(ezrin/radixin/mesin,ERM)磷酸化水平变化的角度阐述影响血脑屏障通透性的机制。方法小鼠单次给予川芎提取物(5.8 g/kg)后iv不同相对分子质量(4×10^(3)、4×10^(4)、7×10^(4)、1.5×10^(5))的异硫氰酸荧光素-葡聚糖(fluorescein isothiocyanate-dextran,FITC-dextran),测定给药后0、0.5、1、2、4、6、8 h脑组织中FITC-dextran的荧光强度,定量描述川芎对体内血脑屏障通透性的影响。建立b End.3细胞单培养血脑屏障模型,给予川芎单体成分洋川芎内酯A、洋川芎内酯H、阿魏酸、洋川芎内酯I、藁本内酯、欧当归内酯A、4-羟基-3-丁基苯酞,比较相同作用时间内血脑屏障模型中荧光素钠(fluorescein sodium,Na-F)的表观渗透系数(apparent permeability coefficient,Papp),确定各成分开放血脑屏障的效应。采用Western blotting检测川芎提取物给药前后小鼠脑组织及洋川芎内酯I给药b End.3细胞中闭锁小带蛋白1(zonula occluden-1,ZO-1)、闭锁蛋白(Occludin)、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、血管内皮细胞钙黏合素(VE-cadherin)、p-ERM/ERM的表达水平。结果川芎提取物给药0.5 h后可显著增加小鼠脑组织中FITC-dextran(相对分子质量4×103)的透过量(P<0.001),作用强度随给药时间延长减弱,但对相对分子质量4×10^(4)、7×10^(4)、1.5×10^(5)的FITC-dextran透过量无影响。在脑组织中,川芎提取物给药0.5 h时下调ZO-1、Occludin蛋白表达(P<0.05),上调P-gp蛋白表达;给药2 h时上调ZO-1、Occludin蛋白表达(P<0.05、0.01),下调P-gp蛋白表达(P<0.01);给药8 h时,ZO-1、Occludin、P-gp的蛋白表达水平与对照组无明显差异。不同浓度(1、10、100μmol/L)的洋川芎内酯I、洋川芎内酯A、洋川芎内酯H、阿魏酸8 h给药时间内显著增加Na-F透过血脑屏障模型的Papp,其中洋川芎内酯I的促透效应最强。洋川芎内酯I(10μmol/L)给药bEnd.3细胞0.5 h时可下调Occludin、ZO-1、p-ERM/ERM的蛋白表达(P<0.01),给药1 h时上调Occludin、ZO-1、p-ERM/ERM的蛋白表达(P<0.01),给药8 h时Occludin、ZO-1、p-ERM/ERM的蛋白表达水平与对照组无明显差异。结论川芎在一定程度上可增加血脑屏障通透性,且该作用具有时效性,其机制与调节Occludin、ZO-1、P-gp的蛋白表达及ERM磷酸化水平有关。

HPLC法同时测定川芎药材中3种有效成分的含量

目的:建立HPLC法同时测定川芎药材中阿魏酸、6,7-二羟基藁本内酯和4-羟基-3-丁基苯酞三组分含量的方法。方法:采用SHINWA-ODS(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇(A)-0.1%醋酸溶液(B),梯度洗脱(0～20min,A:30→60;20～33min,A:60→70);流速:1.0mL·min-1;检测波长:DAD多波长检测,阿魏酸为278nm、6,7-二羟基藁本内酯320nm、4-羟基-3-丁基苯酞254nm。结果:三组分的检测范围分别为阿魏酸:7.15～71.50ng·mL-1(r=0.9999)、6,7-二羟基藁本内酯:39.90～399.00ng·mL-1(r=0.9997)、4-羟基-3-丁基苯酞:0.29～2.88ng·mL-1(r=0.9998);平均回收率(n=9)分别为阿魏酸103.2%(RSD=1.9%);6,7-二羟基藁本内酯102.3%(RSD=1.7%);4-羟基-3-丁基苯酞102.2%(RSD=2.0%)。结论:该法操作简单,结果准确,重现性好,为各多组分评价不同产地川芎药材的质量提供了可靠的分析方法。